פרוטוקול קפדני מאוד נדרש, כך שנוכל להשוות באופן תקף את ההכנות מאותם בעלי חיים או מבעלי חיים או עורקים שונים בנוכחות או היעדר השומן המקיף אותם או בנוכחות או היעדר אנדותל. היתרון העיקרי של טכניקה ניסיונית זו הוא שאנחנו יכולים להשוות טבעות של אותו עורק במצב איזומטרי ובכך להסיק מסקנות בתוקף לגבי ההשפעה של הגורמים הניסיוניים שאנו חוקרים. פרוטוקול זה מספק תובנות על אפנון של היענות כלי הדם על ידי רקמות שומן כלי דם של בעלי חיים שונים מהונדסים גנטית.
תפקוד לקוי של רקמת שומן מייצג גורם סיכון עצמאי עבור יתר לחץ דם וסיבוכים קרדיווסקולריים הקשורים שלה. המיאוגרף שלנו כרוך בצעדים מורכבים רבים הדורשים זהירות רבה בכל נקודה כדי למנוע פגיעה בכלי השיט, במיוחד במהלך ההרכבה, ולהבטיח כי הכלי מגיב כראוי לגירויים שונים. התחל הליך זה עם הכנות ניתוק של טבעות עורקים mesenteric כמתואר בפרוטוקול הטקסט.
הפעל את המחשב ופתח את תוכנת הקלטת הנתונים. שמור את הניסוי כקובץ נתונים של תרשים מעבדה בשם חדש כדי להימנע מהחלפת קובץ ההגדרה המקורי. פתח את חלון הגדרות הנורמליזציה והגדר את גורם K לחלון.
קבל את ערכי ברירת המחדל עבור כיול IPs, לחץ יעד, זמן ממוצע מקוון ותנוכי השהיה. לחץ על אישור כדי לשמור את ההגדרות. בחר ערוצי עניין והקלט את קוטר החוט, נקודות הקצה של הרקמות וקריאת המיקרומטר הראשונית בחלון הנורמליזציה.
כדי להתחיל את הליך הנורמליזציה, להחיל את המתיחה הפסיבית הראשונה על כלי הדם על ידי הפיכת בורג מיקרומטר נגד כיוון השעון. לאחר המתנה של שלוש דקות עד שהספינה תתייצב, הזינו את קריאת המיקרומטר החדשה בחלון הנורמליזציה. מתח הקיר מחושב באופן אוטומטי ומוצג כנקודה בגרף.
לאחר כל מתיחה פסיבית, החלף את מאגר קרבס הבקרה עם קרב אשלגן גבוה iso-osmotic המכיל 150 מילימולר אשלגן כלורי. כאשר ההתכווצות מגיעה לרמה של כשלוש דקות, יש לתעד את הכוח הפעיל על ידי חיסור הכוח הפסיבי בכל מתיחה מהכוח המופעל באשלגן. חשב את מתח הקיר, כמו גם את ערכי ההיקף הפנימיים.
הסר את מצב אשלגן גבוה על ידי החלפת חיץ אשלגן גבוה עם חיץ קרבס טרי. יש לחזור על הכביסה במשך שלוש פעמים במשך חמש דקות. חזור על שלבי הנורמליזציה על-ידי גרימת מתיחות פסיביות ואחריהן התכווצות אקטיבית בתורות חלופיות עד שהמתח הפעיל יתחיל לרדת.
לשטוף ביסודיות את חיץ קרבס אשלגן גבוה לצייד את ההכנות עוד 30 עד 45 דקות. אפס את המתחים הבסיסיים לאפס כך שרק תגובות חוזיות פעילות יירשמו במהלך הניסוי הבא. הכן והכן טבעות עורקים משויכות כמתואר בפרוטוקול הטקסט מהמקטעים הסמוכים של כל עורק.
הכן טבעת עורקים אחת עם PVAT שלם והשני עם PVAT הוסר. לאחר הנורמליזציה, יש ליצור מראש את מקטעי העורקים עם מאגר אשלגן קרבס גבוה על ידי הוספת תספורת אשלגן כלורי 115 מילימולארית לתא המכיל קרבס. לאחר התכווצות לתקופת הרמה, לשטוף את אשלגן גבוה ולהחליף את החיץ עם חיץ קרבס אוויר טרי.
יש לחזור על הכביסה שלוש פעמים במשך חמש דקות. חזור על גירוי אשלגן כלורי וכביסה שלוש פעמים ולתרשם את התגובה מתכווצת מקסימלית אשלגן כלורי על ידי חיסור המתח הבסיסי מן המתח עקב גירוי אשלגן כלורי. לאחר ההתכווצות והכביסה האחרונה, מלאו מחדש את התא עם חיץ קרבס חם ומוצף ומאפשרים העורק להתאושש במשך כ -30 דקות לפני ביצוע המשימה הבאה.
לכל תא, להוסיף כמויות מצטברות של פנילפרין כדי לגרום לעליות תלויות ריכוז ומתח איזומטרי של ההכנות הקלות. לאחר הוספת המנה האחרונה של אגוניסט, לשטוף את התרופה ביסודיות ולמילוי התא עם חיץ קרבס טרי. התווה את התגובות תלויות הריכוז כאחוזים הולכים וגדלים של אשלגן כלורי המושרה התכווצויות מקסימליות.
כדי להעריך את התרומה של תחמוצת החנקן, דגירה ההכנות עם מעכב תחמוצת החנקן סינתאז L-NAME במשך 30 דקות לפני הוספת פנילפירין. לביצוע עקומת תגובת ריכוז שנייה ברצף, לשטוף את התא לחלוטין שוב ושוב כדי להסיר את כל האגוניסטים הקודמים עד שלא נצפו שינויים נוספים בטון. נורמליזציה של מערכת היחסים מתח אורך בוצעה עבור עורקים mesenteric מבודד מודלים העכבר מוזן עם צ'או סטנדרטי או דיאטה עתירת שומן.
מערכת יחסים פסיבית של מתח אורך הוקמה על ידי מתיחה מצטברת של מקטעי העורק עד שהושג היקף פנימי המתאים ל -100 מילימטרים של לחץ טרנסמורלי כספית, או IC100. לאחר כל מתיחה, 115 מילימולר אשלגן כלורי הוחל כדי לעורר התכווצויות. עקומות המתח באורך הפעיל הותוו מנתוני הכוח הפעיל בציר ה- Y וערכי ה- IC המחושבים מנתוני המיקרומטר בציר ה- X.
ערך IC השוכן בתוך מישור השיא הוא IC1. גורם הנורמליזציה, K, חושב כיחס של IC1 ו- IC100, אשר לאחר מכן ניתן להחיל על דגימות מאותו סוג כלי בניסוי הבא. מוצגות כאן הקלטות פלט של תגובות vasoconstrictor לפנילפרין בעורקים mesenteric עם או בלי PVAT שמסביב.
ריכוזים מצטברים של פנילפירין יושם כדי לעורר את התכווצויות של עורקים mesenteric שנאספו מ 16 שבועות adiposet עכבר אחד. התגובות מתכווצים נרשמו ומחושבים כאחוז של 150 מילימולר אשלגן כלורי המושרה התכווצות מקסימלית. האזור מתחת לעקומות ההתכווצות התווה להשוואה.
שים לב כי PVAT מ adiposet עכברים אחד עורר השפעה נגד התכווצות על התגובה פנילפירין. בעת קבלת התכווצויות הנגרמות על-ידי KCL, התגובות חייבות להיות יציבות ויציבות. אם התגובה עדיין גדלה לאחר שלושה ניהולים מצטברים של KCL, ייתכן שיהיה צורך בגירוי KCL.
כדי להשיג תנאים אופטימליים של המתחים, צעד הנורמליזציה חשוב מאוד, כמו זה קובע את הכוח לפתוח את כלי הדם. אם זה לא נעשה כראוי, זה ישפיע על כל הניסוי. פרוטוקול זה יכול להיות מיושם על הגדרות אחרות בנוסף התכווצות או הרפיה הנגרמת על ידי פנילפרין.
לדוגמה, בנוכחות או היעדר רקמת שומן כלי דם, עצבים אוטונומיים או אנדותל. באמצעות פרוטוקול זה, חוקרים יכולים לבחון כלי דם קטנים ממודלים של בעלי חיים חולים בתנאים פתופיזיולוגיים שונים, כגון השמנת יתר, סוכרת ומחלות לב וכלי דם.
