השתלת איון היא אחת הגישות המבטיחות ביותר לטיפול בסוכרת מסוג I. והחיפוש אחר אתר מתאים להשתלת איון נמשך. השתלת איון לרקמת השומן הלבנה התת עורית התת עורית היא שיטה פשוטה אך יעילה שעשויות להיות לה השלכות קליניות.
אקסטרפולציה של הליך זה למרפאה עלולה להוביל להתפתחות תרופה לחולי סוכרת מסוג I. שיטה זו יכולה לספק תובנה על השתלת איון קליני כמו לשוני נקבע לא להיות אתר אידיאלי עבור חריטה איון. חשוב לעקוב בזהירות אחר כל שלב של ההליך, במיוחד צעדים מרכזיים, כגון עיכול הלבלב.
הדגמה חזותית תסייע לחוקרים חדשים בטכניקה כדי לקבוע טוב יותר כיצד לבצע את בידוד איון ואת transmutation. לקציר איון, לרסס תחילה את הפרווה של עכבר שחור C57 בן 10 שבועות עם 75% אתנול, ולמלא מזרק חמישה מיליליטר עם פתרון קולגנס מוכן טרי. לצייד את המזרק עם מחט עיקול מחודדת קהה 32-מד, ולמקם את העכבר בתמקם supine על שקית קרח.
השתמש מספריים עיניים מחודד ישר לעשות פתח רוחבי בעור של אזור הערווה, ולהרחיב את החתך לכיוון הראש של החיה. פתח לחלוטין את הבטן באמצעות חתך V מאזור הערווה לתהליך xiphoid, ולהזיז את הכבד כדי לחשוף את כיס המרה ואת כל אורך צינור המרה המשותף. לאחר מכן השתמשו במהדק כלי דם כדי לסגור את פתח התריסירה של צינור המרה המשותף וחותכים פתח קטן בכיס המרה.
Cannulate צינור המרה המשותף דרך הפתח עם מחט חיסון שהוכן בעבר, ולהזריק כשני מיליליטר של פתרון קולגן לתוך הלבלב. כאשר כל הקולגנס נמסר, השתמש בשני זוגות של פינצטה מיקרו פולשנית כדי להפריד את הלבלב המופרך מהמעיים, הקיבה והטהר, והניח את הלבלב לתוך צינור חרוט 50 מיליליטר על קרח. לאחר איסוף כל הדגימות, הוסיפו 100 מיקרוליטרים של DNASE I לכל לבלב לצינורות 50 מיליליטר ורעידות נמרצות כל צינור כ-40 פעמים על פני תקופה של 10 שניות לפני שהניחו את הרקמות באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס במשך שלוש עד חמש דקות עם רעידות מתונות.
בסוף הדגירה, להוסיף עד נפח סופי של 50 מיליליטר של פתרון להפסיק לעצור את העיכול. והדופק צנטריפוגה הצינורות למהירות של 750 פעמים G בארבע מעלות צלזיוס לפני במהירות לעצור את הצנטריפוגה. לאחר השלכת supernatants, לשטוף את כדורי פעמיים 15 כדי 25 מיליליטר של פתרון להפסיק לשטוף תחת אותם תנאי צנטריפוגה כפי שהוכח רק.
לאחר הכביסה השנייה, בריכה שלוש כדורי לצינור לתוך צינורות חרוט חדשים 50 מיליליטר. ולתלות מחדש את תאי הלבלב בנפח כולל של עשרה מיליליטר של היטופק 1119. הבא בזהירות להוסיף חמישה מיליליטר של Histopaque 1077 לאורך הצד של כל צינור, ואחריו חמישה מיליליטר של HBSS.
להפריד את התאים על ידי צנטריפוגה ולהשתמש פיפטה פסטר חמישה מיליליטר כדי לאסוף את איונים מממשק HBSS Histopaque 1077. בריכת האיים בצינור חרוט חדש 50 מיליליטר בנפח סופי של 50 מיליליטר של פתרון עצור עבור צנטריפוגה הדופק, ולהשליך את העל טבעי. תבזבזו מחדש את גלולת הכדור ב-30 מיליליטר של פתרון עצירה טרי לצנטריפוגה של דקה אחת, והשקיעו מחדש את האיים ב-30 מיליליטר של מדיום תרבותי.
דקאנט את איונים לתוך אחד 10 ס"מ תבשיל תרבות אור הדוק לכל צינור. ומ מניחים את המנה מתחת למיקרוסקופ הסטריאו. בעזרת 200 טיפים לטעינת ג'ל מיקרוליטר, בחרו ידנית את איונים כדוריים לבנים מהתמיסה.
הצבת האיים לתוך צלחת תרבות תאים מטופלת המכילה 10 מיליליטר של מדיום תרבות כפי שהם נקצרים. בדוק את טוהר האיים שנבחרו ביד על ידי כתמי dithizone תחת מיקרוסקופ אור. ולזהות את הכדאיות של איונים על ידי פלואורסין ניקוד רדידם יודיד מכתים תחת מיקרוסקופ פלורסנט.
ואז תרבות האיים המבודדים בתרבות רעננה בינונית ב 37 מעלות צלזיוס ב 95% אוויר ו 5% פחמן דו חמצני עד ההשתלה. החל בימים 3 ו -4 לאחר אינדוקציה סוכרת, לנקב את וריד caudal של כל סטרפטוזוטוסין מוזרק שמונה שבועות זכר C57 שחור שישה עכבר סביב 10:00.m. כדי לאסוף דגימת דם מכל חיה הנמען.
השתמש במכשיר ניטור גלוקוז בדם בסיסי כדי לקבוע את רמת הגלוקוז בדם ללא צום של כל עכבר ולאחר מכן להוסיף את הדם על רצועות בדיקה בודדות. כאשר בעל חיים הוכיח רמת גלוקוז בדם של לפחות 20 מילימול לליטר יומיים ברציפות, לשקול ולסמן את העכבר המטופל ולאשר חוסר תגובה רפלקס הדוושה בבעלי החיים הרדמה. מניחים aliquot של הידרוג'ל ממינוס 20 מעלות צלזיוס אחסון על קרח להפשרה.
ולהעביר 450 עד 500 שווה ערך איון לכל נמען לתוך צינור צנטריפוגה סטרילי 1.5 מיליליטר המכיל 200 microliters של בינוני לכל צינור על קרח. ספוגית את האזור המגן השמאלי של הנמען עם 75%אתנול ולמקם את העכבר בתדר supine. לתקן את הגפיים עם סרט כירורגי, ולהשתמש קוצץ כדי להסיר את השיער סביב האתר הכירורגי.
ספוגית את האזור הכירורגי עם יודפור ולעשות חתך אנכי בעור חיטוי. זהה את העורק והווריד האפיגמטריים הנחותים בתוך ISWAT וצור כיס קטן מעל כלי הדם. מעים את איונים על ידי צנטריפוגה ולהסיר על טבעי ככל האפשר.
מוסיפים 20 מיקרוליטרים של הידרוג'ל מופשר לכל צינור, ומערבבים בעדינות את האיים, דואגים להימנע מבועות. כאשר הושגה השעיה הומוגנית, השתמש בקצה פיפטה 200 מיקרוליטר כדי לספק בזהירות את כל תערובת הידרוג'ל איון מצינור אחד לכיס. כאשר הידרוג'ל התגבש לחלוטין, להוסיף 20 microliters של צפלוספורין לאתר ההשתלה, ולסגור את השריר והעור עם תפר כירורגי מתמשך 5-0.
לאחר מכן מניחים את הנמען בכלוב נקי על כרית תרמית עם ניטור עד ל recumbency מלא. לאחר עיבוד איון המורין כפי שהוכח, איי המורין המבודדים יהיו טהורים מספיק להשתלה. יש להשתמש רק באזורים מבודדים בעלי כדאיות גבוהה להשתלה.
לאחר ערבוב יסודי של שתלי איון עם הידרוג'ל, השתל יכול להיות מושתל באתר ISWAT. לאחר כחודש של השתלה לתוך ISWAT, שתלי איון להפוך היפרגליקמיה בעוד משקל הגוף של העכברים הנמען גדל בהדרגה. בשעה 100 ימים לאחר ההשתלה, הסרת השתלים גורמת לעלייה מיידית בטמפרטורה של 10:00 .m.
רמת גלוקוז בדם שאינה בצום. ניתוח היסטולוגי בנקודת זמן זו, מגלה כי שתלי איון נשארו שלמים. וכתמים חיסוניים של אינסולין וגלוקגון מצביעים על כך שגם האיים המושתלים מתפקדים ב-100 ימים לאחר ההשתלה.
היזהר לא לנער את תאי הלבלב המוליכים חזק מדי או אחר היכולת של האיים המתקבלים ייפגע. איונים מבודדים ניתן להשתיל תחת קפסולת הכליה כפקד כדי להשוות את ההשפעות של ההשתלה המבודדת לתוך רקמת שומן לבן תת עורית inguinal באתר. ההליך יוסיף חניכה של ניסויים קליניים של השתלת איון לאתרים אחרים מלבד הכבד.
