The authors have no acknowledgements.

הערה: כל הנהלים בבעלי החיים בוצעו באישור הוועדה המוסדי הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) מאוניברסיטת סינסינטי ובהתאם למדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה מהמכון הלאומי לבריאות (NIH פרסום מס . 85-23, מתוקן 1996). 1. להרדים ולעקר את העכבר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר בdropbox המכיל מינון supratheraputic של isoflurane ולאפשר לשאוף להשפעה. לאחר העכבר הוא מורדמים, להסיר מהתיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cervically לנקוע כאמצעי שני של המתת חסד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את פני השטח החיצוניים של העכבר על ידי ניקוי את החיה עם אתנול 70%. </li></ol> 2. זיהוי ובידוד של שלושה בסיס מיון שומן שונה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמות שומן חום בידוד (BAT): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהפרווה היא רטובה מטיהור האלכוהול כדי לסייע בחיתוך דרך Laye אפידרמיס ועוריrs. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את העכבר במצב שכיבה עם גב על השולחן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפוס את העור ממש מתחת לסרעפת עם מלקחיים, מעלית ולחתוך עם מספריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך רוחבי סביב ההיקף של העכבר כדי לחשוף את הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את מחסן BAT בצורת פרפר על ידי degloving המחצית העליונה של העכבר. החזק את הנספחים והבטן התחתונים ביד אחת ומושך את העור כלפי מעלה, אל הראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון את העכבר, כך שהוא נמצא בעמדה נוטה על השולחן. היזהר שלא לזהם את המחסן החשוף עם שיער. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכשירים נקיים כירורגית ושינוי לזוג טרי של כפפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את השכמות ומחסן מקביל. מוציא בזהירות את כל שומן לבן שטחי על גבי הפרפר ולאחר מכן לנתח את הפרפר של שומן חום interscapular. להיות זהיר, כדי למנוע את השריר קשור קשר הדוק עם שומן החום. הערה: השימוש במיקרוסקופ לנתיחה מומלצת להסרת wשומן היט, כמו גם בהפרדה של שומן החום מעצם השכמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להסיר את שומן המחסן ולהעביר לצינור microcentrifuge 2 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם RNA או חלבון הוא להיעקר, להקפיא את הרקמה על ידי טבילה בחנקן נוזל חנות ב -80 ° C. להקפיא את המדגם בבת אחת כדי למנוע השפלה. אם culturing, לכסות את הרקמה בDMEF-12 ולהגדיר על קרח עד שכל הדגימות שנאספו לתרבות (מידע נוסף). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידוד של רקמה התת עורית שומן (SQ), רקמות שומן לבן דיפו (WAT): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשים על זוג טרי של כפפות כדי לא לזהם צולב בין מחסני שומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את המפשעה, מחסני SQ משולשים על ידי דה-gloving המחצית התחתונה של העכבר. החזק את הנספחים ובית החזה העליונים ביד אחת ומושך את העור כלפי מטה לכיוון הרגליים ביד השנייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון את העכבר במצב שכיבה בזמן נזהר שלא לזהם את המחסן החשוף עם שיער. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> surgica הנקימכשירי l ושינוי לזוג טרי של כפפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות לנתח המשולשים של שומן SQ. היזהר שלא לזהם את הדגימה עם שריר, שומן השכן, בלוטות החלב או על ידי חיתוך כל כלים ולזהם את דגימת דם. הערה: השימוש במיקרוסקופ לנתיחה מומלצת אם גבולות אינם מוגדרים באופן ברור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר מחסני שומן ולהעביר עד 2 מיליליטר צינורות microcentrifuge. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם RNA או חלבון הוא להיעקר, להקפיא את הרקמה על ידי טבילה בחנקן נוזל חנות ב -80 ° C. להקפיא את המדגם בבת אחת כדי למנוע השפלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור מכתים, לתקן או להטביע באוקטובר אם culturing, לכסות את הרקמה בDMEF-12 ולהגדיר על קרח עד שכל הדגימות שנאספו לתרבות (מידע נוסף). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידוד של אשכי שומן קרבי שומן רקמות (מע&quot;מ) ולבן שומן רקמות (WAT) דיפו: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשים על זוג טרי של כפפות כדי לא לזהם צולב בין מחסני שומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם מדעssors, לחתוך את הצפק רוחבי, ישירות מתחת לסרעפת. חותך את הצפק מהסרעפת לאמצע פי הטבעת coronally לחשוף אברי בטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את האשכים או שחלות ולזהות את רקמת שומן הלבנה המצורפת, הידועה בשם שומן epididymal בזכרים או שומן אשכים אצל נקבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכשירים נקיים כירורגית ושינוי לזוג כפפות חדש </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות לנתח שני מחסני שומן epididymal מהאשכים, epididymides, וdeferentia Vasa. או אם נקבה, לנתח בזהירות את שני רפידות שומן האשכים מהשחלות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר מחסני שומן ולהעביר אותם ל- 2 צינורות microcentrifuge מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם RNA או חלבון הוא להיעקר, להקפיא את הרקמה על ידי טבילה בחנקן נוזל חנות ב -80 ° C. להקפיא את המדגם בבת אחת כדי למנוע השפלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור מכתים, לתקן או להטביע באוקטובר אם culturing, לכסות את הרקמה בDMEF-12 ולהגדיר על קרח עד שכל הדגימות שנאספו לתרבות (מידע נוסף). </li&gt; </ol></li></ol> 3. בידוד של רקמות שומן perivascular (PVAT) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידוד של הלב: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את העכבר במצב שכיבה עם נספחים העליונים ותחתונים מורחבים כלפי חוץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נספחים מאובטחים באמצעות קלטת כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מיצוב העכבר כמפורט לעיל, ליצור מתח על ידי ההרמה על תהליך xiphoid עם מלקחיים. חותך אופקי דרך הסרעפת, חושף את החלק התחתון של חלל בית החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוך שמירה על מתח, על ידי ההרמה על תהליך xiphoid, לחתוך דרך בית החזה superiorly לכיוון הראש, רק לצד של עצם החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרים את כלוב הצלעות רק נחותה עצם הבריח, ולחתוך לאורכו הנחותים של עצם הבריח לעבר הבית השחי בשני הכיוונים. חלל בית החזה ובתכניו (לב, ריאות, וכו &#39;) צריכים עכשיו להיות ברור לעין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את חלל בית החזה של דם ונוזל זרים באמצעות ga סטריליuze לספוג את הנוזל. אם איברים או כלי איסוף הקפידו שופע (מידע נוסף). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהאזור מנוקה של נוזל, לחתוך את כלי הסמפונות ומצרפים להסיר את הריאות, המאפשר חשיפה טובה יותר של הלב. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לוקליזציה ורקמות כריתה של אבי העורקים perivascular השומן (PVAT): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את האיברים הבאים כלזהות טוב יותר את החלקים הנחותים של אב העורקים: כבד, קיבה, טחול, לבלב, מעי, ומעי גס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראשית תתחיל עם זיהוי של הקיבה והוושט. חותך את הוושט בצומת גסטרו-הוושט כדי לשחרר את הבטן מהגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב הבא, לזהות את המעיים ולפדר שמסביב. לחתוך באופן שטחי דרך לפדר, כפי שהוא נמצא קרוב מאוד לחלק הכליות של אב העורקים, ואז &quot;להפעיל את המעיים.&quot; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את המעי הגס לשחרר קרוב לפי הטבעת ככל האפשר. לפיכך, לשחרר את הקיבה, המעי ומעי גס מהעכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Reלהזיז את הקיבה, מעי, מעי גס, הלבלב וטחול על ידי חיתוך דרך לפדר המצרף וכלי דם. הלבלב והטחול צריך לבוא בחינם עם הקיבה, המעי ומעי גס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הכבד על ידי חיתוך דרך ורידי הכבד ומצרף לפדר, להסיר את כל האונות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את שכבת שומן הקרביים ומקיף את הכליות. השאר את הכליות מחוברים לאב העורקים בvivo לשמש כסמנים גיאוגרפיים למגזרים שונים של אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את האזור עם סטרילי 1X PBS ולהסיר את כל הנוזל על ידי קליטה עם גזה סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מיקרו המספריים ומיקרו-מלקחיים, להפריד את אב העורקים מזיקתו לגב עמוד השדרה והקובץ המצורף גחונו לוושט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד את אב העורקים על ידי ביצוע וניתוק אב העורקים האורך של אב העורקים היורדים מהמוצא בלב להסתעפות באזור הכסל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לזהות ולבודד את כלי subclavian. לבודד הכלים האלהמהצוואר ועד שורש אב העורקים לחשוף טוב יותר לצומת אב העורקים ושורש בלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את בלוטת התימוס ואז לחתוך את עורק brachiocephalic, עורק התרדמה המשותף שמאל, ועורק subclavian שמאל, המאפשר תנועה של הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסיוע מיקרוסקופ לנתיחה, להציג את שכבת perivascular רקמת שומן (PVAT) המקיפה את אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקיטת זהירות רבה שלא לצבוט או לסחוט PVAT, משוך בעדינות את דרך PVAT מאב העורקים עם מיקרו-מלקחיים. בעדינות לחתוך את הקובץ המצורף של PVAT לאב העורקים עם מיקרו המספריים החל משעת אזור בית החזה פשוט מעולה למקום שבי הסרעפת ממוקמת. הערה: מיקרוסקופ לנתיחה מומלץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על תהליך זה לכל האורך של אב העורקים, שסיים באזור אב העורקים infrarenal, הנמצא רק מעולה להסתעפות הכסל של כלי השיט של אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם PVAT קשת אב העורקים הוא רצוי, השתמש באותה השיטה כדי להסיר את PVAT מג פחותיםurvature של הקשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח דגימות PVAT לתוך 2 מיליליטר צינור microcentrifuge (ים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם RNA או חלבון הוא להיעקר, להקפיא את הרקמה על ידי טבילה בחנקן נוזל חנות ב -80 ° C. להקפיא את המדגם בבת אחת כדי למנוע השפלה. אם culturing, לכסות את הרקמה בDMEF-12 ולהגדיר על קרח עד שכל הדגימות שנאספו לתרבות (מידע נוסף). הערה: מחסני שומן נוספים לשקול אם מעוניין בניתוח מחסן שומן מקיף כוללת: retroperitoneal, mesenteric, omental, קרום הלב וpopliteal. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Ogden, C. L., Carroll, M. D., Kit, B. K., Flegal, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+obesity+in+the+United+States,+2009-2010.">Prevalence of obesity in the United States, 2009-2010.</a> NCHS Data Brief. 82, 1-8 (2012).</li><li>Flegal, K. M., Carroll, M. D., Kit, B. K., Ogden, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+obesity+and+trends+in+the+distribution+of+body+mass+index+among+US+adults,+1999-2010.">Prevalence of obesity and trends in the distribution of body mass index among US adults, 1999-2010.</a> 307 (5), 491-497 (2012).</li><li>Cawley, J., Meyerhoefer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+medical+care+costs+of+obesity:+an+instrumental+variables+approach.">The medical care costs of obesity: an instrumental variables approach.</a> Journal of Health Economics. 31 (1), 219-230 (2012).</li><li>Marder, W., Chang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Childhood+Obesity:+Costs,+Treatment+Patterns,+Disparities+in+Care,+and+Prevalent+Medical+Conditions.">Childhood Obesity: Costs, Treatment Patterns, Disparities in Care, and Prevalent Medical Conditions.</a> Thomson Medstat Research Brief. , (2006).</li><li>Cortez, M., Carmo, L. S., Rogero, M. M., Borelli, P., Fock, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-fat+diet+increases+IL-1,+IL-6,+and+TNF-&#945;+production+by+increasing+NF-&#954;B+and+attenuating+PPAR-&#947;+expression+in+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells.">A high-fat diet increases IL-1, IL-6, and TNF-&#945; production by increasing NF-&#954;B and attenuating PPAR-&#947; expression in bone marrow mesenchymal stem cells.</a> Inflammation. 36 (2), 379-386 (2013).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Hung, C. M., Sparks, C. A., Tang, Y., Li, H., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTEN+loss+in+the+Myf5+lineage+redistributes+body+fat+and+reveals+subsets+of+white+adipocytes+that+arise+from+Myf5+precursors.">PTEN loss in the Myf5 lineage redistributes body fat and reveals subsets of white adipocytes that arise from Myf5 precursors.</a> Cell Metab. 16 (3), 348-362 (2012).</li><li>Sethi, J. K., Vidal-Puig, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thematic+review+series:+adipocyte+biology.+Adipose+tissue+function+and+plasticity+orchestrate+nutritional+adaptation.">Thematic review series: adipocyte biology. Adipose tissue function and plasticity orchestrate nutritional adaptation.</a> J Lipid Res. 48 (6), 1253-1262 (2007).</li><li>Aarsland, A., Chinkes, D., Wolfe, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+and+whole-body+fat+synthesis+in+humans+during+carbohydrate+overfeeding.">Hepatic and whole-body fat synthesis in humans during carbohydrate overfeeding.</a> Am J Clin Nutr. 65 (6), 1774-1782 (1997).</li><li>Park, A., Kim, W. K., Bae, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinction+of+white,+beige+and+brown+adipocytes+derived+from+mesenchymal+stem+cells.">Distinction of white, beige and brown adipocytes derived from mesenchymal stem cells.</a> World J. Stem Cells. 6 (1), 33-42 (2014).</li><li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beige+adipocytes+are+a+distinct+type+of+thermogenic+fat+cell+in+mouse+and.">Beige adipocytes are a distinct type of thermogenic fat cell in mouse and.</a> 150 (2), 366-376 (2012).</li><li>Giralt, M., Villarroya, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White,+brown,+beige/brite:+different+adipose+cells+for+different+functions.">White, brown, beige/brite: different adipose cells for different functions.</a> Endocrinology. 154 (9), 2992-3000 (2013).</li><li>Casteilla, L., P&#233;nicaud, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling:+factors+in+selection+and+depot+specificity.">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods Mol. Biol. 456, 23-38 (2008).</li><li>Grant, R., Youm, Y. H., Ravussin, A., Dixit, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+adipose+tissue+leukocytosis+in+obesity.">Quantification of adipose tissue leukocytosis in obesity.</a> Methods Mol. Biol. 1040, 195-209 (2013).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests or other conflicts of interest.

השמנת יתר יכול להוביל למארח גדול של תחלואות וההבנה המלאה של התפקיד שממלא שומן אינו מובן במלואו; מחקר לכן המשיך בתחום השומן הוא הכרחי. מודלים של בעלי חיים, במיוחד מודלים עכבריים הם אידיאליים למחקר ראשוני בהתקדמות של מחלות ובדיקות של טיפולי תרופות פוטנציאליים. בשימוש במודלים אלה, בידוד וכריתה של מחסני שומן מדויקים הוא כלי חשוב וההכרחי ביותר במחקר של פתולוגיה של מחלות שומן מושפעת. בספרות הקיימת לגבי מחסני שומן, יש כמות נכבדת של ספרות לגבי התנהגות חילוף חומרים ווריאציה בין מחסני שומן, כמו גם במקומות אנטומיים שלהם. עם זאת, יש כמה שמספק שיטה לעומק על איך למקם במיוחד, לזהות, ולבודד מחסנים אלה. בהתבסס על הסקירה של שיטות בידוד הנוכחיות של שומן, יש קבוצה קטנה של t פרוטוקוליםכובע לספק מתודולוגיה על איך לבודד את מחסנים אחד או שניים בכל פעם. עם זאת, טכניקה מדויקת שמאפשרת בידוד של מחסנים מרובים עם כמות מינימאלית של נתיחה וזיהום, כמו גם כתובות שיטות שונות של לימוד הדגימות שנאספו היא ייחודית לפרוטוקול זה 13-14. בתוך מתודולוגיה זו, ישנם מספר צעדים שהם חשובים וחיוני לבידוד וטוהר של המדגם. ניקוי כלים, כפפות ומשטחים לעתים קרובות כדי להסיר שיער ומזהמים הוא צעד הכרחי כדי להימנע מזיהום המחסן. בעת חיתוך העור רוחבי סביב ההיקף של העכבר כדי לחשוף את הצפק לdegloving, הוא חיוני, כדי למנוע קיצוץ עמוק מדי. חיתוך הצפק יעשה degloving קשה מאוד ויעלה את הפוטנציאל לזיהום של המדגם. כאשר מוציאים את מחסני שומן SQ הוא חיוני כדי לזהות את הגבולות המשולשים למוסך לפני מוציא כל המודעותipose. כמו כן, קיצוצים זהירים צריכים להיעשות כדי להימנע משרירים, וסמוך כלי, בלוטות ושומן. זה ימנע זיהום של המדגם משומן חלופי, רקמת בלוטות, שרירים או בדם. ניתן למצוא המגבלה העיקרית לבידוד וכריתה של מחסני שומן, בשיטה זו ושיטות דומות אחרות בהגדרה של גבולות מחסנים מסוימים. בשל גבולות מוגדרים היטב בתחנות, כגון מחסנים תת-עורי, הבידוד חסר כמות קטנה של זיהום משומן השכן יכול להיות מאתגר. ניתן למצוא מגבלה נוספת בהבטחה מספיק רקמה נאסף לניסויים נוספים בתחנות כלי דם קשורה. מגבלה זו לעתים דורשת איגום של דגימות, אם כי זה תלוי באתר של בידוד והדיאטה הקשורים לבעלי החיים. לאחר מחסני השומן מבודדים, הם יכולים להיות מנוצלים עבור מגוון רחב של מבחני. השומן יכול להיות שימושד למחקרים מולקולריים כגון ביטוי חלבון, פעילות אנזים וניתוח ביטוי גנים. בנוסף, ניתן לבודד את תאי שומן לקו תא ראשוני בניסויים במבחנה. גם קווי תאים הנציחו יכולים לשמש למחקרים במבחנה, אך תאים אלמותיים אינם אמינים כמו שורות תאים מבודדות עיקריות. לבסוף, השומן יכול להיות קבוע או קפוא ב אוקטובר לבדיקה היסטולוגית לזהות חדירות לויקוציטים, לוקליזציה חלבון, כמו גם אפיון של מורפולוגיה adipocyte.

שומן היה חלש בולטת באור זרקורי התקשורת, כתוצאה מהעלייה הדרמטית של השמנת יתר במהלך העשורים האחרונים של המאה ה -20. השמנה כיום משפיעה על יותר משליש ממבוגרים ו -17% מילדים ובני הנוער בארצות הברית (ארה&quot;ב) 1. פורש את כל הקבוצות האתניות, מחקר סטטיסטי המקיף את מגיפת ההשמנה הראה שיש לי שחורים שאינו היספנים השיעור מותאם לגיל הגבוה ביותר של השמנת יתר (49.5%) בהשוואה לאמריקאים מקסיקניים (40.4%), כלל ההיספאנים (39.1%), ואי לבנים היספני (34.3%) 2. ההשפעה הכלכלית של השמנת יתר היא גם דאגה גוברת למערכת הבריאות. בשנת 2012, הוערך כי העלות השנתית של טיפול הרפואית לטיפול בהשמנה בארה&quot;ב בשנת 2005 הייתה $ 190,200,000,000, כמעט 21% מתקציב ההוצאות רפואיות הכללי. למרבה הצער, השמנה בילדות הייתה מוערך להיות אחראי על 14 מליארד דולרים בעלויות רפואיות ישירות לבד. מבחינה סטטיסטית, נקבע כי העלות הממוצעת של רפואיתאנשים עם השמנת יתר היו גבוה יותר 2741 $ בשנה מאשר אלו ללא תחלואה זה 3-5. השמנת יתר היא גורם סיכון עיקרי למגוון רחב של מצבים כגון: סוכרת מסוג 2, דיסליפידמיה, מחלות לב וכלי דם, סרטן, הפרעות שלד שרירים ודלקת כרונית. השמנה קשורה עמוק לפתוגנזה של תסמונת מטבולית ומחלות כרוניות אחרות 6-8. עם קשרי דרסטי ושליליים כגון בין השמנת יתר ומחלות רקע אחרים, מחקר מדעי מיקד את תשומת לב כדי להבין את המגיפה הנוכחית ותפקידים המגוונים ומרכזיים שמילאו שומן טוב יותר. מבחינה הסטורית, רקמת שומן נחשבה חסרת חשיבות ונתפסה רק כרקמת מילוי פשוטה. נכון לעכשיו, שומן הוכח לשחק הרבה תפקידים חיוניים בתפקוד הגוף ב: חילוף חומרים, ויסות הורמון, דלקת, הגנה ובידוד 9. רקמת שומן מורכבת בעיקר מadipocytes אלא גם מכיל pericytes, תאי האנדותל, מונוציטים, מקרופאגים ותאי גזע pluripotent 8. רקמת שומן מופצת בכל הגוף בתחנות שונות. ניתן למצוא המחסנים העיקריים subdermally, תת-עורית, לשריר, ולעומק 10. מחסני שומן הוכחו לי פרופילי מחסן ספציפיים חילוף חומרים, אשר הראו רגישות ספציפית מחסן להשמנה והפרעות הקשורות 8. באופן מסורתי, רקמת שומן כבר מסווגת לשני סוגים עיקריים: רקמת שומן לבנה (WAT) ורקמת שומן חומה (BAT); למרות שהספרות האחרונה מציינת את הנוכחות של קבוצה שלישית הוטבלה שומן brite או בז &#39;11. רקמת שומן הוכח לי צבעים שונים, מורפולוגיות, פונקציות מטבוליות, תכונות ביוכימיות ודפוסים גנטיים ביטוי 10. יש לי adipocytes בWAT, טיפה אחת גדולה של שומנים וכמויות משתנות של המיטוכונדריה. WATנמצא דומיננטי ביישובים תת-עורי והקרביים של הגוף. פונקציות WAT כאתר של אחסון אנרגיה והגנה על איברים בעיקר. יש לי adipocytes בBAT מורפולוגיה multilocular והמיטוכונדריה בשפע. BAT ממוקם בעיקר בצוואר וכלי דם גדולים של בית החזה, כמו גם את השכמות 12. BAT פונקציות בעיקר בהתנהגויות משקיעה באנרגיה, המסדירות thermogenesis 7. שומן Brite או בז &#39;הוכח לשתף מורפולוגיה דומה וביטוי לBAT אבל כבר מצא להיות מקור מתאי שומן לבן 11. השיטה הניתוחית שתוארה בכתב היד הזה מספקת לחוקרים עם היכולת לנתח תופעות שונות שגורמים כגון: סביבה, תרופות, וגנטיקה, יש בשומן; כמו גם את תפקיד השומן מועיל או מזיק משחק במחלה ועל בריאות כללית. כמו כן, מספק דרך לזהות ולבודד סוגים שונים של רקמת שומן ללאפשר להבין טוב יותר של מערכות יחסים ביוכימיים והבדלים בין מחסנים. זה יכול לסייע בקביעת הקשר בין מיקום, פונקציה, וסוגים של שומן בגוף. שיטה מתוארת זה משיגה זאת על ידי מתן האמצעי להדמיה גולמית, ניתוח ביטוי גנים, ניתוח ביטוי חלבון, בדיקה היסטולוגית, ובידוד של שורות תאים עיקריות למחקרים במבחנה. נכון לעכשיו יש מאמרים רבים המספקים תובנה התנהגות חילוף חומרים של מחסנים שונים שומן, כמו גם במקומות אנטומיים שלהם; אבל לא מספק שיטה לעומק על איך למקם במיוחד, לזהות, ולבודד מחסנים אלה. שיטה ניתוחית זו מספקת טכניקה מדויקת שמאפשרת בידוד של מחסנים מרובים עם כמות מינימאלית של נתיחה וזיהום בהשוואה לאחרים שיטות שנועדו לבודד ממחסנים אחד או שתיים 13-14. המטרה של פרוטוקול זה היא לספקשיטה מדויקת לזיהוי ולבידוד סוגים שונים של מחסני שומן ממקומות אנטומיים רבים של.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="730">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:175px;">Company</td>
			<td style="width:125px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:188px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">isoflurane</td>
			<td>Med-Vet International&#160;</td>
			<td>#RXISO-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:125px;">07-678-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">DMEF-12</td>
			<td style="width:175px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">D-6421</td>
			<td>Warm in waterbath before putting on tissue</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">2 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:175px;">Midsci</td>
			<td style="width:125px;">MCT-200-C-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:175px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">P5368-10PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

localization, identification, and excision of murine adipose depots

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 reached a staggering sum of $190.2 billion in direct medical costs alone. Obesity is a major risk factor for a wide host of diseases. Historically, little was known regarding adipose and its major and essential functions in the body. Brown and white adipose are the two main types of adipose but current literature has identified a new type of fat called brite or beige adipose. Research has shown that adipose depots have specific metabolic profiles and certain depots allow for a propensity for obesity and other related disorders. The goal of this protocol is to provide researchers the capacity to identify and excise adipose depots that will allow for the analysis of different factorial effects on adipose; as well as the beneficial or detrimental role adipose plays in disease and overall health. Isolation and excision of adipose depots allows investigators to look at gross morphological changes as well as histological changes. The adipose isolated can also be used for molecular studies to evaluate transcriptional and translational change or for in vitro experimentation to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to other published techniques due to the design allowing for isolation of multiple depots with simplicity and minimal contamination.

זיהוי, ולוקליזציה של שומן תת-עורי מפשעתי, שומן חום interscapular, שומן קרביים epididymal (איור 1), כמו גם את שומן קשת אב העורקים perivascular, שומן אב העורקים החזי, שומן אב העורקים suprarenal ושומן אב העורקים infrarenal (איור 2) הושג בהצלחה באמצעות השיטה הניתוחית שתוארה. בדיקה היסטולוגית ובידול בין דגימות BAT וWAT הוערכו באופן חיובי באמצעות Hematoxylin ו Eosin (H &amp; E) מכתים (איור 3). ניתוח של רמות RNA של אדיפונקטין, גמא קולט מופעל proliferator peroxisome (PPAR-γ) (AdipoQ), מפעיל כמו-DFFA (CIDEA), ושומן אחר סמנים ספציפיים וישכנע מוות של תאים נמדדו עבור כל המחסנים מבודדים ונכרתו מעל (מידע לא מוצג). שורות תאים ראשוניות של תאי שומן תת עורי וadipocytes perivascular היו בתרבית ומבודלת מpreadipocyte<html> ים לתאי שומן בהצלחה לניתוח microarray. Preadipocytes התרבותי יומר לadipocytes אושרה עם כתמי השמן האדום O (איור 4). בידוד מוצלח, תרבות והתמיינות של תאי שומן הושגה לשימוש במחקרים במבחנה, ופעילות החלבון נמדדה בהצלחה. פעילות האנזימטית של מטריצת metaloprotease-2 (MMP2) נמדדה בקבוצת טיפול לעומת השליטה. הפעילות של MMP2 נמדדה באתר בקו adipocyte perivascular עיקרי באמצעות zymography (איור 5). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52174/52174fig1display.jpg" /> איור 1. מקומות האנטומי של מחסני שומן עכבר C57BL זכר / 6. מחסן () Interscapular שומן חום שומן. שומן שומן תת-עורי דיפו מפשעתי (B). epididymal הקרבי מחסן שומן שומן (C).&quot;Target =&quot; w.jove.com/files/ftp_upload/52174/52174fig1highres.jpg _ blank &quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52174/52174fig2display.jpg" /> איור 2. מקומות האנטומי של מחסני PVAT בעכבר זכר C57BL / 6. (א) מחסן אבי העורקים קשת perivascular שומן. שומן מחסן perivascular אב עורקים החזי (B). מחסן שומן perivascular אב העורקים Suprarenal (C). מחסן שומן perivascular אב העורקים infrarenal (D). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52174/52174fig2highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/52174/52174fig3display.jpg" width="700" /> איור 3. צביעת H &amp; E של BAT ושומן WAT. () H<html> הכתמת E של paraformaldehyde הקבוע, C57BL פרפין מוטבע / 6 מדגם עכבר זכר של שומן WAT בהגדלת 40X מכתים (B) H &amp; E של paraformaldehyde הקבוע, C57BL המוטבע פרפין / 6 מדגם עכבר זכרה של בת בהגדלת 40X; 8.. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52174/52174fig3highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ על כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/52174/52174fig4display.jpg" width="700" /> איור 4. מכתים השמן האדום O של preadipocytes PVAT התרבותי וadipocytes. הכתמה () השמן האדום O של preadipocytes perivascular אב העורקים בתרבית בתחילת המחקר של בידול בהגדלה 20X עם ניגוד שלב. (ב) מכתים השמן האדום O של adipocytes perivascular אב העורקים בתרבית לאחר 5 ימים של בידול בהגדלה 20X עם ניגוד שלב.es / ftp_upload / 52,174 52174fig3highres.jpg &quot;target =&quot; / _ blank &quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/52174/52174fig5display.jpg" /> איור 5. zymography של adipocytes מובחנת, מבודדת מרקמת שומן perivascular, הפגין פעילות מופחתת של MMP2 שוחרר לאחר טיפול בהשוואה לתאים שלא טופלו (שליטה), * P &lt;0.01 לעומת שליטה.

Watch this Scientific Journal Video about Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots at JoVE.com

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

בשל קשר דרסטי והשלילי בין השמנת יתר ומחלות רקע אחרים, מחקר על תפקיד השומן משחק במחלה ועל בריאות כללית היא מוצדקת. אנו מציגים פרוטוקול לבידוד והכריתה של מחסני שומן ומאפשרים לחקר השומן באמצעות באתר ובשיטות חוץ גופית.

לוקליזציה, זיהוי, וכריתה של בסיס מיון Murine שומן

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

localization-identification-and-excision-of-murine-adipose-depots

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

40.9K Views.  University of Cincinnati College of Medicine.  בשל קשר דרסטי והשלילי בין השמנת יתר ומחלות רקע אחרים, מחקר על תפקיד השומן משחק במחלה ועל בריאות כללית היא מוצדקת. אנו מציגים פרוטוקול לבידוד והכריתה של מחסני שומן ומאפשרים לחקר השומן באמצעות באתר ובשיטות חוץ גופית. 

Video: Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the retrieval of ocular tissues, especially cornea, by cutting it separate from the ocular globe. Evisceration is the process of removing the internal organs referred here as retina. The ocular globe consists of the cornea, the sclera, the vitreous body, the lens, the iris, the retina, the choroid, muscles etc (Suppl. Figure 1). When a patient is suffering from corneal damage, the cornea needs to be removed and a healthy one must be transplanted by keratoplastic surgeries. Genetic disorders or defects in retinal function can compromise vision. Human ocular globes can be used for various surgical procedures such as eye banking, transplantation of human cornea or sclera and research on ocular tissues. However, there is little information available on human corneal and retinal excision, probably due to the limited accessibility to human tissues. Most of the studies describing similar procedures are performed on animal models. Research scientists rely on the availability of properly dissected and well-conserved ocular tissues in order to extend the knowledge on human eye development, homeostasis and function. As we receive high amount of ocular globes out of which approximately 40% (Table 1) of them are used for research purposes, we are able to perform huge amount of experiments on these tissues, defining techniques to excise and preserve them regularly.
The cornea is an avascular tissue which enables the transmission of light onto the retina and for this purpose should always maintain a good degree of transparency. Within the cornea, the limbus region, which is a reservoir of the stem cells, helps the reconstruction of epithelial cells and restricts the overgrowth of the conjunctiva maintaining corneal transparency and clarity. The size and thickness of the cornea are critical for clear vision, as changes in either of them could lead to distracted, unclear vision. The cornea comprises of 5 layers; a) epithelium, b) Bowman's layer, c) stroma, d) Descemet's membrane and e) endothelium. All layers should function properly to ensure clear vision4,5,6. The choroid is the intermediate tunic between the sclera and retina, bounded on the interior by the Bruch's membrane and is responsible for blood flow in the eye. The choroid also helps to regulate the temperature and supplies nourishment to the outer layers of the retina5,6. The retina is a layer of nervous tissue that covers the back of the ocular globe (Suppl. Figure 1) and consists of two parts: a photoreceptive part and a non-receptive part. The retina helps to receive the light from the cornea and lens and converts it into the chemical energy eventually transmitted to the brain with help of the optic nerve5,6.
The aim of this paper is to provide a protocol for the dissection of corneal and retinal tissues from human ocular globes. Avoiding cross-contamination with adjacent tissues and preserving RNA integrity is of fundamental importance as such tissues are indispensable for research purposes aimed at (i) characterizing the transcriptome of the ocular tissues, (ii) isolating stem cells for regenerative medicine projects, and (iii) evaluating histological differences between tissues from normal/affected subjects. In this paper we describe the technique we currently use to remove the cornea, the choroid and retinal tissues from an ocular globe. Here we provide a detailed protocol for the dissection of the human ocular globe and the excision of corneal and retinal tissues. The accompanying video will help researchers to learn an appropriate technique for the retrieval of precious human tissues which are difficult to find regularly.

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

The paper describes a simplified technique to excise corneal and to eviscerate retinal tissues from the ocular globe of human cadaveric donors. The technique described here will help to excise good quality tissues to be used for transplantation, surgical or research purposes without damaging other tissues of the ocular globe.

טכניקה פשוטה עבור<em&gt; באתרו</em&gt; כריתת של הקרנית ואת הוצאת הקרביים של רקמת רשתית מ גלוב Ocular האדם

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely related to metabolism and energy expenditure, and its dysfunction is one important contributor for obesity and diabetes. Contrary to previous belief, recent PET/CT imaging studies indicated the BAT depots are still present in human adults. PET imaging clearly shows that BAT has considerably high uptake of 18F-FDG under certain conditions. In this video report, we demonstrate that Cerenkov luminescence imaging (CLI) with 18F-FDG can be used to optically image BAT in small animals. BAT activation is observed after intraperitoneal injection of norepinephrine (NE) and cold treatment, and depression of BAT is induced by long anesthesia. Using multiple-filter Cerenkov luminescence imaging, spectral unmixing and 3D imaging reconstruction are demonstrated. Our results suggest that CLI with 18F-FDG is a practical technique for imaging BAT in small animals, and this technique can be used as a cheap, fast, and alternative imaging tool for BAT research.

In this video report, we show the application of Cerenkov Luminescence Imaging (CLI) for interscapular brown adipose tissue in mice under activated and depressed conditions.

Cerenkov הארת ההדמיה של רקמות Interscapular בראון שומן

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

Isolation and Excision of Murine Aorta; A Versatile Technique in the Study of Cardiovascular Disease

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated blood is the aorta. The aorta may become affected in diseases such as atherosclerosis and aneurysm. Researchers investigating these diseases would benefit from direct observation of the aorta to characterize disease progression as well as to evaluate efficacy of potential therapeutics. The goal of this protocol is to describe proper isolation and excision of the aorta to aid investigators researching cardiovascular disease. Isolation and excision of the aorta allows investigators to look at gross morphometric changes as wells as allowing them to preserve and stain the tissue to look at histologic changes if desired. The aorta may be used for molecular studies to evaluate protein and gene expression to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to imaging modalities as they have inherent limitations in technology and cost. Additionally, primary isolated cells from a freshly isolated and excised aorta can allowing researchers to perform further in situ and in vitro assays. The isolation and excision of the aorta has the limitation of having to sacrifice the animal however, in this case the benefits outweigh the harm as it is the most versatile technique in the study of aortic disease.

Pathology of the aorta can lead to severe morbidity and mortality, therefore research of disease progression and potential therapies is warranted. Here, we present a protocol to isolate and excise the murine aorta to aid researchers in their investigation of cardiovascular disease.

בידוד וכריתה של אב העורקים Murine; טכניקה רב-תכליתית בחקר לב וכלי דם מחלות

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated ...

Human Brown Adipose Tissue Depots Automatically Segmented by Positron Emission Tomography/Computed Tomography and Registered Magnetic Resonance Images

Reliably differentiating brown adipose tissue (BAT) from other tissues using a non-invasive imaging method is an important step toward studying BAT in humans. Detecting BAT is typically confirmed by the uptake of the injected radioactive tracer 18F-Fluorodeoxyglucose (18F-FDG) into adipose tissue depots, as measured by positron emission tomography/computed tomography (PET-CT) scans after exposing the subject to cold stimulus. Fat-water separated magnetic resonance imaging (MRI) has the ability to distinguish BAT without the use of a radioactive tracer. To date, MRI of BAT in adult humans has not been co-registered with cold-activated PET-CT. Therefore, this protocol uses 18F-FDG PET-CT scans to automatically generate a BAT mask, which is then applied to co-registered MRI scans of the same subject. This approach enables measurement of quantitative MRI properties of BAT without manual segmentation. BAT masks are created from two PET-CT scans: after exposure for 2 hr to either thermoneutral (TN) (24 &#176;C) or cold-activated (CA) (17 &#176;C) conditions. The TN and CA PET-CT scans are registered, and the PET standardized uptake and CT Hounsfield values are used to create a mask containing only BAT. CA and TN MRI scans are also acquired on the same subject and registered to the PET-CT scans in order to establish quantitative MRI properties within the automatically defined BAT mask. An advantage of this approach is that the segmentation is completely automated and is based on widely accepted methods for identification of activated BAT (PET-CT). The quantitative MRI properties of BAT established using this protocol can serve as the basis for an MRI-only BAT examination that avoids the radiation associated with PET-CT.

The method presented here uses 18F-Fluorodeoxyglucose (18F-FDG) positron emission tomography/computed tomography (PET-CT) and fat-water separated magnetic resonance imaging (MRI), each scanned following 2 hr exposure to thermoneutral (24 &#176;C) and cold conditions (17 &#176;C) in order to map brown adipose tissue (BAT) in adult human subjects.

בסיס מיון רקמה האנושי בראון שומן בדיקה מחולק באופן אוטומטי על ידי פוזיטרון פליטת טומוגרפיה / טומוגרפיה ממוחשבת ורשום תמונות תהודה מגנטית

Reliably differentiating brown adipose tissue (BAT) from other tissues using a non-invasive imaging method is an important step toward studying BAT in ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular weight metabolites in tissues of the treated host to achieve long-term survival. The semipermeable membrane allows engrafted encapsulated cells to avoid rejection by the immune system. The encapsulation procedure was designed to enable a controlled release of bioactive compounds, such as insulin, other hormones, and cytokines. Here we describe a method for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production and energy dissipation (thermogenesis) in the intra-abdominal adipose tissue of obese mice. Encapsulation of thermogenic catabolic cells may be potentially applicable to the prevention and treatment of obesity and type 2 diabetes. Another potential application of catabolic cells may include detoxification from alcohols or other toxic metabolites and environmental pollutants.

Here, we present a protocol for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production in intra-abdominal adipose tissue and increase energy dissipation in obese mice.

Encapsulation תרמוגנית Preadipocytes להשתלה לבסיס מיון רקמת שומן

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. It is hypothesized that pro-atherogenic mediators released from fat tissues particularly in association with central/visceral adiposity may promote pathogenic vascular changes locally and systemically, and the notion that cardiovascular disease may be the consequence of adipose tissue dysfunction continues to evolve. Here, we describe a unique method of videomicroscopy that involves analysis of vasodilator and vasoconstrictor responses of intact small human arterioles removed from the adipose depot of living human subjects. Videomicroscopy is used to examine functional properties of isolated microvessels in response to pharmacological or physiological stimuli using a pressured system that mimics in vivo conditions. The technique is a useful approach to gain understanding of the pathophysiology and molecular mechanisms that contribute to vascular dysfunction locally within the adipose tissue milieu. Moreover, abnormalities in the adipose tissue microvasculature have also been linked with systemic diseases. We applied this technique to examine depot-specific vascular responses in obese subjects. We assessed endothelium-dependent vasodilation to both increased flow and acetylcholine in adipose arterioles (50 - 350 &#181;m internal diameter, 2 - 3 mm in length) isolated from two different adipose depots during bariatric surgery from the same individual. We demonstrated that arterioles from visceral fat exhibit impaired endothelium-dependent vasodilation compared to vessels isolated from the subcutaneous depot. The findings suggest that the visceral microenvironment is associated with vascular endothelial dysfunction which may be relevant to clinical observation linking increased visceral adiposity to systemic disease mechanisms. The videomicroscopy technique can be used to examine vascular phenotypes from different fat depots as well as compare findings across individuals with different degrees of obesity and metabolic dysfunction. The method can also be used to examine vascular responses longitudinally in response to clinical interventions.

Videomicroscopy systems are used to examine functional properties of isolated adipose tissue arterioles in response to physiological and pharmacological stimuli. This technique can be used to examine microvascular phenotypes in different adipose tissue domains in obese humans.

הערכה של רקמת שומן אנושי הפונקציה Microvascular באמצעות Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Vessel-sparing Excision and Primary Anastomosis

Urethroplasty is considered to be the standard treatment for urethral strictures since it provides excellent long-term success rates. For isolated short bulbar or posterior urethral strictures, urethroplasty by excision and primary anastomosis (EPA) is recommended. As EPA only requires the excision of the narrowed segment and the surrounding spongiofibrosis, a full-thickness transection of the corpus spongiosum, as performed in the traditional transecting EPA (tEPA), is usually unnecessary. Jordan et al. introduced the idea of a vessel-sparing approach in 2007, aiming to reduce surgical trauma, especially to the dual arterial blood supply of the urethra, and, thus, potentially reducing the risk of postoperative erectile dysfunction or glans ischemia. This approach could also be beneficial for subsequent urethral interventions such as redo urethroplasty using a free graft, in which a well-vascularized graft bed is imperative. Nevertheless, these potential benefits are only assumptions as prospective studies comparing the functional outcome of both techniques with validated questionnaires are currently lacking. Moreover, vessel-sparing EPA (vsEPA) should at least be able to provide similar surgical outcomes as tEPA. The aim of this paper is to give an elaborate, step-by-step overview of how to manage patients with isolated short bulbar or posterior urethral strictures with vsEPA. The main objective of this manuscript is to outline the surgical technique and to report the representative surgical outcome. A total of 117 patients were managed according to the described protocol. The analysis was performed on the entire patient cohort and on the bulbar (n = 91) and posterior (n = 26) vsEPA group separately. Success rates were 93.4% and 88.5% for the bulbar and posterior vsEPA, respectively. To conclude, vsEPA, as outlined in the protocol, provides excellent success rates with low complication rates for isolated short bulbar and posterior urethral strictures.

Here, we present an elaborate and efficient protocol to treat isolated short bulbar or posterior urethral strictures with vessel-sparing excision and primary anastomosis.

הכלי חוסך כריתה, השקה ראשי

Urethroplasty is considered to be the standard treatment for urethral strictures since it provides excellent long-term success rates. For isolated short ...

Electromagnetic Navigation Transthoracic Nodule Localization for Minimally Invasive Thoracic Surgery

The increased use of chest computed tomography (CT) has led to an increased detection of pulmonary nodules requiring diagnostic evaluation and/or excision. Many of these nodules are identified and excised via minimally invasive thoracic surgery; however, subcentimeter and subsolid nodules are frequently difficult to identify intra-operatively. This can be mitigated by the use of electromagnetic transthoracic needle localization. This protocol delineates the step-by-step process of electromagnetic localization from the pre-operative period to the postoperative period and is an adaptation of the electromagnetically guided percutaneous biopsy previously described by Arias et al. Pre-operative steps include obtaining a same day CT followed by the generation of a three-dimensional virtual map of the lung. From this map, the target lesion(s) and an entry site are chosen. In the operating room, the virtual reconstruction of the lung is then calibrated with the patient and the electromagnetic navigation platform. The patient is then sedated, intubated, and placed in the lateral decubitus position. Using a sterile technique and visualization from multiple views, the needle is inserted into the chest wall at the prechosen skin entry site and driven down to the target lesion. Dye is then injected into the lesion and, then, continuously during needle withdrawal, creating a tract for visualization intra-operatively. This method has many potential benefits when compared to the CT-guided localization, including a decreased radiation exposure and decreased time between the dye injection and the surgery. Dye diffusion from the pathway occurs over time, thereby limiting intra-operative nodule identification. By decreasing the time to surgery, there is a decrease in wait time for the patient, and less time for dye diffusion to occur, resulting in an improvement in nodule localization. When compared to electromagnetic bronchoscopy, airway architecture is no longer a limitation as the target nodule is accessed via a transparenchymal approach. Details of this procedure are described in a step-by-step fashion.

Presented here is a protocol for lung nodule localization using dye marking via electromagnetically navigated transthoracic needle access. The technique described here can be accomplished in the peri-operative period to optimize nodule localization and to successful resection when performing minimally invasive thoracic surgery.

לוקליזציה של גושים טרנסתורציים לניווט אלקטרומגנטי לניתוחי חזה זעיר פולשניים

The increased use of chest computed tomography (CT) has led to an increased detection of pulmonary nodules requiring diagnostic evaluation and/or ...

Isolation and Purification of Murine Cardiac Pericytes

Pericytes, perivascular cells of microvessels and capillaries, are known to play a part in angiogenesis, vessel stabilization, and endothelial barrier integrity. However, their tissue-specific functions in the heart are not well understood. Moreover, there is currently no protocol utilizing readily accessible materials to isolate and purify pericytes of cardiac origin. Our protocol focuses on using the widely used mammalian model, the mouse, as our source of cells. Using the enzymatic digestion and mechanical dissociation of heart tissue, we obtained a crude cell mixture that was further purified by fluorescence activating cell sorting (FACS) by a plethora of markers. Because there is no single unequivocal marker for pericytes, we gated for cells that were CD31-CD34-CD45-CD140b+NG2+CD146+. Following purification, these primary cells were cultured and passaged multiple times without any changes in morphology and marker expression. With the ability to regularly obtain primary murine cardiac pericytes using our protocol, we hope to further understand the role of pericytes in cardiovascular physiology and their therapeutic potential.

We have optimized a protocol to isolate and purify murine cardiac pericytes for basic research and investigation of their biology and therapeutic potential.

בידוד וטיהור של קרום הלב של מורלין

Pericytes, perivascular cells of microvessels and capillaries, are known to play a part in angiogenesis, vessel stabilization, and endothelial barrier ...

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal cancer, inflammatory bowel disease, and Parkinson&#8217;s disease. To study the function of the appendix, a gut disease-associated murine appendectomy model has been established and its step-by-step protocol is described here. This report introduces a facile protocol for caecal patch removal in mice followed by the chemical induction of chronic colitis-associated colorectal cancer using a combination of dextran sulfate sodium (DSS) and azoxymethane (AOM). IgA specific cells and IgA concentration were significantly reduced upon removal of the caecal patch in male C57BL/6 mice&#160;compared to those in the sham group. Simultaneously administering 2% DSS and AOM resulted in nearly 80% mice survival in both sham and appendectomy groups without significant body weight loss. Histological results confirmed colonic inflammation and different degrees of adenocarcinoma. This model can be used for the study of the functional role of the appendix in maintaining gut microbiota homeostasis and pathogenesis of gut colitis and malignancies, as well as for the potential development of drug targeting therapies.

The presented protocol describes a facile surgical removal of the appendix (caecal patch) in a mouse followed by the induction of inflammatory bowel disease-associated colorectal cancer. This murine appendectomy model enables investigation of the biological role of the appendix in the pathogenesis of human gastrointestinal disease.

מורנה הנדנדקטומיה מודל של קוליטיס כרונית הקשורים סרטן המעי הגס על ידי לוקליזציה מדויקת של תיקון Caecal

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...