שבץ מוחי הוא הגורם המוביל לתמותה ונכות ברחבי העולם. למרות תרומבוליזה והסרה כירורגית של העורק כלי הדם המוחי יכול להתבצע בחולים נבחרים, יש עדיין צורך דחוף טיפולים יעילים נגד שבץ. כאן, אנו מדגימים משלוח תוך עורקי מבוסס קטטר של תאי גזע אל חצי הכדור האיסכמי כמשטר פוטנציאלי לטיפול בשבץ.
ראשית, אנו מציגים כיצד להכין את קטטר ההזרקה וווים כירורגיים. עיצבנו שני סוגים של קטטרים להזרקה תוך-עורקית. עיצוב אחד משמש להזרקה של פתרון או השעיה שאינה דורשת שטיפה של הצינור.
עיצוב שני מאפשר הזרקה של תאי גזע עצביים, ואחריו סומק של נפח מת כדי לספק את הנפח המלא. כדי לבנות קבוצה של קטטרים הזרקה, תצטרך 26 מד ו 20 מחטי מד, אורך 10 עד 15 ס"מ של צנתר MRE 25 ואורך שלושה סנטימטרים של MRE 50 ו MRE 10 קטטרים. חותכים את שני טיפים מחט ללטש את קצה המתכת על נייר זכוכית כדי לפתוח מחדש את הצינור להחליק את הקצוות ולאחר מכן לשטוף עם מים מזוקקים כדי לנקות את משעמם ולשטוף את הפסולת.
הדמות מראה קצה סגור של מחט 20 מד לאחר גזירת קצה המחט, אשר נפתח מחדש עם משעמם חלק לאחר ליטוש. תחת מיקרוסקופ, להכניס את המחט 20 מד לתוך סוף צינורות MRE 50. לכופף את המחט 26 מד ולאחר מכן לחדור את הצינורות מתחת לסוף קצה מחט 20 מד.
לאבטח את מחט מד 26 עם דבק סופר. ואז להטביע את שני רכזות מחט צינורות אפוקסי לבנות בלוק מוצק כדי לשפר את הכוח. תצטרך גם שלושה ווים כירורגיים כדי להחזיק את הרקמה בעמדה לחשיפה טובה יותר של האתרים הכירורגיים.
חותכים פיר מחט באורך של 1.5 עד 2 ס"מ ממחט 27 מד ומבריקים את שני הקצוות על נייר זכוכית עד שהם משעממים. השתמש מהדק המוסטטי קטן לכופף את הפיר לתוך וו בקצה אחד טבעת בצורת בקצה השני. הכנס קטטר MRE 25 באורך 10 עד 15 ס"מ דרך הטבעת ומאובטח באמצעות סרט כירורגי ברור.
צור שני ווים נוספים באמצעות אותה שיטה. הקרסים ומערכת הצנתרים צריכים להיות ספוגים בן לילה באתנול של 70 אחוז לסטריליזציה. כל ההליכים הנוגעים לנושאי בעלי חיים אושרו על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים המוסדיים באוניברסיטת קנטאקי.
אנו משתמשים במוח עכבר עוברי ENT לתרבות GFP, תאי גזע עצביים חיוביים. עוברים חיוביים GFP ניתן לדמיין בקלות בערוץ FITC על מיקרוסקופ פלואורסצנטי. בעוד עוברים מסוג פראי מראים שום פלואורסצנטיות באמצעות אותה חשיפה.
שפעת אוטומטית של עוברים מסוג בר גלויה רק כאשר זמן החשיפה גדל פי 100. קליפת המוח העוברית נאספת ומשמשת להקמת תרבות תאי גזע עצביים בהתאם לפרוטוקול היצרן. תאי גזע עצביים אלה יכולים ליצור נוירוספרות והוא יכול להיות מעבר מעל 10 דורות והם יכולים להבדיל לגליה הם נוירונים.
פאנל של סמני תאי גזע עובריים כגון ננו, SSEA1, Oct4 ו Sox3 ניתן להשתמש כדי לזהות את תכונות תאי הגזע בזמן נוירוספרות. נוירוספרות היו מתורבתות בתקשורת, בעקבות פרוטוקול היצרן ושימוש בין קטעים 3 ו -5 לאספקת תאי גזע עצביים. שבץ איסכמי היה המושרה בחצי הכדור השמאלי עבור עכברים וחולדות, באמצעות תספור מבוסס, העורק המוחי האמצעי, MCAO עם כמה שינויים בהתאם למין.
בעכברים, הכלוב מוכנס דרך העורק הראשי המשותף, CCA ומתקדם לתוך העורק הראשי הפנימי, ICA. בעוד בחולדות, הכלוב הוא הציג דרך העורק הראשי החיצוני, ECA לתוך ICA בגלל שטח העבודה הגדול יותר. כאן אנו מדגימים את ניתוח העכבר.
לאחר ביצוע חתך קו האמצע לאורך הצוואר, להפריד את הרקמות הבסיסיות באמצעות ניתוח קהה. השתמש בשלושת הקרסים המיקרוכירורגיים עשויים פירי מחט 27 מד כדי להשיג שדה ראייה טוב יותר. הריבוע השחור מציין את האזור הכירורגי לשלב הבא.
שכבת השריר מעל CCA השמאלי פתוח בזהירות לחשוף את CCA השמאלי עצב vagus. בצע את CCA עד שתגיע ולזהות את bifurcation. זהירות יש להפעיל לא למתוח, לעקור או לסחוט את זה CCA או עצב vagus.
בזהירות לפתוח את רקמת החיבור ברור, מכסה את CCA ו עצב vagus. שחררו את החלל שמתחת ל-CCA הזה עם קצה המדפים ובודדו את גזע ה-CCA ככל האפשר. חוט כפול תקוע שישה O קלוע ניילון תפר כירורגי מתחת CCA.
חותכים את הנקודה האמצעית כדי להשאיר לתפרים שבבסיס ה- CCA. מניחים תפר ניילון נוסף מתחת ל- CCA. לקשור slipknot על התפר העליון, שמירה על זה רופף.
הפרד את שני התפרים התחתונים. לקשור קשר להחליק עם התפר האמצעי, שמירה על זה רופף לעת עתה. לקשור קשר של מנתח עם תפר נמוך יותר ולהזיז אותו לקצה הפרוקסימלי ככל האפשר.
חותכים את קצות התפר. עוד לחשוף את CCA מעבר bifurcation. לדחוף את slipknot רופף העליון כדי bifurcation ולהדק אותו כדי למנוע זרימה אחורית של דם.
מניחים את גומי הסיליקון מצופה 70 ניילון MCAO תפר ליד CCA. באמצעות מספריים מיקרו, לחתוך חתך קטן על CCA, ליד הקשר התחתון. הכנס את קצה התפר MCAO לתוך CCA דרך חתך זה ולקדם אותו לקשר העליון.
להתאים את המיקום של הקשר האמצעי ולהדק אותו עד שהוא יכול להחזיק את התפר MCAO בעמדה. אין להדק יתר על המידה את הקשר. שחרר את הקשר העליון, אבל לעשות עוד קשר להחליק רופף באותו מקום.
לקדם את התפר MCAO לתוך ICA. אשר שתפר מקאו מעביר את הביפורציה לתוך ה-ICA. הנתיב של התפר צריך להיות ישר יחסית, נכנס עמוק יותר לתוך הרקמה כפי שהוא מתקדם.
בדוק את סמן הכסף בקצה התפר. ודא שהוא מגיע לביפורציה. בדוק שוב את כיוון התפר של מקאו.
כוונן קשרים עליונים ואמצעיים כדי להבטיח שלא תהיה דליפת דם. לקדם עוד יותר את התפר MCAO, להדק את שני הקשרים העליונים כדי לאבטח את התפר MCAO במקום. התחל להקליט זמן לשעה אחת של קשה.
לאחר שעה של קשה, אנחנו מרסים את החיה ולפתח מחדש את פצע העור. חשוף את האזור הכירורגי. אתר slipknots העליון והאמצעי.
שחרר בעדינות את הקשר העליון. מוציאים בעדינות את תפר MCAO עד שחלק גומי הסיליקון הלבן מגיע לקשר האמצעי. הדק את הקשר העליון כדי להחזיק את התפר MCAO במקום כדי למנוע דימום.
שחרר בעדינות את ה-slipknot האמצעי. משוך את התפר MCAO עד סופו עובר את הקשר העליון. הדק את הקשר העליון.
מניחים את ה- slipknot האמצעי ממש מעל החתך ב- CCA. הדק את החלקה האמצעית. הסר את הקשר העליון.
לקצץ קצוות תפר של הקשר האמצעי. סגור את פצע העור ולאפשר לחיה להתאושש. בהתבסס על הניסיון שלנו, תאי גזע עצביים מוזרקים בבטחה דרך מסלול עורקי זה בין יום אחד לשלושה ימים לאחר שבץ.
שוב, יש וריאציות קלות בין ניתוחי עכבר וחולדה להזרקת תאי גזע עצביים. וכאן אנו מדגימים את ניתוח העכבר. ביום השלישי שלאחר השבץ, הרדמה את החיה, לפתוח מחדש את הפצע ולחשוף מחדש את CCA.
להניח תפר כירורגי כפול תקוע מתחת לCCA לחתוך אותו באמצע כדי לקבל שני תפרים. מניחים את שני התפרים כראוי. הפוך slipknot עם התפר העליון.
מניחים אותו ממש מתחת לביפורציה. הדק את החלקה העליונה. תעשה עוד תותל עם התפר האמצעי.
חותכים חתך קטן ממש מעל הקשר הגזום שנותר מניתוח השבץ. חותכים את קצה קטטר MRE 10 בזווית של כ-45 מעלות. השתמש בקצה חד זה כדי להזין את החתך ב- CCA.
היזהר להתאים כראוי את זווית הכניסה ואת הכוח המשמש להכנסת הקטטר. אחרת, הקטטר לא יכול להיכנס CCA או עשוי לנקב אותו. מכניסים את הקטטר ומתקדמות עד שהטיפ מגיע לקשר העליון.
הדקו את החלקה האמצעית כדי להחזיק את הקטטר במקומו ולהבטיח שאין קשר דם. שחרר את הקשר העליון. לעשות קשר להחליק עם התפר העליון.
להתאים את הזווית של קטטר בתוך CCA ואת המיקומים של שני הקשרים עד זרימה אחורית מהירה של דם גלוי, המציין תקשורת מוצלחת בין קטטר זרימת CCA. התחל את משאבת המזרק. הדם בקטטר יהיה סמוק בחזרה לתוך CCA.
סיים את הזריקה לאחר חמש דקות. ליגטה הקשר העליון. שחרר את הקשר האמצעי ומשוך את הקטטר.
ליגטה הקשר האמצעי. לקצץ את כל הקשרים. סגור את הפצע ואפשר לחיה להתאושש.
לאחר הזרקה תוך-עורקית, תאי גזע עצביים המסומן GFP נמצאים בעיקר בחצי הכדור ipsilateral. כאן, אנו מראים את ההפצה ב gyrus שקע ההיפוקמפוס ביום אחד לאחר ההזרקה. בחצי הכדור ipsilateral, חלק מתאי גזע עצביים חיוביים GFP מקומי בקליפת המוח וסטריאטום, לבטא קליפה כפולה, סמן של נוירונים לא בוגרים.
אלה תמונות מייצגות של חיות מזויפות ושבץ עם או בלי הזרקת תאי גזע עצביים בשבעה ימים לאחר ההזרקה. ב 30 ימים לאחר הלידה, רק פלואורסצנטיות אוטומטית קלה ניתן לזהות דרך ערוץ FITC בבעלי החיים שמקבלים הזרקת רכב. בעוד בתאי גזע מוזרקים בעלי חיים, GFP שכותרתו תאי גזע עצביים ניתן למצוא במוח הפצוע עם ביטוי של סמני תאים שונים כמו סמן gleo GFP או סמן עצבי tujuan.
החצים הלבנים בכל תמונה מציינים תאי גזע עצביים המבטאים סמנים GFP או tujuan בהתאמה. לסיכום, הזרקה תוך-עורקית היא שיטה אפשרית לאספקה של תאי גזע עצביים לטיפול בשבץ. תאי גזע עצביים יכולים לשרוד ולהבדיל לסוגי תאים שונים בתוך המוח הפצוע.
ולבסוף, שיטת הזרקת תוך-עורקים שהוצגה כאן יכולה לשמש גם לאספקת פתרונות ומתלים.
