בעשורים האחרונים הוארך תוחלת החיים האנושית, בשל שיפור ברמת החיים והתקדמות במדעי הרפואה. גיל הוא גורם הסיכון הגדול ביותר למחלות מסכנות חיים רבות, כולל הפרעות ניווניות, כגון אלצהיימר, פרקינסון ומחלת הנטינגטון. כאן, אנו מדגימים מתודולוגיות המנצלות כמה מודלים של שיטות חדשות ורב-תכליתיות, כולל נמק המושרה על ידי ערוץ יונים היפר-אקטיבי וצבירות חלבונים גורמות לנוירוטוקסיות, לנטר ול לנתח את המנגנון המולקולרי התאי של ניוון עצבי.
שיא זחלים בריאים של לעשות ארבעה ולעשות שלושה nematodes ניוטון על צלחת מדיה צמיחה nematode, חיטוי עם E.Coli באמצעות ניתוח מיקרוסקופ סטריאו. מניחים עשרה וארבעה נמטודות, צלחת אנזימים תפילית ומגדלים אותם בטמפרטורה הסטנדרטית, של 20 מעלות צלזיוס. חמישה ימים לאחר מכן, לשטוף את הצלחת עם 1 מ"ל ו 9 חיץ ולאסוף את בעלי החיים בצינור 1.5mL.
צנטריפוגה ב 30, 000 גרם במשך 30 שניות ולהסיר את העל טבעי. הוסף 0.5 מ"ל של פתרון ציפוי. פתרון ציפוי מאוחסן בטמפרטורת החדר.
מערבולת וניטור מעת לעת עד שכולם יתמוססו. הימנע ציפוי לתקופות יותר מחמש דקות. צנטריפוגה ב 10, 000 גרם במשך 30 שניות ולהסיר את העל טבעי.
לשטוף פעמיים את הצבעים עם 1 מ"ל ותשעה מאגרים. צנטריפוגה ב 10000 גרם במשך 30 שניות ולהסיר את supernatant. לאחר הכביסה, יש להשתמש שוב בביצים ב-200 מיקרוליטרים M9 buffer ולהדיר אותן במשך 25 דקות, ב-34 מעלות צלזיוס באמבט מים.
לשמור על קבוצה נפרדת של ביצים ב 20 מעלות צלזיוס. פיפטה 100 microliters המכיל שליטה או הלם חום ביצים מטופלות ומ מניחים אותם על צלחת GN 10 unseeded. כל צלחת מכילה לפחות 100 עד 200 ביצים.
הדגירה את הביצים ב 20 מעלות צלזיוס עד הבקיעה. השתמש חוצץ M9 לשטוף צלחות ולאסוף L1 חיים nematodes בצינור 1.5 מ"ל. צנטריפוגה ב 10, 000 גרם במשך 30 שניות.
הסר את העל-טבעי ושמור על לוח הצבעים. הוסף 100 microliters של 20 מילימולר M9 חיץ levangial כדי להרדום את nematodes. Pipette 10 מיקרוליטרים של חיץ לבנגיאל M9, המכיל שעון L1 ולהרים אותם ב 2%agar-ls מקום בעדינות כיסוי על החלק העליון של המדגם.
שימו לב לשעון באמצעות מיקרוסקופיה DIC. סריקת ניוון של 630 נוירונים קולטן על ידי ספירת תאים עם מראה וירטואלי אופייני בסיוע של nematode זה. לסנכרן nematodes על ידי בחירה והעברת 15 עד 20 זחלים L4 של כל אחד בזן על חיידקים הראשונים C ולאחר מכן צלחות GM.
דגירה ולתת nematodes לגדול בטמפרטורה הסטנדרטית של 20 מעלות צלזיוס. בצע תנאים מוקדמים יומיים במשך 30 דקות על ידי העברת הצלחות באינקובטור שנקבע על 34 מעלות צלזיוס. ואז להחזיר את nematodes תנאי מוקדם בחזרה בטמפרטורה הסטנדרטית של 20 מעלות צלזיוס.
הוסף 10 microliters של 20 מילימולר M9 חיץ levangial טיפה במרכז הנקודה אגר-ls. בחר את nematodes מהועבר בהתאמה ולהעביר אותם טיפת לבנגיאל M9. מניחים 20 עד 30 נמטודות לכל טיפה.
מניחים בעדינות לכסות להחליק על החלק העליון של המדגם. לאטום את המכסה להחליק עם לק כדי לשמור על לחות לאורך כל תהליך ההדמיה. באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי בשילוב עם מצלמה, לזהות וללכוד את תמונות המחקר שלך של אזור הראש ב 20 x הגדלה.
לפקח על שבעה ימים של נמטודות מהופנטות למוות תאי עצב דופאמין. למדוד את אגרגטים policul עצבי באזור הראש של בעלי חיים מהונעים בני ארבעה ימים המבטאת 240 היתוך עם אנשים חיים. מוות תאי נמק המושרה תעלות יון היפראקטיבי הוא העיקרי nematodes כי יש ביצי תנאי מוקדם הלם חום לשעבר.
הלם חום תנאי מוקדם, קידום תחזית נגד אלפא-synuclein המושרה מוות תאי הרמפרודיט מבוגר בן שבעה ימים ומפחית Q40 אגרגטים חלבון באזור הראש של מבוגרים ארבעה ימים. הזדקנות היא תוצאה של נזק שנגרם על ידי ניוון הדרגתי של הונוסטזיס הסלולר והרקמות. לכן ההבנה של מניפולציה הקשורות לגיל עצבי לשבור הם בראש סדר העדיפויות של המקומות.
הטכניקות שהוצגו בשילוב עם גנטיקה ומסכים תרופתיים יכול להוביל להודעה של אפנונים מוות תאי נורמלי עם עניין טיפולי פוטנציאלי.
