טכניקה זו משמרת את כל שכבות הרשתית וסוגי התאים במקום, מה שהופך אותה לרלוונטית יותר מבחינה קלינית בהשוואה למודלים של בעלי חיים ומוחן. היתרון העיקרי של פרוטוקול זה הוא שהוא ממזער הפרעה בשלמות הרשתית במהלך טיפול ברקמות, החיוניות בעת השוואת רשתית בריאה וחולים. מחלות רשתית ניתן להחיות על ידי פולחן הרקמה בתנאים ספציפיים.
זה מאפשר בדיקה של טיפולים תרופתיים חדשים. הליכי הניתוח והאיסוף לדוגמה מורכבים. לכן, הדגמה חזותית היא קריטית כדי לעזור לקוראים להבין את הפרוטוקול הכתוב ולנהל את ההליך בהצלחה.
מדגים את ההליך יהיה צ'ריס קו, סטודנט שנה שנייה לדוקטורט מהמעבדה שלי. הכן את המדיום התרבותי המכיל את תערובת הנשר הבינוני/מודין F-12 של Dulbecco ותערובת אנטיביוטיקה ותרופות אנטי-מיקוטיקה. ראשית, למקם 500 microliters של בינוני בצלחת 24-well וישית אותו בחממה לחה ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני.
הכנת התקשורת לפני החילוץ המסביר נמנעת מהתנתקות מהרשתית עם התוספת הבאה. לחילוץ פסולת רשתית, התחילו בהנחת העיית על צלחת פטרי עם הקשתית והעדשה הפונה כלפי מעלה וה- ONH יוצר קשר עם צלחת הפטרי. החזק את העין יציבה בלימבוס באמצעות מלקחיים וניתק את הקשתית והעדשה על ידי ביצוע חתכים קטנים בהיקף לאורך הקצה החיצוני של הלימבוס.
הסר את הקשתית ואת העדשה בזהירות, הקפדה להימנע הפרעה הרשתית. זהה את ה- ONH באמצעות מקור אור לבן בוהק וסיתע בארבעת הרבעים לכיוון ה- ONH המסובב את צלחת הפטרי לטיפול קל יותר. מורחים ומשטחים את העית בזהירות.
החל את המלקחיים על הסקלרה במקום הרשתית כדי למנוע שיבוש שלמות הרשתית. הסר את הצלחת המכילה את המדיה המוכנה מן האינקובטור. מניחים טרפין כירורגי על הרשתית באזור ללא קפלי רשתית ולוחצים חזק כדי לחדור את הסקלרה, אשר אמור ליצור צליל פיצוח כפי שאתה לשבור את צלחת פטרי.
סובב את הטרפין כדי להבטיח שהסקלרה חדרה במלואה כך שגירוש הרשתית מופרד כעת משאר המדגם. החל את המלקחיים על sclera ולהעביר את explant רשתית כריך למדיום התרבות. תרבות רשתית הכריכים שנאספו ב-37 מעלות צלזיוס עד 72 שעות בחממה לחה של 5% פחמן דו חמצני.
כתמי המטוקסילין ואוסין הראו כי רשתות הכריך שמרו על שלמות ומבנה lamellae מובחן מה- GCL ועד ה- ONL עם גרעינים קומפקטיים בשכבות הגרעיניות הפנימיות והחיצוניות. שלמות רשתית משובשת נמצאה בשולי אותה מדגם שבו הרשתית התנתקה מהכורואיד והסקלרה הבסיסיים המציגים עובי רשתית מופחת ואובדן גרעינים ב- INL וב- ONL. לא נמצאו גרעיני תאים חיוביים TUNEL, המסמן אפופטוזיס תאי, נמצאו explants רשתית תרבית בתנאים בסיסיים, להפגין חיוניות תאית מתמשכת גם לאחר 72 שעות.
תיוג GFAP הוגבל ל- GCL ול- IPL ללא פיברוזיס גליה, סימן לפתולוגיה אשר יזוהה כביטוי מורחב של GFAP לתוך ONL. Vimentin התבטא מאוד משכיית תא הגנגליון לשכבה הגרעינית החיצונית, מראה שלמות תא מולר השתמר כפי שניתן לראות ברקמות רשתית נורמליות. בדיקת מג'ייז מגנטית Luminex הראתה כי IL-18, VEGF, IL-6 ו- IL-8 גדלו באופן משמעותי מעל קו הבסיס בתרביות explant רשתית כריך גלוקוז גבוה וציטוקינים פרו דלקתיים לאחר 24 שעות.
לאחר 72 שעות, רמות IL-18 ו-VEGF נותרו גבוהות משמעותית, אך לא נמצא הבדל משמעותי ברמות IL-6 ו-IL-8. בעת ביצוע הליך זה, להשאיר מספיק שרץ שיורית, אשר ישקול את הרשתית למטה, כך שהוא לא להתנתק choroid RP לצוף בתקשורת התרבות. הרשתית התרבותית יכולה להיות מאופיינת עוד יותר באמצעות אימונוהיסטוכימיה והיסטולוגיה, בעוד שניתן למדוד את הציטוקינים הדלקתיים המשתחררים למדיום התרבותי באמצעות בדיקה מגנטית של Luminex.
מודל זה ניתן לתרגום קליני יותר בהשוואה למודלים של בעלי חיים ומבחנה, מה שהופך מתאים יותר לבדיקת היעילות של תרופות טיפוליות חדשניות למחלות רשתית.
