תנועת שן אורתודונטית היא תהליך ביולוגי מורכב הכולל כוחות חיצוניים ושיפוץ של רקמות רכות וקשות כאחד. כדי להבין תהליכים אלה, חיוני לחקור את השן ואת רקמות חניכיים בתוך ההקשר 3D. מודל מורין הוא מועמד טוב למחקרים כאלה בשל גודלו, קצב חילוף החומרים הגבוה והמידע הגנטי העצום שיש לנו.
עם זאת, יצירת תנועת שן אורתודונטית בעכברים אינה קלה בשל גודלם הקטן. בנוסף, שיטות ניתוח מבניות בדרך כלל כרוכות בסעיף, אשר משבש את המבנה וההקשר 3D של הרקמה. עבור רקמה לא אחידה, כגון PDL, שימור המבנה וההקשר של תלת-ממד הוא בעל חשיבות קריטית.
כדי לטפל בשני מכשולים אלה, אנו מספקים פרוטוקול ליצירת תנועת שן אורתודונטית מסיאלית של הטוחנת הלסת התחתונה הראשונה בעכברים ומתארים שתי שיטות המאפשרות הדמיה תלת-ממדית של רצועה חניכיים מבלי לקטע את הרקמה. כדי למקם את העכבר המורדם להכנסת התקן אורתודונטי, חבר את החותך העליון ללולאת מהדק הנייר. לשתק את החותכות התחתונות באמצעות שרשרת החשמל ולפתוח את הפה עוד יותר עם רקטור עכבר מיני קוליברי.
החל טיפה קטנה של מלוחים על כל עין כדי למנוע התייבשות הקרנית. אלה הם הכלים המשמשים בהכנסת התקן. חותכים חתיכת חוט אלומיניום לסנטימטר אחד באורך.
באמצעות מחזיק מחט מיקרוכירורגי, להחליק את החוט מהצד buccal לשונית באזור הבין-פרוקסימלי מתחת לנקודת המגע בין הטוחנות הראשונה והשניה. משוך את החוט מהצד הלשונית לכיוון הצד mesial של הטוחנת. סובב את הקצוות החופשיים של החוט פעמיים עד שלוש פעמים כדי לאבטח.
חותכים חתיכת טיטניום ניקל או סליל NiTi האביב סביב שבעה עד תשעה חוטים אורך. הכנס את סליל בין טוחנת הראשונה התחתונה חותך, להעביר קצה אחד פנוי של החוט דרך שני חוטים של סליל, ולאחר מכן לסובב את שני הקצוות של החוט בחוזקה כדי לתקן את סליל טוחנת. הסר את שרשרת החשמל באמצעות זוג פינצטה.
לולאה שניים עד שלושה חוטים של סליל מעל החותך כדי לעגן את סליל. השאירו בדיוק שלושה חוטים פעילים בין הטוחנת הראשונה לבין החותך. החלק את האיומים כלפי מטה אל שולי חניכיים חופשיים של החותך.
מניחים שכבה של שרף מרוכב זרימה על הגבול החותך של סליל לרפא אותו עם אור ריפוי שיניים. החלף את שרשרת החשמל לאחר ריפוי שרף. לקצץ חוט עודף סביב הטוחנת כדי למנוע פציעות.
באמצעות אותו אור ריפוי, לחמם את סליל NiTi במשך 20 שניות. זה יהיה להדק את סליל, מיקום סיים צריך להיראות ככה. ניתן להסיר רקמה רכה על ה-hemi-mandible המנותח עם מגבון ללא מוך.
עם מדגם בין שתי אצבעות, לשפשף את החיצוני בתנועה מעגלית עד שרוב הרקמה הרכה מוסרת. את השאר ניתן לנתק באמצעות זוג מספריים. הלסת התחתונה הנקייה מוצגת כאן מימין.
כדי לעלות על ההמי-לסת התחתונה המנותחת בתא הדגימה מסריקת מיקרו CT, לעצב שרף שיניים בגודל גרגר אורז לתוך בול עץ. ואז למקם אותו לתוך חריץ המדגם של הבמה. הנח את ההמי-מנדוס על המרוכב.
כוונן את המיקום עד שהטוחנת הראשונה תתמקד בחריץ קו האמצע ומשטח החסימה יהיה אופקי. לרפא את מרוכבים כאשר מרוצה עם המיקום. זוהי דוגמה של הלסת התחתונה בעמדה נכונה.
קח כדור קטן של שף שיניים לאריזה. קוטרו צריך להיות סביב רוחב הטוחנת. מניחים את השרף על פני השטח ההסתגרים של הטוחנת הראשונה.
לנגב מוך ללא מוך עם מים. מניחים את המגבון הרך בתוך בריכות הלחות בשלב המדגם. סגור את תא הדגימה והדבק אותו למיקרו CT עם ברגים.
עכשיו לצלם תמונות דו-מימדיות תוך הנמכת הסדן אנכית עד קצה הסדן מוקף מורכב. כבו בבטחה את מקור הרנטגן, פתחו את תא המיקרו CT וריפוי המרוכב דרך חלון הפלקסיגלס הצלול. עכשיו המדגם נטען כראוי וניתן לדמיין לפי הצורך.
כדי ליצור מדגם hemi-mandible מנוקה אופטית, להכין את הפתרונות הבאים בצינורות צנטריפוגה 1.5 מיליון. 4%פארפורמלדהיד, 50% ו-70% אתנול במים שעברו דה-יון. שתי צינורות של 100% אתנול ואתיל קינמט.
מקום מנותח hemi-mandible ב 4% paraformaldehyde. מכסים את הצינור בנייר אלומיניום ומניחים על נדנדה על תפאורה עדינה במשך שש שעות בטמפרטורת החדר. לאחר שש שעות, להעביר את הדגימה לתוך 50% אתנול.
מניחים את הדגימה בחזרה על הנדנדה במשך 16 שעות מכוסה מאור. חזור על השלב הקודם עם מדגם ב 70% אתנול במשך 16 שעות ואחריו 100%אתנול פעמיים במשך 16 שעות בכל פעם. לבסוף להעביר את המדגם כדי cinnamate אתיל למינימום של 12 שעות.
תנועה אורתודונטית אמינה נוצרת על ידי מכשיר סליל NiTi בנדיבולת מורין הטוחנת הראשונה. בעכברים זכרים בני תשעה שבועות, המרחב הבין-פרוקסימלי הממוצע הוא 40 מיקרון לאחר שבעה ימים. שיפור פאזה מיקרו CT מאפשר הדמיה של PDL.
לאחר שלושה ימים של תנועה אורתודונטית mesial, צפיפות PDL מצטמצמת. ממשק PDL העצם מחוספס יותר עקב התפתחות מכתשים במשטח העצם, המעידים על פעילות אוסטאוקלסטית ו ספיגת עצם. משטח מחוספס ניתן לראות בכל רמות השורשים.
זה מראה שהתנועה היא תרגום לעומת תנועת הטיה. ביום השביעי, שטח PDL הוא צר יותר מאשר ביום השלישי ואת גבול PDL העצם על פני השורש דיסטלי הוא חלק יותר אשר סימנים של התנגדות העצם כצפוי כאשר מתרחשת תנועת השן האורתודונטית. בשל זמן הדמיית CT מיקרו ארוך ואת הסיבוב של הבמה, הרכבה מאובטחת של המדגם הוא חיוני.
מדגם לא יציב שבו תוצאות סריקות מטושטשות שבו צללית ניתן לראות סביב הכתר ואת סיבי PDL אינם נראים. ניקוי אופטי באמצעות ethyl cinnamate מספק שיטה נוספת כדי להציג את PDL ללא חתך. ניתן לראות את המצע דרך הרמוס של מדגם שנוקה כראוי המוצג כאן מימין.
שיטה זו, משמרת פלואורסצנטיות אנדוגנית וניתן להשתמש בה ללא קיבעון כימי. ניתן להשתמש במיקרוסקופיית גליון אור בדגימות מנוקות. עם עכבר מהונדס, ניתן לראות את רירית כלי הדם הפלואורסצנטיים.
אם העצם לא נוקתה כראוי, כלי הדם ב- PDL אינם גלויים כפי שמוצג בפאנל F.This פרוטוקול זה תיאר כיצד להתגבר על שני אתגרים עיקריים ביצירת וניתוח תנועת השן האורתודונטית בשיניים טוחנת מנדיבולרית מורין. לאחר טכניקת תנועת השן האורתודונטית שולטת, זה יכול להסתיים בתוך 15 דקות. תהליך זה מאתגר בשל הממדים הקטנים של שיני העכבר ונוכחות הלשון.
עם זאת, אנו מספקים את כל הפתרונות הדרושים כדי להתגבר על אתגרים אלה. הדמיית המיקרו CT דורשת יכולת שיפור פאזה. הדגמנו את הטכניקה שלנו באמצעות מיקרו CT ספסל. עם זאת, כל התקנה שיכולה ליצור שיפור פאזה תעשה, לדוגמה, סינכרוטרון.
תוצאות הסליקה של ECi תלויות בתהליך ההתייבשות. אם המדגם אינו שקוף מספיק, ההצעה שלנו היא להגדיל את הזמן של צעדי התייבשות. ניתן להשתמש בשיטת הסליקה שלנו גם בדגימות לא משוינות.
ניתן לסרוק את הרקמות הברורות במיקרו CT מכיוון שתהליך הסליקה אינו משפיע על תכולת המינרלים של הרקמה. לכן השיטה שלנו מספקת גישה מתואמת עבור פלואורסצנטיות ומידע מבני כדי ליצור ניתוח תלת מימדי מלא.
