Ortodontik diş hareketi, dış kuvvetleri ve hem yumuşak hem de sert dokuların yeniden şekillendirini içeren karmaşık bir biyolojik süreçtir. Bu süreçleri anlamak için diş ve periodontal dokuların 3D bağlamda incelenmesi kritik öneme sahiptir. Murine modeli büyüklüğü, yüksek metabolizma hızı ve sahip olduğumuz geniş genetik bilgiler nedeniyle bu tür çalışmalar için iyi bir adaydır.
Bununla birlikte, farelerde ortodontik diş hareketi oluşturmak küçük boyutları nedeniyle kolay değildir. Ek olarak, yapısal analiz yöntemleri genellikle dokunun 3D yapısını ve bağlamını bozan bölümleme içerir. PDL gibi tekdüze olmayan bir doku için, 3D yapıyı ve bağlamı korumak kritik bir öneme sahiptir.
Bu iki engeli gidermek için, farelerde ilk mandibular azı dişinin mesial ortodontik diş hareketini oluşturmak için bir protokol sunuyoruz ve dokuya bölümlemeden periodontal ligamentin 3D görselleştirilmesini sağlayan iki yöntemi açıklıyoruz. Uyuşturulduğu fareyi ortodontik cihaz yerleştirme için konumlandırmak için üst kesici dişini ataş döngüsüne bağlayın. Güç zincirini kullanarak alt kesici dişleri hareketsiz hale getir ve mini-colibri fare retraktörü ile ağzı daha fazla açın.
Kornea dehidrasyonunu önlemek için her göze küçük bir damla salin uygulayın. Bunlar aygıt eklemede kullanılan araçlardır. Bir parça alüminyum teli bir santimetre uzunluğa kesin.
Mikrocerrahi iğne tutucu kullanarak, birinci ve ikinci azı dişleri arasındaki temas noktasının altındaki interproksimal alanda teli bukkal taraftan lingual olarak kaydırın. Teli dil tarafından azı dişinin mesial tarafına doğru çekin. Sabitlemek için telin serbest uçlarını iki ila üç kez çevirin.
Bir parça nikel titanyum veya NiTi bobini yaklaşık yedi ila dokuz iplik uzunluğunda yay kesin. Bobini alt ilk azı dişi ve kesici diş arasına yerleştirin, telin bir serbest ucunun bobinin iki ipliğinden geçirin, ardından bobini azı dişine sabitlemek için telin her iki ucunun her iki ucunun sıkıca bükül. Bir çift cımbız kullanarak güç zincirini çıkarın.
Bobini tutturmak için iki ila üç iş parçacığını kesici dişin üzerine döngün. İlk azı dişi ve kesici diş arasında tam olarak üç aktif diş bırakın. Tehditleri kesici diş kesme boşluğuna kaydırın.
Bobinin insidans sınırına bir akışlı kompozit reçine tabakası yerleştirin ve diş kürleme ışığı ile kürleyin. Reçineyi iyileştirdikten sonra güç zincirini değiştirin. Yaralanmaları önlemek için azı dişinin etrafındaki fazla kabloyu kesin.
Aynı kür ışığını kullanarak NiTi bobinini 20 saniye ısıtın. Bu bobini sıkılaştıracak, bitmiş yerleştirme böyle görünmelidir. Parçalanmış hemi-mandibula üzerindeki yumuşak doku tüy bırakmayan bir mendille çıkarılabilir.
İki parmağın arasında bir örnekle, yumuşak dokunun çoğu çıkarılana kadar dış kısmı dairesel hareketle ovalayın. Gerisi bir makas kullanılarak kesilebilir. Temizlenmiş mandibula burada sağda gösterilmiştir.
Mikro CT taramasından örnek hazneye parçalanmış hemmi mandibulayı monte etmek için pirinç tanesi büyüklüğünde paketlenebilir diş reçinesini bir kütüğe şekillendirin. Daha sonra sahnenin örnek yuvasına yerleştirin. Hemi-mandibulayı kompozitin üzerine yerleştirin.
İlk azı dişi orta çizgi oluğuna ortalanana ve tıkanıklık yüzeyi yatay olana kadar konumu ayarlayın. Konumlandırmadan memnun kaldığında kompoziti iyileştirin. Bu, uygun konumdaki mandibulanın bir örneğidir.
Küçük bir top paketlenebilir diş reçinesi alın. Çapı azı dişinin genişliği civarında olmalıdır. Reçineyi ilk azı dişinin oklüzal yüzeyine yerleştirin.
Tüy bırakmayan silmeyi suyla nemlendirin. Sönümlenmiş silme işlemini numune aşamasındaki nem havuzlarının içine yerleştirin. Numune haznesini kapatın ve vidalarla mikro CT'ye yapıştırın.
Şimdi örs ucu kompozitle çevrilinceye kadar örs dikey olarak indirirken 2D görüntüler alın. X-ışını kaynağını güvenli bir şekilde kapatın, mikro CT odasını açın ve kompoziti şeffaf pleksiglas pencereden iyileştirin. Şimdi örnek düzgün monte edilir ve gerektiğinde görüntülenebilir.
Optik olarak temizlenmiş hemami mandibula numunesi üretmek için 1,5 milyon santrifüj tüpünde aşağıdaki çözümleri hazırlayın. Deiyonize suda %4 paraformaldehit, %50 ve %70 etanol. %100 etanol ve etil cinnamat iki tüp.
%4 paraformaldehitte parçalanmış hemi-mandibula yerleştirin. Tüpü alüminyum folyo ile örtün ve oda sıcaklığında altı saat boyunca yumuşak ayarda bir rocker üzerine yerleştirin. Altı saat sonra, numuneyi% 50 etanol içine aktarın.
Numuneyi ışıktan kaplı 16 saat boyunca rocker'a geri yerleştirin. Önceki adımı 16 saat boyunca% 70 etanolde bir örnekle tekrarlayın ve ardından her seferinde 16 saat boyunca iki kez% 100 etanol. Son olarak, numuneyi en az 12 saat boyunca etil cinnamat'a taşıyın.
Güvenilir ortodontik hareket, NiTi bobin cihazı tarafından murine mandibular ilk azı dişinde üretilir. Dokuz haftalık erkek farelerde, ortalama interproksimal alan yedi gün sonra 40 mikrondur. Faz geliştirme mikro BT, PDL'nin görselleştirilmesine izin verir.
Üç günlük mesial ortodontik hareketlerden sonra PDL yoğunluğu azalır. Kemik PDL arayüzü, kemik yüzeyinde osteoklastik aktivite ve kemik erimesinin göstergesi olan kraterlerin gelişmesi nedeniyle daha pürüzlüdür. Pürüzlü yüzey köklerin her seviyesinde görülebilir.
Bu, hareketin bir devrilme hareketinin aksine çevirisel olduğunu gösterir. Yedinci günde PDL alanı üçüncü güne göre daha dardır ve distal kök yüzeyindeki kemik PDL kenarlığı, ortodontik diş hareketi gerçekleştiğinde beklendiği gibi kemik muhalefeti belirtileri olan daha pürüzsüzdür. Uzun mikro BT görüntüleme süresi ve aşamanın dönüşü nedeniyle, numunenin güvenli bir şekilde montesi esastır.
Tacın etrafında bir siluet görülebilen ve PDL liflerinin görülmediği bulanık taramalarla sonuçlanan kararsız örnek. Etil cinnamat kullanılarak optik temizleme, PDL'yi bölümlemeden görüntülemek için başka bir yöntem sağlar. Substrat, burada sağda gösterilen yeterince temizlenmiş bir numunenin ramus'undan görülebilir.
Bu yöntem, endojen floresan korur ve kimyasal fiksasyon olmadan kullanılabilir. Işık çizelgesi mikroskopisi temizlenmiş numunelerde kullanılabilir. Transgenik bir fare ile floresan kan damarı astarları gözlenebilir.
Kemik düzgün bir şekilde temizlenmediyse, PDL'deki kan damarları panelde gösterildiği gibi görünmez F.Bu protokol, murine mandibular azı dişlerinde ortodontik diş hareketinin üretilmesinde ve analizinde iki büyük zorluğun nasıl üstesinden gelindiğini açıklamıştır. Ortodontik diş hareketi tekniğine hakim olduktan sonra 15 dakikada tamamlanabilir. Bu işlem, fare dişlerinin küçük boyutları ve dilin varlığı nedeniyle zordur.
Ancak, bu zorlukların üstesinden gelmek için gerekli tüm çözümleri sunuyoruz. Mikro BT görüntüleme bir faz geliştirme yeteneği gerektirir. Tekniğimizi tezgah üstü mikro BT kullanarak gösterdik. Ancak, faz geliştirme oluşturabilecek herhangi bir kurulum, örneğin bir senkrotron yapacaktır.
ECi temizleme sonuçları dehidrasyon işlemine bağlıdır. Örnek yeterince şeffaf değilse, önerimiz dehidrasyon adımlarının süresini artırmaktır. Temizleme yöntemimiz düzeltilmemiş numunelerde de kullanılabilir.
Temizleme işlemi dokunun mineral içeriğini etkilemediği için şeffaf dokular mikro BT'de taranabilir. Bu nedenle yöntemimiz, floresan ve yapısal bilgilerin eksiksiz bir 3D analiz oluşturması için korelatif bir yaklaşım sağlar.
