מחקרים על חיסון אימהי והעברת נוגדנים הם לא יסולא בפז מסיבות רבות שכן זהו המסלול הראשוני של העברת חסינות והגנה עוקבת מפני פתוגנים ומחלות אצל תינוקות ותינוקות. בשל קווי דמיון בין שליה והעברת נוגדנים עם בני אדם, ארנבות הן מודל מצוין של חיסון אימהי. במאמר וידאו זה אנו מדגימים טכניקות המעבדה שלנו השתמשה במחקרים של חיסון אימהי בניו זילנד ארנבים לבנים, כולל חיסון תוך-אפי ואוסף חלב.
תחילה נתאר ציר זמן לדוגמה וסדרת אירועים למחקר חיסון אימהי רירי בארנבים הלבנים של ניו זילנד. ארנבות מחוסנות דרך המסלול התוך-אנליאתי, כפי שמודגם בסרטון זה. בהתאם למחקר, החיסון עשוי לדרוש דחיפה או ייתכן שיהיה צורך לתת דרך מסלול נוסף, כגון חיסון תוך שרירי.
למרות שלא תואר, יש לאסוף דם לפני החיסון הראשוני למדידות בסיסיות, ולאורך שארית המחקר במרווחי זמן קבועים. דם מתקבל בקלות על ידי עורק האוזן המרכזית עם סם מתון וסוכן משכך כאבים מקומי. נוכחות של רמות IgG ספציפיות לאנטיגן ניתן למדוד בדגימות אלה.
ארנבים הם גידלו אז. אנו מעדיפים לרכוש מגדלים מוכחים מספקים לשימוש כדי להבטיח שיעור הריון גבוה יותר עבור מחקרים אלה. בהתאם לציר הזמן של החיסון, ארנבים עשויים לקבל חיסונים נוספים במהלך ההריון.
IgG ספציפי לאנטיגן מועבר באופן טרנס-פלסנטי לערכות. בערך 30 עד 32 ימים לאחר הרבייה בהריון עושה להצית. אנו ממליצים להגביל את הטיפול בערכות בימים הראשונים כדי למזער את הדחייה מהערכות.
דגימות דם ניתן לאסוף מן הערכות כדי להעריך את רמות אנטיגן ספציפי IgG שהועברו transplacentally. ניתן לאסוף דם ממספר קטן של ערכות בזמן הלידה או בסמוך לו כדי להעריך את רמות הנוגדנים הספציפיות לאנטיגן מוקדם. בנוסף למגוון רחב של חומרים מזינים, ערכות מקבלות IgA ספציפי אנטיגן מן האלנה מניקה בזמן הנקה.
ערכות ננזפות בדרך כלל בגיל ארבעה עד שמונה שבועות. לפני היתוך חלב ניתן לאסוף בקלות מן הנקה עושה כפי שהוכח בסרטון זה. דגימות החלב שנאספו מעובדות לאחר מכן לגילוי IgA ספציפי אנטיגן.
בהתאם למחקר, חיסונים דחיפה יכול להינתן ערכות ודגימות דם סדרתי ניתן לאסוף מן הערכות בגיל צעיר מאוד באמצעות הווריד saphenous לרוחב. כעת נדגים חיסון תוך-אפי ואיסוף חלב בארנבים הלבנים של ניו זילנד.פרוטוקול. כל ההליכים אושרו ובוצעו בהתאם למדיניות הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת דיוק.
חיסון תוך-אפי. חומרים הדרושים:Acepromazine, מזרק ומחט, חומר סיכה עיניים, Isoflurane, חרוט האף, פיפטה, וטיפים פיפטה, חיסון ריר. הכינו את פתרון החיסון לפני הטיפול בבעלי חיים.
ארנבים מסוממים עם Acepromazine מיליגרם אחד לקילוגרם תוך שרירית, ומרדים עם Isoflurane באמצעות חרוט האף. לאחר הרדמה מלאה כפי שהוערך על ידי רפלקס עפעפיים, חומר סיכה עיניים מתווסף לכל עין כדי למנוע ייבוש של העיניים וכיב הקרנית הבאים. ברגע שחבר המעבדה מוכן לנהל את החיסון והארנב נמצא במישור הרדמה הולם, כבה את האירופלורן והחמצן והסר את חרוט האף.
מניחים את הארנב בנסיכות הגב ומפעילים את הצוואר והראש בזווית משוערת של 45 מעלות המאפשרת גישה קלה והדמיה של שני האמה על ידי חבר המעבדה המנהל את החיסון. לטעון את פיפטה עם לא יותר מ 100 microliters של פתרון החיסון במהירות לנהל את הפתרון נחיר אחד ולחזור על ההליך עבור הנחיריים השני. הפיפט צריך להיות מוחזק בזווית משוערת של 45 מעלות.
זווית לכיוון ההיבט המדיאלי של מעבר האף. מטרת החיסון היא שהפתרון הוא ליצור קשר עם הקרומים הריריים של הנארס. אז הטיפ לא צריך להיות ממוקם בתוך nares כמו זה עלול לגרום שחיקה או גירוי של רקמות הרירית ועלול להשפיע על האימונוגניות של החיסון מנוהל באף.
החיסון צריך להינתן במהירות ונעשה באותו אופן בנחיריים האחרים. לאחר הממשל בשני מעברי האף, הארנב נשמר בנסיכות הגב למשך 30 שניות כדי למזער את הדליפה של פתרון החיסון. המעבדה בדרך כלל תנהל לא יותר מ -100 מיקרוליטר לכל נחיריים בכל פעם.
אם נפח גדול יותר הוא להינתן עם נפח כולל מרבי של 500 microliters, החיסון יכול להינתן 100 aliquots microliter עם תקופת מנוחה של 30 שניות בין חיסונים. וממשלים נוספים של חיסון חוזרים על עצמם עם 30 שניות של מנוחה בין כל ממשל עד לנפח החיסון הכולל מועבר. לאחר החיסון, מניחים את הארנב על האוורור להחלמה ומנטרים מקרוב את החיה עד שהיא מסוגלת לשמור על שכיבה קשה.
במקרים מסוימים, ניסוח החיסון לא יכול להיות מועבר לחלוטין לחלל האף וחלק של ניסוח החיסון עשוי להישאר בחלק החיצוני של nares. במקרה זה, מכיוון שלא ברור מהו הנפח המדויק של החיסון שהועבר כראוי לחלל האף, אל תמליץ על שכפול מחדש של חומר חיסון נוסף שכן זה יוסיף משתנה לא מוגדר לניסוי. חשוב להשתמש בטכניקת אספקת חיסונים המספקת אספקה מלאה ועקבית של ניסוח החיסון לנארס.
אוסף חלב. חומרים הדרושים:Acepromazine, מזרקים ומחטים, אלכוהול ספוגית, גזה, חומר סיכה עיניים, Isoflurane, חרוט האף, אוקסיטוצין, בקבוקון אוסף. ארנבים מסוממים עם Acepromazine מיליגרם אחד לקילוגרם תוך שרירית, ומרדים עם Isoflurane באמצעות חרוט האף.
לאחר הרדמה מלאה כפי שהוערך על ידי רפלקס עפעפיים, חומר סיכה עיניים מוחל על כל עין כדי למנוע ייבוש של העיניים ואת כיב הקרנית הבאים. נקה את העור מעל וריד האוזן השולי עם ספוגית האלכוהול. באמצעות מזרק מיל אחד ומחט 25 מד, לנהל בערך אחת עד שתי יחידות בינלאומיות של אוקסיטוצין דרך הווריד על ידי וריד האוזן השולי כדי לגרום חלב לאכזב.
בשל הרפיה בשרירים חלקה, זה נפוץ עבור הארנב להשתין או לעשות את צרכיו לאחר הממשל של אוקסיטוצין. לאחר ניהול אוקסיטוצין, להפעיל לחץ על אתר ההזרקה עם חתיכת גזה כדי לספק עצירת דימום. תוך שמירה על מסכת ההרדמה או חרוט האף מעל אפו של הארנב, הנח את הארנב על מגוריו האחוריים.
כהערת שוליים, אוסף חלב יכול להתבצע גם עם החיה בנסיכה לרוחב, אבל המעבדה מגלה כי האוסף קל יותר כאשר הארנב הוא נשען על זה עכוז עם עוזר מחזיק את הארנב זקוף עם מסכת הרדמה. פתח את הצינור הסטרילי כדי להתכונן לאיסוף חלב ולאתר את רקמת החלב ואת הפטמות הקשורות. ארנבים בדרך כלל יש ארבעה עד חמישה זוגות של בלוטות החלב.
הפטמות מוקפות בדרך כלל בפרווה רטובה מההנקה האחרונה ורקמת החלב מוחשית בקלות כאשר היא מלאה בחלב. לתפוס את רקמת החלב הקשורים פטמה בין האגודל והאצבע ולהחיל לחץ עיסוי עדין על רקמת הבלוטות לכיוון הפטמה. מניחים את צינור האיסוף מעל הפטמה כדי לאסוף את החלב המובע.
זה יכול לפעמים לקחת כמה דקות עבור אוקסיטוצין להיות יעיל, ייצור החלב נראה להשתנות בין בלוטות החלב. אם ביטוי החלב אינו מוצלח, המתן מספר דקות או הסתובב בבלוטת החלב הנוספת. חלב מכל הפטמות ניתן לאסוף באותו נתעב.
בדרך כלל כמה מיליליטר של חלב ניתן לאסוף בקלות מן פלוני מניקה. לאחר איסוף נפח החלב הרצוי, כבו את איזופלוראן והחמצן והוציאו את חרוט האף מהארנב, ואפשרו לארנב להתאושש תוך פיקוח הדוק עד שהחיה תוכל לשמור על שכיבה קשה. תוצאות מייצגות.
איור 1. עבור מחקרים אימהיים, קביעת הריון מוקדם ככל האפשר הוא מועיל כדי לאשר כי האיילה לא צריך להיות bred מחדש. אפשרויות לגילוי הריון כוללות מישוש, אולטרסאונד, רדיוגרפים, עלייה במשקל, וטכניקות מולקולריות כגון מדידות של גורמי גדילה אינסולין ופרוגסטרון.
רמות פרוגסטרון נאותה נחוצות לשמירה על ההריון בארנבים. לכן מספר מחקרים גם העריכו את רמות הפרוגסטרון בארנבים בהריון והפגינו רמות גבוהות יחסית לארנבים שאינם בהריון, במיוחד במהלך אורגנוגנזה סביב אמצע ההריון. כפי שמוצג באיור הראשון, רמות פרוגסטרון גבוהות ניתן לזהות ארנבות בהריון לעומת ארנבים שאינם בהריון גם לאחר הזדווגות על ידי דולר אושרו עבור כל עושה.
רמות פרוגסטרון בסרום נמדדו באמצעות בדיקת chemiluminescent אוטומטית. איור 2. אנטיגן ספציפי IgG שהועבר transplacentally במהלך ההריון ניתן למדוד בסרום של ערכות על ידי אליסה.
ניתן לאסוף דם ממספר קטן של ערכות בזמן הלידה או בסמוך לו כדי להעריך את רמות הנוגדנים הספציפיות לאנטיגן מוקדם. איסוף דם סדרתי הוא מבחינה טכנית הרבה יותר קל כמו ערכות גיל ולהגדיל את גודל. כפי שמתואר באיור 2, ניתן למדוד את רמות הסרום של IgG ספציפי לאנטיגן בערכות ולהשוות אותן לרמות האימהיות.
רמות IgG המועברות באופן אימהי גבוהות יותר בלידה ויורדות עם הזמן. איור שלוש. חלב ארנב יכול להיאסף כפי שמוצג בסרטון זה, ומעובד כדי למדוד את רמות הנוגדנים הספציפיות לאנטיגן על ידי אליסה.
כפי שמוצג בנתון זה, IgA מהווה חלק משמעותי מכלל הנוגדנים בחלב אם הזמינים להעברה פסיבית לערכות. שתי רמות IgA ו- IgG גבוהות משמעותית מ- IgM.Summary. מאמר וידאו זה מתאר ומדגים את הממשל של חיסונים תוך-אפיים ואת איסוף החלב מארנבים מניקים כאמצעי להערכת חסינות הרירית במודל מתאים לתרגום של חיסון אימהי.
מתואר הוא תמונת סיכום עבור עיצוב מחקר חיסון תוך-חיסוני אימהי טיפוסי המשלב את החיסונים, הרבייה, ההצתה, ההנקה והעברת הנוגדנים.
