פרוטוקול זה משווה את העומס על רובד עמילואיד-בטא בקטעים שלמים בעלי עניין ותת-אזורים בעלי עניין בקטעי מוח מעכברים מהונדסים של APP/PS1. השיטה והתוצאות המוצגות בפרוטוקול המסוים הזה יאפשרו לקוראים או לחוקרים לבחור בין אזור העניין המלא או בין תת-אזור הניתוח המעניין כדי לקבוע עומס בטא בקטעי מוח של עכברים. כדי להתחיל, הורד את תוכנת ניתוח התמונות.
לאחר ההתקנה, הפעל את התוכנה ולחץ על הקובץ, ולאחר מכן פתח ובחר את התמונה לניתוח. משורת הכלים של התוכנה, בחר את הכלי הישר וצייר קו ישר לאורך סרגל קנה המידה. לחץ על הניתוח ולאחר מכן לחץ על כרטיסיות קנה המידה שהוגדרו.
שוב, לחץ על הניתוח ולאחר מכן מדוד כרטיסיות כדי לציין את האורך או המרחק של סרגל קנה המידה בפיקסלים. בחלון הקופץ, הזן את המרחק בפיקסלים, את המרחק הידוע של סרגל קנה המידה, והזן את יחידת האורך כמיקרומטר. לאחר מכן, סמן את התיבה הכללית כדי להחיל את הגדרת קנה המידה החדשה על כל התמונות הבאות, אם תמונות מרובות מעובדות.
לחץ על אישור כדי להחיל את ההגדרות. כדי להגדיר את המדידה הרצויה לאזור המקטע, עבור לניתוח ולאחר מכן הגדר מדידות ובחר את תיבות האזור והתוויות של התצוגה. ודא שהתמונה המנותחת נבחרה תחת הכרטיסיה 'ניתוב מחדש אל'.
כדי להקל על ההדמיה של ההיפוקמפוס או קליפת המוח, עבור אל התמונה והתאם את הבהירות או הניגודיות. גרור את סרגל ההחלקה המרבי בהדרגה שמאלה כדי להגביר את בהירות הרקמות עד שניתן יהיה לזהות את אזורי המוח המעניינים או את ההחזר על ההשקעה. השתמש בכלי הבחירה המצולע או היד החופשית כדי לתאר את אזור ההיפוקמפוס.
לאחר שהאזור מתואר, לחץ על אפשרות האיפוס של הגדרות הבהירות או הניגודיות כדי לחזור לבהירות המקורית. כדי למדוד את שטח הרקמה הכולל של האזור שנבחר, לחץ על העריכה ונקה בחוץ. לאחר שהאזור שנבחר הוא התמונה היחידה על המסך, לחץ על הניתוח ולאחר מכן מדוד כרטיסיות כדי לקבל את שטח הרקמה הכולל שנותח בחלון קופץ.
לאחר מכן, שמור את הנתונים בקובץ Excel. כדי למדוד את האזור החיובי המוכתם 6-E10, עבור אל הכרטיסיות 'סף צבע' לתמונה, התאם וצבע לפי הסדר. מסנן מוכן מראש תחת שיטת הסף מספק את התוצאות הרצויות המדגישות את האותות החזקים ביותר באדום.
לאחר בחירת הסף המתאים, בדוק את הרקע הכהה כדי להדגיש את כתמי הבטא עמילואיד על רקע שחור. לחץ על הבחירה, לאחר מכן המקורי, ושוב בחר, נותן את האותות הכהים של הפקדות בטא עמילואיד על רקע לבן. כאשר החלון הקופץ נוצר, לחץ על הכרטיסייה לנתח ולנתח חלקיקים, ולחץ על אישור. העתק את פלט הסיכום שנוצר על ידי התוכנה על-ידי לחיצה על לחצני העריכה וההעתקה.
לאחר מכן, הדבק לתוך קובץ Excel שהתחיל בעבר עם תוויות מתאימות. חשב את האזור החיובי של אחוז 6E-10 באמצעות הנוסחה לאחר הורדת תוכנת ניתוח התמונות, בצע את השלבים עד שניתן יהיה לזהות את החזר ההשקעה במוח, כפי שהודגם קודם לכן. לאחר מכן, באמצעות כלי המלבן, בחר את ההחזר על ההשקעה בקליפת המוח או בהיפוקמפוס.
בסרגל הכלים, לחץ על ערוך ולאחר מכן בחר וציין את הכרטיסיה המשנה את הגובה והרוחב לערך מוגדר מראש. התאם את הקופסה כך שהיא תכוסה לחלוטין על ידי הרקמה. אפס את הבהירות או הניגודיות לבהירות המקורית.
שכפל את ההחזר על ההשקעה שנבחר על-ידי לחיצה ימנית על התיבה ולחיצה על הכפילות. ייפתח חלון חדש עם האזור שנבחר. שנה את שם התמונה המשוכפלת כדי להציג את האזור שבו היא ממוקמת.
התאם את סוג התמונה המשוכפלת באמצעות סרגל הכלים ולחיצה על התמונה, ולאחר מכן הקלד מקשי 8 סיביות כדי להמיר את תמונת ה- RGB המשוכפלת ל- 8 סיביות, כדי לנתח בצורה הטובה ביותר את השלטים. הפוך את התמונה על-ידי לחיצה על ערוך ולאחר מכן הפוך. כדי למדוד את האזור החיובי 6E-10, עבור אל התמונה ולאחר מכן התאם את הסף.
מסנן מוגדר מראש תחת שיטת הסף יספק את התוצאות הרצויות, וידגיש את האותות החזקים ביותר באדום. לאחר בחירת הסף המתאים, הקש על החל. כדי לנתח את האזור החיובי 6E-10, השתמש בסרגל הכלים ולחץ על כרטיסיות החלקיקים לנתח ולנתח, כדי לוודא שהתוצאות המסכמות נבדקות.
העתק את פלט הסיכום עם אזור האחוזים על-ידי לחיצה על כרטיסיות העריכה וההעתקה. לאחר מכן, הדבק את פלט הסיכום בקובץ Excel שהתחיל בעבר עם התוויות המתאימות. חזור על ההליך עבור האזורים השונים ברקמה, וודא שהמיקום של כל תיבה כדי לתאר את ההחזר על ההשקעה יהיה עקבי בין כל תמונה.
בהערכה מייצגת זו, שיטות ניתוח מלאות ותת-ROI מושוות לכימות האזור החיובי 6E-10 בקליפת המוח וברקמות המוח של ההיפוקמפוס. ניתוח ההחזר על ההשקעה המלא כולל התוויית ההחזר על ההשקעה כולה. לעומת זאת, ניתוח תת-ROI כולל בחירת אזור מוגדר מראש בתוך ההחזר על ההשקעה.
הנוהל השלביםי לכימות שטח חיובי מלא ותת-ROI 6E-10, עם סיבוב ROI לכימות תת-ROI, מוצג כאן. המתאם בין הניתוח המלא והתת-ROI מודגם כאן. מתאם חיובי משמעותי נצפה בין האזור החיובי 6E-10 שדווח על ידי שני הקוראים שביצעו את ניתוח תת ההחזר על ההשקעה עבור קליפת המוח וההיפוקמפוס.
יתר על כן, האזור החיובי הממוצע של תת-ROI 6E-10 חלק מתאם חיובי חזק ומשמעותי עם האזור שהושג באמצעות ההחזר על ההשקעה המלאה. עבור האזור החיובי הממוצע של 6E-10 על ידי מלא בניתוחי תת ההחזר על ההשקעה, לא נצפה הבדל משמעותי בקליפת המוח ובהיפוקמפוס. מתאם משמעותי נצפה בין מדידות הומוגנט במוח שלם לבין מדידות עמילואיד בטא 1-42 מסיסות, על ידי אליזה, וניתוח ROI מלא מהמחקר בחירת סף הוא המפתח לקבלת כימות נתונים מדויק.
נדרשת התערבות המשתמש כדי להבטיח שהכתמים החיוביים נבחרים במדויק באמצעות המסנן שנבחר. מלבד כימות עמילואיד בטא, ניתן להשתמש בשיטה זו עבור כתמים חיסוניים פלואורסצנטיים אחרים. לדוגמה, Iba-1, מכימות שטחים חיוביים מיקרוגליאליים.
