<p class="jove_content"> Questo lavoro è stato sostenuto da AAUW internazionale borsa di studio per Adeola Adewola, NIH / NCRR (U42RR023245) a Jose Oberholzer, e il Progetto Diabete Chicago. </p>

<p class="jove_title"> Microfabrication A. di 3-strati dispositivo perifusion microfluidica </p><p class="jove_step"> Bene fondo Maestro protocollo (150 micron pozzi profondi) </p><ol><li> Pulire le fette che utilizzano una lama di rasoio, se necessario. Pulire con acetone, metanolo, e IPA. Eseguire il trattamento al plasma a 50 Watt per 30 secondi </li><li> Spin SU8-100 @ 2000 rpm. [Fase 1: 500 giri, 10 s, 100 giri / s, Fase 2: 2000 rpm, 30 s, 300 giri / s]. <br /> [NOTA: non tenere il wafer con una pinzetta dopo filatura SU8] </li><li> Morbido cuocere il wafer a 65 ° C per 20 min e 95 ° C per 50 min. </li><li> Il wafer viene esposto alla luce UV attraverso una maschera desiderata. Dose per 150 micron altezza è di 650 mJ / cm <sup>2.</sup> </li><li> Post-esposizione cuocere il wafer a 65 ° C per 1 minuto e 95 ° C per 12 min. </li><li> Sviluppare il wafer in SU8 sviluppatore per 15 min. </li></ol><p class="jove_step"> Microcanali Maestro protocollo (500 micron pozzi di profondità) </p><ol><li> Pulire le fette che utilizzano una lama di rasoio, se necessario. Pulire con acetone, metanolo, e IPA. Eseguire il trattamento al plasma a 50 Watt per 30 secondi </li><li> Spin SU8-2150 @ 1000 rpm. [Fase 1: 500 giri, 10 s, 100 giri / s, Fase 2: 1000 rpm, 30 s, 300 giri / s]. </li><li> Morbido cuocere il wafer a 65 ° C per 15 minuti e 95 ° C per 2 ore e 30 min. </li><li> Il wafer viene esposto alla luce UV attraverso una maschera desiderata. Dose di esposizione per 650 micron altezza è 685 mJ / cm <sup>2.</sup> </li><li> Post-esposizione cuocere il wafer a 65 ° C per 5 minuti e 95 ° C per 35 min. </li><li> Sviluppare il wafer in SU8 sviluppatore per 20-30 min. </li></ol><p class="jove_step"> PDMS soluzione di preparazione </p><ol><li> Polidimetilsilossano (PDMS) soluzione viene preparata mescolando accuratamente da 10 parti di elastomeri di silicone con 1 parte di catalizzatore di un kit standard Sylgard 184. </li><li> Le bolle generate nella soluzione PDMS durante il processo di miscelazione vengono rimossi con un essiccatore a vuoto. </li><li> La bolla senza soluzione di PDMS sta lentamente erogato sulla SU8 maestri e un piatto vuoto Petri per il terzo strato. </li><li> La temperatura della piastra è impostato a 75 ° C e il PDMS è curata a questa temperatura per 2 ore </li><li> Insenature, prese e pozzi di cambio sono perforati utilizzando l&#39;apposito perforatrice dimensioni. </li><li> Gli strati sono legati insieme su un vetrino (dimensioni 0,1 mm) utilizzando un dispositivo palmare plasma. </li></ol><p class="jove_title"> B. Apparato Sperimentale </p><ol><li> Etanolo al 70% del flusso attraverso la micro-dispositivo per la sterilizzazione. DI flusso d&#39;acqua per lavare l&#39;etanolo. Profumato 50 ml di BSA 0,5% attraverso il dispositivo per evitare l&#39;adsorbimento non specifico di insulina alle pareti microcanali. </li><li> La rampa di pendenza di glucosio e di altre pendenze legate generati dal software LabVIEW che comunica con la siringa sono testati pompe per assicurarsi che le pendenze sono stabili. </li><li> 25-30 isolotti topi sono stati incubati con 5 Fura-2/AM mM (un indicatore di calcio, sonde molecolari, CA) e 2,5 mM rodamina 123 (Rh123, un indicatore potenziale mitocondriale, Sigma, MO) per 30 minuti a 37 ° C in Krebs-Ringer buffer (KRB) contenente 2 glucosio mM </li><li> Gli isolotti topi vengono attentamente pipettati nel dispositivo perifusion microfluidi attraverso la porta di entrata. </li><li> La rete è l&#39;installazione della microfluidica collegando l&#39;ingresso alle pompe siringa usando tubi Tygon e di un connettore a Y e la presa di raccoglitore di frazioni. Il dispositivo si siede su una fase di riscaldamento (37 ° C) sul microscopio e il tubo di aspirazione viene riscaldata su una piastra per mantenere la temperatura della camera e la soluzione a 37 ° C. </li><li> Immediatamente dopo l&#39;installazione, gli isolotti topi sono perifused con KRB contenente 2 mM glucosio per 10 minuti e poi una rampa di glucosio (2mm 25mm) per 25 min. </li><li> Time-lapse immagini vengono raccolti e analizzati ogni 15 s da un software SimplePCI. Il perifusate è anche raccolto ogni minuto usando un raccoglitore di frazioni di analizzare alla secrezione insulinica mediante il kit ELISA. </li></ol><p class="jove_title"> Rappresentante Risultati </p><p class="jove_content"> Isolotti del mouse sono stati perifused con una sfumatura lineare di 2-25 mM glucosio. Come mostrato nella Figura 1, afflusso di calcio e la secrezione di insulina sono innescate dopo circa 13 minuti di perifusion, corrispondenti a 6 mM glucosio. Cambiamenti nelle potenzialità mitocondriali sono visto in precedenza come previsto, a circa 11 minuti. Questi dati dimostrano il vantaggio di utilizzare questa rete microfluidica per caratterizzare isolotto fisiologia. </p><p class="jove_content"><img src="/files/ftp_upload/1649/1649fig1.jpg" alt="Figura 1" /><br /> <strong>Figura 1.</strong> Reazioni fisiologiche alla stimolazione delle cellule insulari. </p>

<ol>
	<li>Mohammed, J. S., Wang, Y., Harvat, T. A., Oberholzer, J., Eddington, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+device+for+multimodal+characterization+of+pancreatic+islets.">Microfluidic device for multimodal characterization of pancreatic islets.</a> <em style='font-style: italic'>Lab Chip</em>. <b>9</b>, 97-106 (2009).</li></ol>

<p class="jove_content"> I sistemi tradizionali di perifusion isolotto (macroscala e microscala) hanno alcune limitazioni tra cui complesso di configurazione e design, elevate esigenze tecniche, e la difficoltà di creare utenti prescritto gradienti chimici nel sistema. Il sistema perifusion microfluidica descritto qui di superare queste limitazioni con geometria semplice di progettazione e fabbricazione. Più importante, questo sistema può essere integrato con l&#39;approccio di imaging a fluorescenza che forniscono come uno strumento unico p...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>60ml Syringes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fura-2 fluorescence dye</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Molecular Probes Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rhodamine123 Fluorescence dye</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Molecular Probes Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glucose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bovine Serum Albumin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30" Silicone tubings</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cole Palmer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>1/16 x 1/8in</td>
</tr>
<tr>
<td>1.5ml Eppendorf tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Y-connectors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cole Palmer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>1/16&#x201D; &amp; 4mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Syringe connectors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cole Palmer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>female luer plug 1/16&#x201D;</td>
</tr>
<tr>
<td>Straight connectors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cole Palmer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>1/16&#x201D;</td>
</tr>
<tr>
<td>Elbow connector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cole Palmer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>1/16&#x201D;</td>
</tr>
<tr>
<td>Havard syringe pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Perifusion device</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PMC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Thermometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Omega Engineering Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fraction collector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibson</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pippettor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Inverted epiflorescence microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>IX71</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Charge-coupled device</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>QImaging</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Retiga-SRV, Fast 1394</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

a multi-parametric islet perifusion system within a microfluidic perifusion device

<p class="jove_content">Un dispositivo microfluidic perifusion isolotto è stato sviluppato per la valutazione della secrezione insulinica dinamica di isole multiple e simultanee imaging di fluorescenza di afflusso di calcio e mitocondriale potenziali cambiamenti. Il dispositivo è costituito da tre strati: primo strato contiene un array di microscala pozzi (500 micron di diametro e 150 micron di profondità) che aiutano a immobilizzare le isolette, mentre esposto al flusso e massimizzare la superficie esposta delle isole, il secondo strato contiene una circolare perifusion camera (3 mm di profondità, 7 mm di diametro) e il terzo strato contiene un ingresso di miscelazione dei canali che i fan prima dell&#39;iniezione nella camera perifusion (2 mm in larghezza, 19 mm di lunghezza e 500 micron di altezza) per l&#39;ottimizzazione l&#39;efficienza di miscelazione prima di entrare nella camera di perifusion. La creazione di gradienti di glucosio diverse tra cui una lineare, forma a campana, e forme squadrate può anche essere creato nella rete perifusion microfluidica ed è dimostrato.</p>

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A Multi-Parametric Islet Perifusion System within a Microfluidic Perifusion Device

<p class="jove_content">Un dispositivo microfluidic perifusion isolotto è stato sviluppato per la valutazione della secrezione insulinica dinamica di isole multiple e simultanee imaging di fluorescenza di afflusso di calcio e mitocondriale potenziali cambiamenti.</p>

Un multi-parametrica Perifusion Sistema isolotto all&#39;interno di un dispositivo Perifusion Microfluidic

A microfluidic islet perifusion device was developed for the assessment of dynamic insulin secretion of multiple islets and simultaneous fluorescence ...

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Research

JoVE Journal

Biology

11.8K Views.  University of Illinois, Chicago. Un dispositivo microfluidic perifusion isolotto è stato sviluppato per la valutazione della secrezione insulinica dinamica di isole multiple e simultanee imaging di fluorescenza di afflusso di calcio e mitocondriale potenziali cambiamenti.