<p class="jove_content"> 이 작품은 Adeola Adewola, NIH / NCRR (U42RR023245) 호세 Oberholzer하고, 시카고 당뇨병 프로젝트 AAUW 국제 친교에 의해 지원되었다. </p>

<p class="jove_title"> 3 층 microfluidic의 perifusion 장치의 A.의 Microfabrication </p><p class="jove_step"> 하단 그럼 마스터 프로토콜 (150 μm의 깊은 우물) </p><ol><li> 필요한 경우 면도날을 사용하여 웨이퍼를 청소합니다. 아세톤, 메탄올과 IPA로 닦으십시오. 30 S. 50 왓츠에서 플라즈마 처리를 수행 </li><li> 스핀 SU8 - 100 @ 2000 RPM. [1 단계 : 500 RPM, 10 S, 100 RPM / s의 2 단계 : 2000 RPM, 30 S, 300 RPM / S]. <br /> [참고 : SU8 스피닝 후 핀셋으로 웨이퍼를 보유하지] </li><li> 소프트 베이킹 65 웨이퍼 ° C 20 분 및 95 °에서 50 분 C. </li><li> 웨이퍼는 원하는 마스크를 통해 자외선에 노출됩니다. 150 μm의 높이에 대한 선량 650 MJ / cm <sup>2입니다.</sup> </li><li> 포스트 노출은 65에서 웨이퍼를 구워 ° 1 분 및 95에서 C ° 12 분 C. </li><li> 15 분 SU8 개발자의 웨이퍼를 개발. </li></ol><p class="jove_step"> Microchannel 마스터 프로토콜 (500 μm의 깊은 우물) </p><ol><li> 필요한 경우 면도날을 사용하여 웨이퍼를 청소합니다. 아세톤, 메탄올과 IPA로 닦으십시오. 30 S. 50 왓츠에서 플라즈마 처리를 수행 </li><li> 스핀 SU8 - 2150 @ 1000 RPM. [1 단계 : 500 RPM, 10 S, 100 RPM / s의 2 단계 : 1000 RPM, 30 S, 300 RPM / S]. </li><li> 소프트 베이킹 65 웨이퍼 ° C 15 분 및 95 °에서 2 시간 30 분 C. </li><li> 웨이퍼는 원하는 마스크를 통해 자외선에 노출됩니다. 650 μm의 높이에 대한 노출 선량은 685 MJ / cm <sup>2입니다.</sup> </li><li> 포스트 노출은 65에서 웨이퍼를 구워 ° 5 분 및 95에서 C ° ~ 35 분 C. </li><li> 20-30 분 SU8 개발자의 웨이퍼를 개발. </li></ol><p class="jove_step"> PDMS 솔루션 준비 </p><ol><li> Polydimethylsiloxane (PDMS) 솔루션은 철저하게 표준 Sylgard 184 키트의 치료 요원 1 일부로 실리콘 탄성체의 10 부분을 혼합하여 준비가되어 있습니다. </li><li> 혼합 과정에서 PDMS 솔루션에서 생성된 거품은 진공 건조기를 사용하여 제거됩니다. </li><li> 거품없는 PDMS 솔루션은 천천히 SU8 마스터와 세 번째 레이어에 빈 페트리 접시에 적절합니다. </li><li> 뜨거운 접시의 온도가 75로 설정되어 ° C와 PDMS는 2 시간이 온도에서 치료됩니다 </li><li> 인레츠, 콘센트 및 교환 우물은 적절한 크기의 구멍 구멍을 뚫는를 사용하여 밖으로 펀치입니다. </li><li> 레이어는 휴대용 플라즈마 장치를 사용하여 유리 슬라이드 (크기 0.1 ㎜)에 함께 결합하고 있습니다. </li></ol><p class="jove_title"> B. 실험 설정 </p><ol><li> 마이크로 장치를 통해 흐름을 70 % 에탄올은 소독 수 있습니다. 흐름 DI 물 에탄올을 씻어. microchannel 벽에 인슐린 이외의 구체적인 흡착을 방지하기 위해 장치를 통해 0.5 % BSA의 50 ML을 Perfuse. </li><li> 포도당 램프 기울기와 펌프는 그라디언트가 안정되어 있는지 확인하기 위해 테스트하는 주사기와 통신 LabView 소프트웨어에 의해 생성된 기타 관련 그라디언트. </li><li> 25-30 쥐 아일 레츠가 37 ° C에서 30 분 5 μm의의 Fura-2/AM (칼슘 표시기, 분자 프로브, CA) 및 2.5 μm의의 Rhodamine 123 (Rh123, mitochondrial 가능성 표시기, 시그마, MO)와 incubated되었습니다 이 MM 포도당을 포함한 크렙스 - 링어 버퍼 (KRB) </li><li> 마우스 아일 레츠는 신중하게 유입 포트를 통해 microfluidic perifusion 장치로 pipetted 있습니다. </li><li> microfluidic 네트워크는 다음 Tygon 관 그리고 Y - 커넥터 및 분획 수집기에 콘센트를 사용하여 주사기 펌프에 입구를 연결하여 설정합니다. 장치는 현미경에서 가열 단계 (37 ° C)에 자리하고 유입 튜브는 37 챔버 및 솔루션의 온도를 유지하기 위해 열판에서 가열 ° C. </li><li> 즉시 설치 후, 쥐 아일 레츠는 KRB 그런 다음 10 분 25 분 포도당 램프 (2mM 25mM) 2 MM 포도당이 포함된 함께 perifused 있습니다. </li><li> 시간 경과 이미지 SimplePCI 소프트웨어에 의해 매 15 s를 수집하고 분석합니다. perifusate 또한 엘리사 키트를 사용하여 인슐린 분비를 분석하기 위해 분획 수집기를 사용하여 매 순간을 수집합니다. </li></ol><p class="jove_title"> 대표 결과 </p><p class="jove_content"> 마우스 아일 레츠는 2-25 MM 포도당의 선형 그라디언트로 perifused되었습니다. 그림 1에 표시된, 칼슘 유입 및 인슐린 분비는 6 MM 포도당에 해당하는 perifusion 13 분 후에 실행됩니다. Mitochondrial 잠재력의 변화는 약 11 분, 이전에 예상대로 볼 수 있습니다. 이 데이터는 아일릿 생리 특징이 microfluidic 네트워크를 사용하는 장점을 보여줍니다. </p><p class="jove_content"><img src="/files/ftp_upload/1649/1649fig1.jpg" alt="그림 1" /><br /> <strong>그림 1.</strong> 세포 자극을 아일릿하는 생리 반응. </p>

<ol>
	<li>Mohammed, J. S., Wang, Y., Harvat, T. A., Oberholzer, J., Eddington, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+device+for+multimodal+characterization+of+pancreatic+islets.">Microfluidic device for multimodal characterization of pancreatic islets.</a> <em style='font-style: italic'>Lab Chip</em>. <b>9</b>, 97-106 (2009).</li></ol>

<p class="jove_content"> 전통 아일릿 perifusion 시스템 (macroscale 및 microscale) 설정 및 디자인, 높은 기술적 요구 사항과 시스템의 사용자 규정된 화학 그라디언트를 만들 어려움 복잡 등 일부 제한이 있습니다. 여기에서 설명한 microfluidic perifusion 시스템 설계 및 제조의 간단한 기하학 이러한 한계를 극복. 더 중요한 것은,이 시스템은 아일릿 생리 연구를 수있는 유일한 도구로 제공하는 형광 이미징 접근 방식과 통합될 수 있...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>60ml Syringes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fura-2 fluorescence dye</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Molecular Probes Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rhodamine123 Fluorescence dye</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Molecular Probes Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glucose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bovine Serum Albumin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30" Silicone tubings</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cole Palmer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>1/16 x 1/8in</td>
</tr>
<tr>
<td>1.5ml Eppendorf tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Y-connectors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cole Palmer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>1/16&#x201D; &amp; 4mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Syringe connectors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cole Palmer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>female luer plug 1/16&#x201D;</td>
</tr>
<tr>
<td>Straight connectors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cole Palmer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>1/16&#x201D;</td>
</tr>
<tr>
<td>Elbow connector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cole Palmer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>1/16&#x201D;</td>
</tr>
<tr>
<td>Havard syringe pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Perifusion device</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PMC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Thermometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Omega Engineering Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fraction collector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibson</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pippettor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Inverted epiflorescence microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>IX71</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Charge-coupled device</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>QImaging</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Retiga-SRV, Fast 1394</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

a multi-parametric islet perifusion system within a microfluidic perifusion device

<p class="jove_content">microfluidic 아일릿 perifusion 장치가 여러 아일 레츠와 칼슘 유입과 mitochondrial 잠재적인 변화 동시 형광 이미지의 역동적인 인슐린 분비의 평가를 위해 개발되었습니다. 이 장치는 세 계층으로 구성되어 있습니다 : 첫 번째 레이어는 아일 레츠의 노출 표면적을 흐름과 극대화에 노출된 상태에서 아일 레츠를 무력화하는 데 도움이 microscale 웰스 (500 μm의 직경 150 μm의 깊이)의 배열을 포함, 두 번째 레이어는 원형을 포함 perifusion 챔버 (깊이 3mm, 7mm 직경) 및 세 번째 계층은 입구 - 혼합 채널을 포함하는 팬들 아웃하기 전에 최적화에 대한 perifusion 챔버에 주입 (폭 2mm, 길이 19mm, 높이 500 μm의) 혼합 효율 전에 perifusion 챔버를 입력합니다. 선형, 종 모양 등 다양한 포도당 그라디언트, 그리고 광장 형태의 생성도 microfluidic perifusion 네트워크에 만들 수 있으며, 증명합니다.</p>

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A Multi-Parametric Islet Perifusion System within a Microfluidic Perifusion Device

<p class="jove_content">microfluidic 아일릿 perifusion 장치가 여러 아일 레츠와 칼슘 유입과 mitochondrial 잠재적인 변화 동시 형광 이미지의 역동적인 인슐린 분비의 평가를 위해 개발되었습니다.</p>

Microfluidic Perifusion 장치 내에서 멀티 파라메 트릭 아일릿 Perifusion 시스템

A microfluidic islet perifusion device was developed for the assessment of dynamic insulin secretion of multiple islets and simultaneous fluorescence ...

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Research

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Biology

11.8K 조회수.  University of Illinois, Chicago. microfluidic 아일릿 perifusion 장치가 여러 아일 레츠와 칼슘 유입과 mitochondrial 잠재적인 변화 동시 형광 이미지의 역동적인 인슐린 분비의 평가를 위해 개발되었습니다.