Filtrare le proteine grezze estratte dall'intestino di Sipunculus nudus attraverso una membrana filtrante da 0,22 micrometri. Conservare questo campione a quattro gradi Celsius per un uso successivo. Impacchettare la colonna cromatografica di affinità della matrice di agarosio di arginina caricando il mezzo della matrice di agarosio di arginina in una colonna cromatografica vuota da cinque millilitri.
Allo stesso modo, caricare la colonna cromatografica di affinità della matrice di agarosio lisina caricando il mezzo della matrice di agarosio lisina in una colonna cromatografica vuota. Equilibrare le colonne cromatografiche di affinità con acqua bidistillata seguita da tampone tris cloridrato. Caricare il campione proteico filtrato sulla colonna pre-equilibrata.
Lavare la colonna con cinque volumi di tampone tris cloridrato da 0,02 molari prima di eluirla con soluzioni di cloruro di sodio 0,15-0,25-0,35-0,45-0,55 e 0,65 molari, successivamente. Una volta che il picco di eluizione appare nell'eluizione del cloruro di sodio 0,15 molari, raccogliere le frazioni in tubi da cinque millilitri. Concentrare il campione di eluizione utilizzando un filtro ultracentrifugo da tre kilodalton e conservare questo campione a meno 80 gradi Celsius per un uso successivo.
Quando la soluzione proteica è stata caricata sulla colonna di affinità della matrice di arginina agarosio, il picco di flusso è apparso da circa 40 a 66 minuti. Nella fase di eluizione a gradiente, l'eluizione con cloruro di sodio 0,15-molare ha raggiunto il picco da circa 94 a 110 minuti. Quando la soluzione proteica è stata caricata nella colonna di affinità della matrice di agarosio lisina, il picco di flusso è apparso da circa 38 a 60 minuti.
Nella fase di eluizione del gradiente, l'eluizione con cloruro di sodio 0,15-molare ha raggiunto il picco da 80 a 86 minuti.
