Culture of bEnd.3 Cells and Cell Viability After CoCl2 Treatment

Per iniziare, preparare il terreno di coltura cellulare DMEM contenente FBS, penicillina e streptomicina. Inoltre, preparare una soluzione madre di cloruro di cobalto da 100 millimolari aggiungendo 1,30 milligrammi di cloruro di cobalto a 100 microlitri di DMSO. Successivamente, seminare un millilitro di cellule BEND3 in una piastra di coltura da 100 millilitri contenente terreno DMEM e coltura a 37 gradi Celsius in un'atmosfera umidificata di anidride carbonica al 5%.

Cambiare il terreno ogni due o tre giorni e sottocoltivare le cellule due volte alla settimana. Dopo che le cellule BEND3 sono cresciute fino all'80% di confluenza, digerire le cellule con lo 0,25% di tripsina per 30 secondi. Conta le cellule usando un contatore di cellule e fai una sospensione di densità sette volte 10 al quarto di cellule per millilitro.

Quindi, seminare 100 microlitri di questa sospensione cellulare in una piastra a 96 pozzetti per l'adesione cellulare. Quindi lavare le cellule con PBS e aggiungere 100 microlitri di terreno di coltura contenente cloruro di cobalto. Coltivare le cellule per 24 ore.

Dopo l'incubazione, rimuovere il terreno e lavare con PBS. Quindi, aggiungere 100 microlitri di soluzione CCK-8. Incubare le piastre a 37 gradi Celsius per un'ora, quindi misurare l'assorbanza a 450 nanometri utilizzando un lettore di micropiastre.

Calcolare la vitalità cellulare indotta dal cloruro di cobalto secondo questa formula. Selezionare la concentrazione con una differenza significativa nella riduzione della vitalità cellulare rispetto al gruppo di controllo. La vitalità delle cellule BEND3 trattate con diverse concentrazioni di cloruro di cobalto è stata analizzata mediante CoCl2.

I risultati hanno indicato che 300 micromolari di cloruro di cobalto hanno mostrato una significativa citotossicità in vitro.