Isolamento di frammenti immuno-arricchiti nel cervello di topo per la quantificazione di istone PTM

Inizia aggiungendo 2,125 millilitri di gradiente di densità isotonica a un tubo di polipropilene da 15 millilitri contenente omogenato cerebrale murino. Rabboccare ogni provetta con il tampone fax fino a un volume finale di 8,5 millilitri. Capovolgere delicatamente i tubi 20 volte per mescolare accuratamente.

Utilizzando una pipetta di trasferimento graduata stretta, sottoporre delicatamente quattro millilitri di gradiente rosa al 37% di densità stabilendo due strati puliti. Cambiare le pipette di trasferimento e sottoporre due millilitri di gradiente di densità del 70% al di sotto dello strato del 37%. Trasferire le provette in una centrifuga fredda a quattro gradi Celsius e farle girare a 500 G per 20 minuti con la rampa di frenata impostata al minimo.

Dopo la centrifugazione, eliminare la mielina dalla parte superiore della provetta da 15 millilitri utilizzando una pipetta di trasferimento pulita. Raccogliere con cautela il frammento superiore del gradiente di densità in una provetta di polipropilene pulita da 15 millilitri utilizzando un'altra pipetta di trasferimento. Quindi, raccogliere tutte le cellule del campione facendo girare lentamente la pipetta lungo i lati della provetta mentre si raccoglie il frammento arricchito di immuni.

Trasferire il frammento immune arricchito in una nuova provetta di polipropilene da 15 millilitri. Lavare il campione aggiungendo 10 millilitri di fax alla provetta. Capovolgere delicatamente il tubo 20 volte per mescolare accuratamente.

Centrifugare le provette in una centrifuga raffreddata con la rampa di frenatura impostata sull'impostazione più bassa per pellettare le cellule immunitarie isolate.