1 Iniziare posizionando2 la fiala di vetro a scintillazione contenente 3 lo scBAT del topo in PBS sul banco di lavoro. 4 Sostituire il PBS con 10 millilitri di paraformaldeide fredda al 5 4%. 6 Posizionare la fiala su un nutatore, 7 facendo oscillare a quattro gradi Celsius durante la notte 8 per fissare lo scBAT.
9 Il giorno successivo, sostituire la soluzione di paraformaldeide 10 con 10-15 millilitri di PBS. 11 Posizionare la fiala su un nutator 12 e agitare per 30 minuti a temperatura ambiente. 13 Sostituire il PBS con soluzione fisiologica allo 0,85% 14 e continuare a oscillare per altri 30 minuti.
15 Quindi sostituire la soluzione salina con 10 millilitri 16 di soluzione salina al 70% di etanolo allo 0,85%. 17 Conservare la fiala in frigorifero a quattro gradi per una notte 18 o fino al momento dell'inclusione della paraffina. 19 Il giorno successivo, rimuovere la miscela salina di etanolo al 70% 20 dalla fiala e aggiungere da 10 a 15 millilitri 21 di alcol disidratante al 95%.
22 Agitare la fiala su un nutatore a temperatura ambiente 23 per un'ora. 24 Dopo il secondo lavaggio, aggiungere da 10 a 15 millilitri 25 di alcol disidratante al 100% 26 e continuare a dondolare su un nutatore per un'ora. 27 Per eliminare scBAT per l'inclusione, aggiungere 10 millilitri di toluene 28 al flaconcino e continuare a oscillare su un nutator 29 fino a quando scBAT non è trasparente.
30 Quindi incorporare lo scBAT nella cera di paraffina. 31 Sezionare lo scBAT con un microtomo 32 e procedere con la colorazione con ematossilina ed eosina. 33 La colorazione con ematossilina ed eosina ha confermato 34 che la scBAT comprende strutture tissutali caratteristiche 35 del tessuto adiposo bruno, 36 includendo numerosi piccoli adipociti multilocuari 37 sia nei topi postnatali che in quelli adulti.
