Per iniziare, impostare il sistema laser a diodi per la lunghezza d'onda verde. Accendere i laser e lasciarli riscaldare per la durata consigliata. Dopo che i laser hanno raggiunto uno stato stazionario e si sono stabilizzati, utilizzare un misuratore di potenza laser per misurare la potenza in uscita dei laser.
Registrare i valori di potenza per ciascuna lunghezza d'onda. Dopo aver sostituito il terreno completo, posizionare la piastra del pozzetto contenente le cellule staminali di derivazione adiposa incorporate nell'idrogel sotto il sistema laser a diodi, irradiare gli idrogel con il tempo di irradiazione laser calcolato per la fluidità selezionata alla lunghezza d'onda scelta. Assicurarsi che ogni gruppo sperimentale abbia un controllo non irradiato.
Incubare le piastre di coltura a 37 gradi Celsius con un'integrazione di anidride carbonica del 5% e un'umidità dell'85%. Successivamente, diluire la soluzione enzimatica di recupero cellulare con PBS in un rapporto di uno a 20 per preparare una soluzione di lavoro. Aggiungere 30 microlitri della soluzione di lavoro a ciascun gel o pozzetto contenente le cellule da recuperare.
Scuotere o ruotare delicatamente la piastra per consentire una distribuzione uniforme della soluzione di recupero. Incubare la piastra con la soluzione di recupero per 45 minuti. Dopo l'incubazione, rimuovere con cautela la piastra dall'incubatrice, centrifugare le piastre a 1, 409 G per cinque minuti a 20 gradi Celsius per pellettizzare le cellule.
Successivamente, scartare con cura il surnatante senza disturbare il pellet cellulare. Pipettare 220 microlitri di PBS sterile nel pellet. Garantire una miscelazione accurata per ottenere una sospensione unicellulare omogenea.
Le cellule staminali di derivazione adiposa hanno mantenuto una morfologia arrotondata 24 ore dopo la semina e l'esposizione alla fotobiomodulazione. Le cellule erano sparse in tutto il gel come cellule singole o in grappoli d'uva. La morfologia è rimasta invariata dopo 10 giorni nella coltura 3D.
