Ringraziamo il Sig. D. Craig Slaven (Dipartimento di Inglese, Università del Kentucky) per l&#39;assistenza editoriale. Supportato da University of Kentucky, Dipartimento di Biologia, Ufficio di studi universitari e il College of Arts &amp; Sciences.

1) Introduzione Motoneuroni comunicare con una fibra muscolare a livello delle sinapsi, che sono indicate collettivamente come una giunzione neuromuscolare (MNJ). NMJs si può accedere facilmente a preparazioni più gamberi muscolare. Molti dei NMJs gamberi dimostrare le potenzialità eccitatori non spiking postsinaptici (EPSP) simile ai segnali elettrici generati classificato in dendriti postsinaptici nel sistema nervoso centrale dei mammiferi o risposte sottosoglia osservato nella NMJs vertebrati (Wiersma &amp; Van Harreveld, 1938; Kuffler &amp; Katz, 1946) . Il NMJs gambero può servire come modello fondamentale sinaptica di fornire uno sguardo generale in trasmissione sinaptica e la differenziazione sinaptica. In generale, unità motorie regolano gli aspetti del comportamento animale tramite il tipo di comunicazione sinaptica a NMJs e le proprietà dei muscoli. Dal momento che la prima osservazione di &quot;fast&quot; e &quot;lento&quot; contrazioni muscolari in granchi e gamberi di fiume più vicino muscolare (Lucas, 1907, 1917), simile differenziazione muscolare contrattile è stato descritto in altri tipi muscolare gamberi come flessori addominale (Kennedy &amp; Takeda, 1965a , b) ed estensori degli arti (Van Harreveld &amp; Wiersma, 1936). &quot;Fast&quot; contrazioni avviare risposte rapide. Per esempio, il flip coda gambero è un comportamento veloce. &quot;Slow&quot; contrazioni mantenere movimenti lenti e contribuire a mantenere una postura (Bradacs et al., 1997). Corrispondente a &quot;fast&quot; e &quot;lento&quot; contrazioni muscolari &quot;, fasica / ad alto rendimento&quot; e &quot;output tonico / basso&quot; sono ampiamente utilizzati per descrivere i motoneuroni. La differenza di velocità e tempi di contrazione muscolare è in parte riconducibile a differenze nella struttura presinaptica sinaptica e la forza sinaptica (King et al., 1996). Isoforma proteica miofibrillare espressione è importante anche per le differenze contrattile, ma in preparazioni come quello del muscolo estensore della gamba, in cui è innervato una fibra data da entrambi i tipi di neuroni motori, l&#39;attenzione è sulle differenze dei terminali sinaptici, dal momento che i terminali parti la cella di destinazione stesso (Mykles et al., 2002). Un precedente studio ha esaminato i due assoni motori eccitatori del estensori gamba e descritti i fenotipi fasica e tonica (Bradacs et al., 1997). In questo rapporto, si dimostra come eseguire la dissezione e di ottenere le registrazioni in modo che altri possano investigare le proprietà della differenziazione sinaptici di queste terminazioni nervose. Visto con microscopia elettronica a trasmissione, diverse serie di sezioni ottenute dalla tonica e terminali fasica sul muscolo estensore della gamba gamberi rivelato che i terminali tonico contengono più vescicole RRP di terminali fasica, i mitocondri sono più frequenti nei neuroni tonico, e le sinapsi sui terminali sono fasica più complessi di quelli sulle sinapsi a bassa potenza, in quanto contengono più zone attive con spaziatura varia (Miller et al, 2002; Johnstone et al, 2008;. King et al, 1996;.. Bradacs et al, 1997). La bassa resa terminali tonico sono anche più sensibili a rafforzare la trasmissione sinaptica con il neuromediatore serotonina (5-HT) che sono i terminali fasica (Cooper et al., 2003). Il fatto che la tonica e fasica NMJ sono presenti sulla stessa fibra muscolare rende più facile valutare le differenze presinaptico su una fibra muscolare dato e di affrontare questioni di affaticamento muscolare, depressione sinaptica e cross talk sinaptica. Diverse questioni rimangono da affrontare in questa preparazione, ad esempio se ci sono differenze nella densità dei recettori post-sinaptici e sottotipi di recettori del glutammato nel obiettivi postsinaptica per il tonico e terminali fasica, ma una migliore comprensione delle differenze fondamentali nella anatomia e la fisiologia di questi due unità motore sarà di aiuto nella costruzione di una base di conoscenza più profonda. La speranza è che i principi fondamentali imparato in questa preparazione sinaptica saranno applicabili a sinapsi altre preparazioni diverse e migliorerà future indagini in questo modello sinaptica del gambero. 2) Metodi <ol><li> Tutti gli esperimenti sono condotti sulle gambe prima o la seconda a piedi di gamberi di medie dimensioni (Procambarus clarkii). Gli animali sono alloggiati individualmente in contenitori di plastica con acqua ossigenato. La temperatura della stanza animale è nel range di 13 ° C-16 ° C. Gli animali vengono nutriti con cibo secco i pesci e l&#39;acqua cambiata su base settimanale. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1: Schema di una gamba gamberi a piedi e sei segmenti distali. </li><li> La porzione distale della gamba camminando in un gambero è anatomicamente diviso in sei segmenti (Figura 1). L&#39;estensore della gamba si trova nel meropodite, e il fascio nervoso che sarà isolata è vicino al ischiopodite meropodite comune. L&#39;assone toniche o fasiche possono be selettivamente stimolati richiesto dagli scopi fisiologici dopo che sono stati esposti. </li><li> Cooper e Cooper (2009) descritto alcuni aspetti della dissezione iniziale, compresi i metodi per smascherare il excitor del motore opener neurone all&#39;interno della regione meropodite, ma la loro descrizione non fornisce la necessaria cura per la protezione del muscolo estensore dai danni, come è stato non è necessario per affrontare la preparazione muscolare opener. Al fine di proteggere l&#39;estensore, la gamba a piedi prima o la seconda viene rimosso dal gambero di fiume, che misura 6-10 cm di lunghezza del corpo (Atchafalaya biologica Supply Co., Raceland, LA), inducendo l&#39;animale per automatizzare l&#39;arto con pizzicare forte distale al piano di frattura nel segmento ischiopodite. La gamba è posto sul piatto con la dissezione laterale (lato esterno) rivolto verso lo spettatore. La gamba è girato fino a quando lo spettatore può essere certo l&#39;esterno (laterale) è rivolto verso l&#39;alto sulla piastra di dissezione, di solito con il lato ad arco verso l&#39;alto (Figura 2). Ponendo la gamba su un pezzo di carta velina è più facile girare la preparazione rendendo questi tagli. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2: La parte laterale del meropodite, di solito il lato che è ad arco, è rivolto verso l&#39;alto sul piatto dissezione .. </li><li> Con un interruttore di lama di bisturi e titolare, una lama di rasoio affilato è usato per incidere il cuticola fino a poco attraverso il taglio nel modello mostrato in Figura 3 per il segmento meropodite. Si fa attenzione a non tagliare troppo distale sulla dorsale di tagliare ventrale dal meropodite-carpopodite comune. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3: Il segmento meropodite con linee come modello suggerito per l&#39;incisione fuori dalla finestra della cuticola. Il preparato va messo in soluzione salina. Il piatto dissezione dovrebbe avere un (Dow Corning) Sylgard rivestimento sulla parte inferiore (1 cm di spessore). Il Sylgard è usato in modo che i pin di insetti possono essere bloccati dentro per tenere la preparazione ancora. A questo punto, un pin è bloccato nel bel mezzo del segmento carpopodite e nella parte dorsale del segmento ischiopodite (Figura 4). Preparati sezionato sono immersi in soluzione salina gamberi standard, modificato dalla soluzione Van Harreveld s (1936), che è fatto con 205 NaCl; 5.3KCl; 13,5 CaCl 2; 2H 2 O; 2,45 MgCl 2; 6H 2 O, 5 HEPES e regolato pH 7.4 (in mm). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig4.jpg" alt="Figura 4" /> Figura 4: Il segmento meropodite con finestra taglio viene sollevato. Notare la posizione dei perni dissezione. </li><li> La cuticola è leggermente sollevato nella regione distale e le fibre muscolari sono tagliati fuori dalla cuticola rendendo colpi verso la base della gamba. La cuticola può essere sollevato. </li><li> Il apodeme (tendine) viene tagliata a meropodite-carpopodite comune. Un perno è posto sulla superficie interna del tendine flessore per mostrare dove il taglio deve essere effettuato (Figura 5). Il tendine viene poi schiacciato dove è stato tagliato con le pinzette e il muscolo flessore tirato fuori sollevandola in direzione caudale (Figura 6), esponendo il nervo principale gamba e il muscolo estensore. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig5.jpg" alt="Figura 5" /> Figura 5: Il apodeme del muscolo flessore è evidenziato spostando dal flessore con uno spillo. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig6.jpg" alt="Figura 6" /> Figura 6: Il apodeme del muscolo flessore è tagliato e rimosso con cura per non danneggiare il nervo principale gamba. </li><li> Il nervo della gamba principale è tagliato alla meropodite-carpopodite comune e con attenzione tirato indietro al muscolo estensore. La superficie mediale del muscolo è usato in tutto questo studio. La separazione del nervo al muscolo estensore del nervo della gamba principale può essere migliorata tirando delicatamente il moncone distale del nervo della gamba principale al fianco della preparazione. Quando il nervo principale peeling gamba posteriore sopra il muscolo estensore, piccoli rami di assone può essere necessario tagliare. Questi sono i rami dal motoneurone inibitorio al muscolo estensore. Il bundle più grandi che si diramano dal nervo della gamba principale verso la fine prossimale del meropodite è il fascio nervo piccolo di interesse. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig7.jpg" alt="Figura 7" /> Figura 7: Il nervo della gamba principale è tagliato e tirato indietro in direzione prossimale. Questo bundle nervo può essere visto con colorazione blu di metilene (Figura 8) o con 4-Di-2-ASP macchia fluorescente (Figura 9). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig8.jpg" alt="Figura 8" /> Figura 8: Il muscolo estensore macchiato con blu di metilene. Si noti la ramificazione degli assoni e ladue assoni facilmente visibile all&#39;interno del nervo. Frecce rosse delimitano la pista del nervo. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig9.jpg" alt="Figura 9" /> Figura 9: Gli assoni del nervo motore macchiato con 4-Di-2-ASP. L&#39;assone tonica è più luminosa visibile a causa del maggiore contenuto mitocondriale. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig10a.jpg" alt="Figura 10A" /> Figura 10A: singoli terminali dei neuroni fasica e tonica colorati con 4-Di-2-ASP. Si noti la varicosità sui terminali tonica e la natura sottile dei terminali fasica. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig10b.jpg" alt="Figura 10B" /> Figura 10B-Tonic notato <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig10c.jpg" alt="Figura 10C" /> Figura 10C-fasica notato </li></ol> 3) profili fisiologici <ol><li> Per osservare il potenziale eccitatorio postsinaptico (EPSPS) dei neuroni tonica o fasica, uno degli assoni isolate nel bundle nervo è stimolato da un elettrodo di aspirazione (Figura 11) collegato a uno stimolatore Grass mentre potenziale intracellulare nel muscolo vengono monitorati (Johnstone et al., 2008). Stimolazione a 70 Hz viene applicato l&#39;assone tonico al fine di promuovere una risposta agevolata per i NMJs bassa uscita, o un singolo impulso (1 Hz) viene applicato l&#39;assone fasica al fine di ottenere epsps grande del NMJs alto rendimento, come indicato nella figura 12. Il EPSPS sono registrati ad un computer tramite un&#39;interfaccia PowerLab/4s. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig11.jpg" alt="Figura 11" /> Figura 11: Stimolare l&#39;elettrodo posto nel corso di un singolo assone all&#39;interno del fascio nervoso. Si noti la linea verde che delinea i 2 assoni principale. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig12.jpg" alt="Figura 12" /> Figura 12: i potenziali postsinaptici (EPSPS) dei neuroni tonica o fasica come ottenute da registrazioni intracellulari. </li><li> Indagine nella natura della facilitazione sinaptica e la depressione sinaptica può essere avvicinato da diversi paradigmi sperimentali con il NMJs uscita bassa e alta. Facilitazione del NMJs uscita bassa dipende dalla frequenza, come indicato per gli impulsi di 20 Hz, 40 e 60 di circa 20 stimoli (Figura 13). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig13.jpg" alt="Figura 13" /> Figura 13: EPSPS in risposta ad un treno di impulsi di stimolazione dato a tre differenti frequenze 20, 40 e 60 Hz in soluzione salina normale gamberi. </li><li> Il tasso di depressione sinaptica alla frequenza di stimolazione è anche legato alla NMJs alto rendimento. La figura 14 mostra una continua stimolazione dei 5 Hz premendo il NMJ oltre 30 min. Con la frequenza di stimolazione più alta, la preparazione si deprimono più rapidamente (Bradacs et al., 1997). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig14.jpg" alt="Figura 14" /> Figura 14: EPSP ampiezza della risposta fasica durante 5 Hz stimolazione per indurre depressione. </li></ol> 4) Le risposte quantico <ol><li> Una procedura simile a quella descritta per il muscolo opener del gambero (Cooper e Cooper, 2009) è usato in questa preparazione. Il EPSPS quantali direttamente sopra le regioni identificabili del terminale nervoso sono registrati ponendo il lume di una macro-patch elettrodo registrazione su varicosità sinaptiche visualizzati con il colorante vitale 4-Di-2-Asp (5 mM, a 5 minuti di trattamento, Cooper et al, 1995;. Magrassi et al, 1987).. Il spontaneo così come evocato risposte quantali possono essere registrate lungo le terminazioni nervose. I potenziali evocati e spontanea sinaptica sono registrati con la macro-patch elettrodo (Dudel, 1981; Wojtowicz et al, 1991;. Mallart, 1993). Kimax vetro (diametro esterno: 1,5 mm) è stato tirato e il fuoco-lucido per la produzione di punte di patch con diametro interno da 10 a 20 micron (Figura 15). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig15.jpg" alt="Figura 15" /> Figura 15: Il lume di una macro-patch elettrodo di registrazione .. Il lume del l&#39;elettrodo viene riempito con il mezzo bagno. L&#39;amplificatore è la stessa di quella utilizzata per le registrazioni intracellulari di cui sopra. Elettrodi e la resistenza di tenuta può essere determinato facendo passare impulsi di corrente di prova attraverso l&#39;elettrodo. Nei nostri esperimenti, resistenze sigillo variava dal 0,3-1,0 MOhm e la resistenza elettrodo variava dal 0,5-1,0 MOhm. Resistenza sigillo può essere monitorato per tutta la registrazione. </li><li> Conteggio diretto degli eventi quantali è possibile con basse frequenze di stimolazione. Per ogni risposta evocata, il numero di eventi quantali può essere facilmente determinato per i morsetti di uscita bassa (Figure 16). Questi conteggi diretto può aiutare a stimare il contenuto medio quantal (Del Castillo e Katz, 1954;. Cooper et al, 1995). Poiché il NMJs evocato ad alto rendimento produrre eventi evocati multi-quantica, l&#39;ampiezza media o area del deviazioni, insieme con l&#39;ampiezza di picco media o l&#39;area degli eventi spontanei, può essere utilizzato per stimare il contenuto medio quantal (Cooper et al. 1995). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig16.jpg" alt="Figura 16" /> Figura 16 tracce registrate da una focale fasica e NMJ tonico. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig17.jpg" alt="Figura 17" /> Figura 17 </li></ol>

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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+structure+and+transmitter+release+in+crustacean+phasic+and+tonic+motor+neurons.">Synaptic structure and transmitter release in crustacean phasic and tonic motor neurons.</a> J. Neurosci. 18, 1374-1382 (1998).</li><li>Msghina, M., Millar, A. G., Charlton, M. P., Govind, C. K., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+entry+related+to+active+zones+and+differences+in+transmitter+release+at+phasic+and+tonic+synapses.">Calcium entry related to active zones and differences in transmitter release at phasic and tonic synapses.</a> J. Neurosci. 19, 8419-8434 (1999).</li><li>Mykles, D. L., Medler, S. A., Koenders, A., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibrillar+protein+isoform+expression+is+correlated+with+synaptic+efficacy+in+slow+fibres+of+the+claw+and+leg+opener+muscles+of+crayfish+and.">Myofibrillar protein isoform expression is correlated with synaptic efficacy in slow fibres of the claw and leg opener muscles of crayfish and.</a> 205 (4), 513-522 (2002).</li><li>Sparks, G., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=5-HT+offsets+homeostasis+of+synaptic+transmission+during+short-term+facilitation.">5-HT offsets homeostasis of synaptic transmission during short-term facilitation.</a> J. Applied Physiol. 96, 1681-1690 (2004).</li><li>Sohn, J., Mykles, D. L., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anatomical,+physiological+and+biochemical+characterization+of+muscles+associated+with+the+articulating+membrane+in+the+dorsal+surface+of+the+crayfish+abdomen.">The anatomical, physiological and biochemical characterization of muscles associated with the articulating membrane in the dorsal surface of the crayfish abdomen.</a> J. Exp. Zool. 287, 353-377 (2004).</li><li>Tsien, R. W., Harata, N. C., Choi, S. W. P. y. l. e., Aravanis, A. M., AM, G. C. h. e. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicles,+quanta+and+synaptic+plasticity.+Molecular+Mechanisms+of+synaptic+function.">Vesicles, quanta and synaptic plasticity. Molecular Mechanisms of synaptic function.</a> , (2001).</li><li>Van Harreveld, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+physiological+solution+for+freshwater+crustaceans.">A physiological solution for freshwater crustaceans.</a> Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 34, 428-432 (1936).</li><li>Van Harreveld, A., Wiersma, C. A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+triple+innervation+of+the+crayfish+muscle.">The triple innervation of the crayfish muscle.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 22, 667-667 (1936).</li><li>Wiersma, C. A. G., Van Harreveld, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+the+frequency+of+stimulation+on+the+slow+and+fast+contraction+in+crustacean+muscle.">The influence of the frequency of stimulation on the slow and fast contraction in crustacean muscle.</a> Physiol. Zool. 11, 75-81 (1938).</li><li>Wojtowicz, J. M., Smith, B. R., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+recruitment+of+silent+synapses.">Activity-dependent recruitment of silent synapses.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 627, 169-179 (1991).</li></ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Abbiamo dimostrato in questa relazione come sezionare, registrare e quantificare le risposte sinaptiche in un preparato neuromuscolare gamberi unico in cui entrambi i terminali ad alta e bassa resa innervano la stessa fibra muscolare. I preparativi neuromuscolare nel gamberi offrono numerosi vantaggi rispetto vertebrati giunzioni neuromuscolari, dal momento che solo un paio di neuroni eccitatori motore sono necessari per innervare un muscolo, e dal momento che i neuroni sono identificabili dalla preparazione alla preparazione (Atwood, 1976). Inoltre, il neurotrasmettitore eccitatorio glutammato è, e il potenziale postsinaptico eccitatorio (EPSP) sono classificati, quindi, le proprietà biofisiche di eventi classificati siano analoghi ai dendriti dei neuroni nel sistema nervoso centrale dei vertebrati. Le correnti quantica, tuttavia, può essere monitorato direttamente presso i siti postsinaptico (Cooper et al., 1995). Ripetitiva 5 Hz stimolazione del nervo fasica dà luogo a grandi EPSPS che diventano molto depresso dopo alcuni minuti. Questo tipo di depressione è comune in artropodi fasica giunzioni neuromuscolari (Atwood e Cooper, 1996). La presenza dei terminali tonico a fianco del terminal fasica permette di valutare se l&#39;obiettivo postsinaptica è notevolmente modificato durante e dopo la depressione del fasica motoneuroni. Inoltre, i terminali di uscita bassa di fornire una preparazione bella per investigare i meccanismi che sono alla base facilitazione sinaptica (Desai-Shah et al, 2008;. Desai-Shah e Cooper, 2009) I terminali ad alto rendimento forniscono un parco giochi per indagare la modulazione del tasso di depressione sinaptica e il processo di recupero. Preparati accessibile e vitale dovrebbe aiutare a decifrare i meccanismi alla base della depressione sinaptica. In questa preparazione gamberi estensori della gamba, l&#39;applicazione esogena di serotonina è un altro strumento per indagare il recupero di depressione sinaptica e, potenzialmente, un mezzo per promuovere un&#39;inchiesta sulla mobilitazione dei pool di vescicole sinaptiche. Questa preparazione fornisce diversi vantaggi sperimentale, dal momento che singole fibre muscolari sono innervate da motoneuroni sia fasica e tonica. Dato che la serotonina aumenta il numero di vescicole che vengono rilasciate con la stimolazione evocato, e dal momento che promuove il recupero durante la depressione, è evidente che vi è una certa modulazione delle piscine vescicola per aumentare la probabilità di fusione con l&#39;attuale serotonina (Johnstone et al., 2008 ; Logsdon et al, 2006;. Sparks et al, 2004).. I modelli che spiegherebbe la dinamica delle piscine vescicola all&#39;interno del terminale nervoso presinaptico durante la stimolazione a bassa frequenza, rispetto a uno stato di depressione, anche bisogno di essere considerati tra i vari protocolli sperimentali che sono possibili con questa preparazione. E &#39;stato osservato in altri sistemi che circa il 30% del pool vescicola subisce un rapido riciclaggio, mentre il resto delle vescicole riciclato passare attraverso un percorso tradizionale di riciclaggio lento attraverso il reticolo endoplasmatico (Harata et al, 2001;. Tsien et al. , 2001). Tali percorsi duale può essere presente anche in questo sistema. ATP se manca la depressione del terminale presinaptico, poi aggancio e sgancio potrebbe non essere in grado di verificarsi, quindi, molte vescicole più scaricati rimarrebbe in superficie sinaptica. Da più vescicole sono rapidamente rilasciati quando i terminali sono esposti a 5 HT, è possibile che più sono contenuti all&#39;interno della piscina facilmente scaricabile (RRV). Tuttavia, nello stato di depressione, con una ridotta ATP, l&#39;attracco e sgancio può essere bloccato anche in presenza di 5 HT, che lascia ancora una volta scaricata vescicole sinaptiche in superficie. Poiché i dati preliminari suggeriscono che più vescicole vengono rilasciate nel tempo con l&#39;esposizione prolungata 5 HT e la stimolazione, la distribuzione della piscina vescicola dai sentieri riciclo veloce e lento può essere inclinata per avere vescicole competente per la re-release (da Johnstone et al. , 2008, vedi su-Desai-Shah et al, 2008;. Desai-Shah e Cooper, 2009) Con le tecniche di registrazioni macropatch focale delle correnti postsynaptic e misure di quanti singolo regioni definite del terminale nervo motore, si possono porre domande per determinare se la depressione sinaptica si verifica come conseguenza di un minor numero di vescicole di essere rilasciato oa causa di alterazioni della funzione dei recettori postsinaptici. E &#39;stato dimostrato che le vescicole sono più sensibili alla fusione presso il NMJ fasica di questo preparato per un&#39;esposizione di calcio uguale (Miller et al. 2005), che rappresenta probabilmente per il maggiore contenuto medio quantale dei terminali fasica (Msghina et al. , 1998, 1999). Inoltre, le differenze nel frequenin legame con le proteine ​​di calcio (Jeromín et al., 1999) e ultrastruttura (King et al., 1996) contribuire alla efficacia sinaptica differenziale (Cooperet al., 2003). Alcuni studi precedenti hanno esplorato il fenotipo muscolare delle fibre dei muscoli estensori (Bradacs et al, 1997;. Cooper et al, 2003).. Confrontando la regolazione della differenziazione muscolare per i tipi di fibra puramente tonica e fasica nel gamberi di tipi di fibre miste, come per l&#39;estensore della gamba che è innervato sordamente, potrebbe fornire indizi per l&#39;espressione e la regolazione dei muscoli fenotipo (LaFramboise et al, 2000;. Sohn et al, 2000;. Griffis et al, 2001;. Mykles et al, 2002).. Molte questioni fondamentali restano da affrontare in neurobiologia, e questa preparazione può aiutare per affrontare alcuni di essi. Alcuni argomenti di interesse in campo oggi, che potrebbe essere affrontato con l&#39;estensore della gamba includono: 1) Determinare i meccanismi cellulari che sono alla base della depressione sinaptica all&#39;interno di alto rendimento terminali (è la depressione a causa di una riduzione del Ca2 + ingresso, la mancanza di una competente facilmente sganciabili vescicola (RRV) piscina, e / o alterata recettività postsinaptici?) 2) Determinazione della funzione meccanicistica della 5-HT, quando applicato dopo l&#39;induzione di depressione sinaptica per favorire un recupero più veloce, e 3) Determinare se le forme delle quantali correnti che derivano dalla stimolazione fasica terminali sono stati alterati durante l&#39;induzione di depressione per affrontare componenti pre-e post-sinaptica di depressione sinaptica. Questo NMJ è importante per la ricerca in corso e gli investigatori futuro perché ci permette di ottenere informazioni pertinenti che affronta i meccanismi sinaptici subalterno della performance, misurata direttamente presso i siti di rilascio. La ricerca attuale in questo settore è fornire informazioni circa la modulazione della depressione sinaptica da 5-HT e le dinamiche delle piscine vescicola. Tali argomenti riguardano le basi fondamentali della trasmissione sinaptica rilevanti per tutti i sistemi neurali.

<ol><li> Gambero di fiume (Procambarus clarkii). Atchafalaya biologica Supply Co., Raceland, LA., USA. </li><li> Standard di gamberi salina: <ul><li> Modificato dalla soluzione di Van Harreveld (1936). (In mm) 205 NaCl, 5.3 KCl; 13,5 CaCl 2 2H 2 O; 2,45 MgCl 2 6H 2 O, 5 HEPES e portato a pH 7,4 </li></ul></li><li> Strumenti di dissezione: Fine # 5 pinzette, forbici, lama portalama, spille # 26002-20 insetti (tutti ottenuti da Strumenti Scienze Fine (USA), Inc., 373-G Vintage Park Drive, Foster City, CA 94404-1139) </li><li> Piatto dissezione Sylgard patinata, un piatto di registrazione sia costruito con elettrodo di aspirazione o utilizzare un elettrodo di aspirazione e manipolatore antera a tenere un elettrodo di aspirazione. </li><li> Dissezione microscopio con funzione di zoom per le registrazioni intracellulari. Per la registrazione focale su terminali visualizzato un microscopio composto con obiettivi in ​​posizione verticale (4 x e 20X) viene utilizzato. Uno ha bisogno di una fonte di luce Hg. </li><li> Standard amplificatore intracellulare e A / D a bordo per la registrazione in linea a un computer. I segnali elettrici vengono registrati in linea ad una interfaccia PowerLab/4s (ADInstruments, Australia). Noi utilizziamo software standard da ADInstruments nome o Campo Grafico. </li><li> Prodotti chimici: <ul><li> Usiamo un colorante vitale fluorescente, 4 [4 (dietilammino) styryl] N ioduro methylpyridinium (4 Di due Asp, Molecular Probes, Eugene, OR), per visualizzare le varici (Marigassi et al, 1987;. Cooper et al, 1995a. ). Tutti i prodotti chimici salina sono stati ottenuti da Sigma Chemical Company (St. Louis, MO). </li></ul></li><li> Per le registrazioni intracellulari usiamo tubo capillare di vetro (catalogo # 30-31-0 da FHC, Brunswick, ME, 04011, USA) e per gli elettrodi macropatch focale usiamo Kimax-51, Kimble Art Prodotti. N. 34502, ID 0.8-1.1mm, lunghezza 100mm. L&#39;elettrodo intracellulare dovrebbe avere una resistenza di 20 a 30 mOhm. L&#39;elettrodo macropatch è costruito rompendo la punta di un vetro dopo una punta fine è stata fatta da un elettrodo estrattore. La punta fuori rotta deve essere una rottura perpendicolare pulito circa 20μM di diametro. La punta è poi il calore lucidato a circa 10μM diametro interno. L&#39;albero dell&#39;elettrodo viene quindi eseguito nel corso di un elemento riscaldante per indurla a piegarsi di circa 45 gradi con una curva graduale. Questo produce un lume elettrodo piatto o perpendicolare sul terminale del nervo come l&#39;angolo con il micro-manipolatore produrrà circa altri 45 gradi rispetto alla preparazione. </li></ol>

physiological recordings of high and low output nmjs on the crayfish leg extensor muscle

Vi spieghiamo in dettaglio come esporre e condurre registrazioni elettrofisiologiche delle risposte sinaptiche per l&#39;alta (fasica) e bassa (tonica) motoneuroni uscita innervano i muscoli estensori della gamba a piedi di un gambero. Chiare differenze sono presenti nella fisiologia e la morfologia delle terminazioni nervose fasica e tonica. L&#39;assone tonico contiene molti più mitocondri, le consente di prendere un vitale macchia più intensamente l&#39;assone fasica. I terminali hanno varicosità tonico, e il terminale fasica è filiforme. I terminali tonico sono bassi in termini di efficacia sinaptica ma mostrano drammatiche risposte facilitato. Al contrario, i terminali fasici sono alti in termini di efficacia quantico ma mostrano la depressione sinaptica con la stimolazione ad alta frequenza. L&#39;uscita quantali viene misurata con un elettrodo macropatch focale posto direttamente sopra il terminazioni nervose visualizzati. Entrambi i terminali fasica e tonica innervano le fibre muscolari stesse, il che suggerisce che le differenze insite nei neuroni, piuttosto che un feedback differenziale retrograda dal muscolo, conto per la differenziazione morfologiche e fisiologiche.

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Physiological Recordings of High and Low Output NMJs on the Crayfish Leg Extensor Muscle

Questo articolo viene illustrato come effettuare registrazioni elettrofisiologiche delle risposte sinaptiche sul muscolo estensore della gamba a piedi di un gambero e come le terminazioni nervose sono visualizzati per mostrare le differenze morfologiche lordo di alta e bassa resa terminazioni nervose.

Le registrazioni fisiologiche NMJs uscita alta e bassa del muscolo estensore gamberi Leg

We explain in detail how to expose and conduct electrophysiological recordings of synaptic responses for high (phasic) and low (tonic) output motor ...

physiological-recordings-high-low-output-nmjs-on-crayfish-leg

Research

JoVE Journal

Neuroscience

11.6K Views.  University of Kentucky. Questo articolo viene illustrato come effettuare registrazioni elettrofisiologiche delle risposte sinaptiche sul muscolo estensore della gamba a piedi di un gambero e come le terminazioni nervose sono visualizzati per mostrare le differenze morfologiche lordo di alta e bassa resa terminazioni nervose.

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State-Dependency Effects on TMS:  A Look at Motive Phosphene Behavior

Transcranial magnetic stimulation (TMS) is a non-invasive neurostimulatory and neuromodulatory technique that can transiently or lastingly modulate cortical excitability (either increasing or decreasing it) via the application of localized magnetic field pulses.1,2 Within the field of TMS, the term state dependency refers to the initial, baseline condition of the particular neural region targeted for stimulation. As can be inferred, the effects of TMS can (and do) vary according to this primary susceptibility and responsiveness of the targeted cortical area.3,4,5

In this experiment, we will examine this concept of state dependency through the elicitation and subjective experience of motive phosphenes. Phosphenes are visually perceived flashes of small lights triggered by electromagnetic pulses to the visual cortex. These small lights can assume varied characteristics depending upon which type of visual cortex is being stimulated. In this particular study, we will be targeting motive phosphenes as elicited through the stimulation of V1/V2 and the V5/MT+ complex visual regions.6

In this article, we examine the effects of visually relevant state dependency on TMS induced motive phosphenic presentations.

Stato-dipendenza Effetti sulla TMS: uno sguardo al comportamento Motive fosfene

Transcranial magnetic stimulation (TMS) is a non-invasive neurostimulatory and neuromodulatory technique that can transiently or lastingly modulate ...

Ricerca

Neuroscienze

Membrane Potentials, Synaptic Responses, Neuronal Circuitry, Neuromodulation and Muscle Histology Using the Crayfish: Student Laboratory Exercises

The purpose of this report is to help develop an understanding of the effects caused by ion gradients across a biological membrane. Two aspects that influence a cell's membrane potential and which we address in these experiments are: (1) Ion concentration of K+ on the outside of the membrane, and (2) the permeability of the membrane to specific ions. The crayfish abdominal extensor muscles are in groupings with some being tonic (slow) and others phasic (fast) in their biochemical and physiological phenotypes, as well as in their structure; the motor neurons that innervate these muscles are correspondingly different in functional characteristics. We use these muscles as well as the superficial, tonic abdominal flexor muscle to demonstrate properties in synaptic transmission. In addition, we introduce a sensory-CNS-motor neuron-muscle circuit to demonstrate the effect of cuticular sensory stimulation as well as the influence of neuromodulators on certain aspects of the circuit. With the techniques obtained in this exercise, one can begin to answer many questions remaining in other experimental preparations as well as in physiological applications related to medicine and health. We have demonstrated the usefulness of model invertebrate preparations to address fundamental questions pertinent to all animals.

The experiments demonstrate an easy approach for students to gain experience in examining muscle structure, synaptic responses, the effects of ion gradients and permeability on membrane potentials. Also, a sensory-CNS-motor-muscle circuit is presented to show a means to test effects of compounds on a neuronal circuit.

Potenziali di membrana, Risposte Synaptic, circuiti neuronali, neuromodulazione e Istologia muscolare Utilizzando la Gamberi: Esercizi di laboratorio per studenti

The purpose of this report is to help develop an understanding of the effects caused by ion gradients across a biological membrane. Two aspects that ...

Muscle Receptor Organs in the Crayfish Abdomen: A Student Laboratory Exercise in Proprioception

The primary purpose of this experiment is to demonstrate primary sensory neurons conveying information of joint movements and positions as proprioceptive information for an animal. An additional objective of this experiment is to learn anatomy of the preparation by staining, dissection and viewing of neurons and sensory structures under a dissecting microscope. This is performed by using basic neurophysiological equipment to record the electrical activity from a joint receptor organ and staining techniques. The muscle receptor organ (MRO) system in the crayfish is analogous to the intrafusal muscle spindle in mammals, which aids in serving as a comparative model that is more readily accessible for electrophysiological recordings. In addition, these are identifiable sensory neurons among preparations. The preparation is viable in a minimal saline for hours which is amenable for student laboratory exercises. The MRO is also susceptible to neuromodulation which encourages intriguing questions in the sites of modulatory action and integration of dynamic signals of movements and static position along with a gain that can be changed in the system.

The primary purpose of this experiment is to understand how primary sensory neurons convey information of joint movements and positions as proprioceptive information for an animal. An additional objective of this report is present the anatomy of the preparation by dissection and viewing of neurons under a dissecting microscope.

Receptor Organi muscolare all&#39;addome gamberi: un esercizio di laboratorio per studenti in propriocezione

The primary purpose of this experiment is to demonstrate primary sensory neurons conveying information of joint movements and positions as proprioceptive ...

Physiological Experimentation with the Crayfish Hindgut: A Student Laboratory Exercise

The purpose of the report is to describe dissection techniques for preparing the crayfish hindgut and to demonstrate how to make physiological recordings with a force transducer to monitor the strength of contraction. In addition, we demonstrate how to visually monitor peristaltic activity, which can be used as a bioassay for various peptides, biogenic amines and neurotransmitters. This preparation is amenable to student laboratories in physiology and for demonstrating pharmacological concepts to students. This preparation has been in use for over 100 years, and it still offers much as a model for investigating the generation and regulation of peristaltic rhythms and for describing the mechanisms underlying their modulation. The pharmacological assays and receptor sub-typing that were started over 50 years ago on the hindgut still contribute to research today. This robust preparation is well suited to training students in physiology and pharmacology.

In this report we demonstrate techniques that can be used to investigate the biology of the crayfish hindgut. We show how to dissect a crayfish abdomen and study the associated anatomy, physiology and modulation of activity. The peristaltic activity and strength of contractions are measured using a force transducer.

La sperimentazione con la fisiologica hindgut gamberi: un esercizio di laboratorio per studenti

The purpose of the report is to describe dissection techniques for preparing the crayfish hindgut and to demonstrate how to make physiological recordings ...

Paired Patch Clamp Recordings from Motor-neuron and Target Skeletal Muscle in Zebrafish

Larval zebrafish represent the first vertebrate model system to allow simultaneous patch clamp recording from a spinal motor-neuron and target muscle. This is a direct consequence of the accessibility to both cell types and ability to visually distinguish the single segmental CaP motor-neuron on the basis of morphology and location. This video demonstrates the microscopic methods used to identify a CaP motor-neuron and target muscle cells as well as the methodologies for recording from each cell type. Identification of the CaP motor-neuron type is confirmed by either dye filling or by the biophysical features such as action potential waveform and cell input resistance. Motor-neuron recordings routinely last for one hour permitting long-term recordings from multiple different target muscle cells. Control over the motor-neuron firing pattern enables measurements of the frequency-dependence of synaptic transmission at the neuromuscular junction. Owing to a large quantal size and the low noise provided by whole cell voltage clamp, all of the unitary events can be resolved in muscle. This feature permits study of basic synaptic properties such as release properties, vesicle recycling, as well as synaptic depression and facilitation. The advantages offered by this in vivo preparation eclipse previous neuromuscular model systems studied wherein the motor-neurons are usually stimulated by extracellular electrodes and the muscles are too large for whole cell patch clamp. The zebrafish preparation is amenable to combining electrophysiological analysis with a wide range of approaches including transgenic lines, morpholino knockdown, pharmacological intervention and in vivo imaging. These approaches, coupled with the growing number of neuromuscular disease models provided by mutant lines of zebrafish, open the door for new understanding of human neuromuscular disorders.

Larval zebrafish represent the first vertebrate model system to allow simultaneous patch clamp recording from a spinal motor-neuron and target skeletal muscle. This video demonstrates the microscopic methods used to identify a segmental CaP motor-neuron and target muscle cells as well as the methodologies for recording from each cell type.

Accoppiato a pinza registrazioni patch da Motor-neurone e muscolo scheletrico bersaglio in Zebrafish

Larval zebrafish represent the first vertebrate model system to allow simultaneous patch clamp recording from a spinal motor-neuron and target muscle.  ...

High-density EEG Recordings of the Freely Moving Mice using Polyimide-based Microelectrode

Electroencephalogram (EEG) indicates the averaged electrical activity of the neuronal populations on a large-scale level. It is widely utilized as a noninvasive brain monitoring tool in cognitive neuroscience as well as a diagnostic tool for epilepsy and sleep disorders in neurology. However, the underlying mechanism of EEG rhythm generation is still under the veil. Recently introduced polyimide-based microelectrode (PBM-array) for high resolution mouse EEG1 is one of the trials to answer the neurophysiological questions on EEG signals based on a rich genetic resource that the mouse model contains for the analysis of complex EEG generation process. This application of nanofabricated PBM-array to mouse skull is an efficient tool for collecting large-scale brain activity of transgenic mice and accommodates to identify the neural correlates to certain EEG rhythms in conjunction with behavior. However its ultra-thin thickness and bifurcated structure cause a trouble in handling and implantation of PBM-array. In the presented video, the preparation and surgery steps for the implantation of PBM-array on a mouse skull are described step by step. Handling and surgery tips to help researchers succeed in implantation are also provided.

In this article, we described the surgery procedure and handling tips for implantation of ultra-thin polyimide-based microelectrode array (PBM-array) on the mouse skull for acquisition of high-density encephalography (EEG) in a mouse model.

Le registrazioni EEG ad alta densità dei Topi muoversi liberamente utilizzando Polyimide a base di microelettrodi

Electroencephalogram (EEG) indicates the averaged electrical activity of the neuronal populations on a large-scale level. It is widely utilized as a ...

Multi-electrode Array Recordings of Neuronal Avalanches in Organotypic Cultures

The cortex is spontaneously active, even in the absence of any particular input or motor output. During development, this activity is important for the migration and differentiation of cortex cell types and the formation of neuronal connections1. In the mature animal, ongoing activity reflects the past and the present state of an animal into which sensory stimuli are seamlessly integrated to compute future actions. Thus, a clear understanding of the organization of ongoing i.e. spontaneous activity is a prerequisite to understand cortex function. 
Numerous recording techniques revealed that ongoing activity in cortex is comprised of many neurons whose individual activities transiently sum to larger events that can be detected in the local field potential (LFP) with extracellular microelectrodes, or in the electroencephalogram (EEG), the magnetoencephalogram (MEG), and the BOLD signal from functional magnetic resonance imaging (fMRI). The LFP is currently the method of choice when studying neuronal population activity with high temporal and spatial resolution at the mesoscopic scale (several thousands of neurons). At the extracellular microelectrode, locally synchronized activities of spatially neighbored neurons result in rapid deflections in the LFP up to several hundreds of microvolts. When using an array of microelectrodes, the organizations of such deflections can be conveniently monitored in space and time. 
Neuronal avalanches describe the scale-invariant spatiotemporal organization of ongoing neuronal activity in the brain2,3. They are specific to the superficial layers of cortex as established in vitro4,5, in vivo in the anesthetized rat 6, and in the awake monkey7. Importantly, both theoretical and empirical studies2,8-10 suggest that neuronal avalanches indicate an exquisitely balanced critical state dynamics of cortex that optimizes information transfer and information processing.
In order to study the mechanisms of neuronal avalanche development, maintenance, and regulation, in vitro preparations are highly beneficial, as they allow for stable recordings of avalanche activity under precisely controlled conditions. The current protocol describes how to study neuronal avalanches in vitro by taking advantage of superficial layer development in organotypic cortex cultures, i.e. slice cultures, grown on planar, integrated microelectrode arrays (MEA; see also 11-14).

A robust way to study neuronal avalanches, i.e. scale-invariant spatio-temporal activity bursts, indicative of critical state dynamics in cortex. Avalanches emerge spontaneously in developing superficial layers of cultured cortex which allows for long-term measurements of the activity with planar integrated multi-electrode arrays (MEA) under precisely controlled conditions.

Multi-array di elettrodi Recordings Valanghe neuronali in Culture organotipica

The cortex is spontaneously active, even in the absence of any particular input or motor output.  During development, this activity is important for the ...

A Procedure for Implanting Organized Arrays of Microwires for Single-unit Recordings in Awake, Behaving Animals

In vivo electrophysiological recordings in the awake, behaving animal provide a powerful method for understanding neural signaling at the single-cell level. The technique allows experimenters to examine temporally and regionally specific firing patterns in order to correlate recorded action potentials with ongoing behavior. Moreover, single-unit recordings can be combined with a plethora of other techniques in order to produce comprehensive explanations of neural function. In this article, we describe the anesthesia and preparation for microwire implantation. Subsequently, we enumerate the necessary equipment and surgical steps to accurately insert a microwire array into a target structure. Lastly, we briefly describe the equipment used to record from each individual electrode in the array. The fixed microwire arrays described are well-suited for chronic implantation and allow for longitudinal recordings of neural data in almost any behavioral preparation. We discuss tracing electrode tracks to triangulate microwire positions as well as ways to combine microwire implantation with immunohistochemical techniques in order to increase the anatomical specificity of recorded results.

Implanting organized arrays of microwires for use in single-unit electrophysiological recordings presents a number of technical challenges.&#160;Methods for performing this technique and the equipment necessary are described.&#160;Also, the beneficial use of organized microwire arrays to record from distinct neural subregions with high spatial selectivity is discussed.

Una procedura per l&#39;impianto Array organizzata di microfili per Recordings singola unità di Awake, Comportarsi Animali

In vivo electrophysiological recordings in the awake, behaving animal provide a powerful method for understanding neural signaling at the single-cell ...

Functional Analysis of the Larval Feeding Circuit in Drosophila

The serotonergic feeding circuit in Drosophila melanogaster larvae can be used to investigate neuronal substrates of critical importance during the development of the circuit. Using the functional output of the circuit, feeding, changes in the neuronal architecture of the stomatogastric system can be visualized. Feeding behavior can be recorded by observing the rate of retraction of the mouth hooks, which receive innervation from the brain. Locomotor behavior is used as a physiological control for feeding, since larvae use their mouth hooks to traverse across an agar substrate. Changes in feeding behavior can be correlated with the axonal architecture of the neurites innervating the gut. Using immunohistochemistry it is possible to visualize and quantitate these changes. Improper handling of the larvae during behavior paradigms can alter data as they are very sensitive to manipulations. Proper imaging of the neurite architecture innervating the gut is critical for precise quantitation of number and size of varicosities as well as the extent of branch nodes. Analysis of most circuits allow only for visualization of neurite architecture or behavioral effects; however, this model allows one to correlate the functional output of the circuit with the impairments in neuronal architecture.

Functional Analysis of the Larval Feeding Circuit in Drosophila

The feeding circuit in Drosophila melanogaster larvae serves a simple yet powerful model that allows changes in feeding rate to be correlated with alterations in the stomatogastric neural circuitry. This circuit is composed of central serotonergic neurons that send projections to the mouth hooks as well as the foregut.

Analisi funzionale del circuito di alimentazione larvale in Drosophila</i

The serotonergic  feeding circuit in Drosophila  melanogaster larvae can be used to investigate neuronal substrates of  critical importance during the ...

The Swimmeret System of Crayfish: A Practical Guide for the Dissection of the Nerve Cord and Extracellular Recordings of the Motor Pattern

Here we demonstrate the dissection of the crayfish abdominal nerve cord. The preparation comprises the last two thoracic ganglia (T4, T5) and the chain of abdominal ganglia (A1 to A6). This chain of ganglia includes the part of the central nervous system (CNS) that drives coordinated locomotion of the pleopods (swimmerets): the swimmeret system. It is known for over five decades that in crayfish each swimmeret is driven by its own independent pattern generating kernel that generates rhythmic alternating activity 1-3. The motor neurons innervating the musculature of each swimmeret comprise two anatomically and functionally distinct populations 4. One is responsible for the retraction (power stroke, PS) of the swimmeret. The other drives the protraction (return stroke, RS) of the swimmeret. Motor neurons of the swimmeret system are able to produce spontaneously a fictive motor pattern, which is identical to the pattern recorded in vivo 1.
The aim of this report is to introduce an interesting and convenient model system for studying rhythm generating networks and coordination of independent microcircuits for students&#8217; practical laboratory courses. The protocol provided includes step-by-step instructions for the dissection of the crayfish&#8217;s abdominal nerve cord, pinning of the isolated chain of ganglia, desheathing the ganglia and recording the swimmerets fictive motor pattern extracellularly from the isolated nervous system.
Additionally, we can monitor the activity of swimmeret neurons recorded intracellularly from dendrites. Here we also describe briefly these techniques and provide some examples. Furthermore, the morphology of swimmeret neurons can be assessed using various staining techniques. Here we provide examples of intracellular (by iontophoresis) dye filled neurons and backfills of pools of swimmeret motor neurons. In our lab we use this preparation to study basic functions of fictive locomotion, the effect of sensory feedback on the activity of the CNS, and coordination between microcircuits on a cellular level.

Here we describe the dissection of the crayfish abdominal nerve cord. We also demonstrate an electrophysiological technique to record fictive locomotion from swimmeret motor neurons.

Il Sistema swimmeret di gamberi: Una guida pratica per la dissezione del cavo di Nerve e extracellulari registrazioni del modello Motor

Here we demonstrate the dissection of the crayfish abdominal nerve cord. The preparation comprises the last two thoracic ganglia (T4, T5) and the chain of ...