Ringraziamo U. Ganapati per la creazione e il collaudo dei mStrawberry OP9 linea cellulare. Inoltre, ringraziamo H. Shafifor suo aiuto con la co-coltura. HP è supportato da una borsa di studio presso l&#39;Istituto National Heart, Lung, and Blood (F31HL087714) (HP). Il contenuto di questo lavoro è di esclusiva responsabilità dell&#39;autore e non rappresenta necessariamente il punto di vista ufficiale dell&#39;Istituto National Heart, Lung, and Blood o il National Institutes of Health (NIH). Il meccanismo di Citometria a flusso UCLA Core è supportato dal NIH (CA-16042-28697 e AI), la Jonsson Cancer Center, la UCLA AIDS Institute, e la UCLA School of Medicine.

1. Preparazione di cellule ES <ol><li> Coltura delle cellule ES in base al protocollo standard per la linea cellulare particolare. Assicurati di preparare le cellule ES abbastanza sul piatto della mStrawberry OP9 cellule per il giorno 0 (cellule ES sarà placcato a 1x10 ^ 3 celle per cm 2 al giorno 0) </li></ol> 2. Preparazione delle cellule OP9 <ol><li> Prima di crescita mStrawberry OP9 cellule, preparare il terreno di coltura OP9 OP-9 celle Media Cultura <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Stock </td><td> Conc finale. </td><td> Volume (ml) </td></tr><tr><td> aMEM </td><td></td><td></td><td> 39,5 </td></tr><tr><td> FBS (OP-9 testato) </td><td> 100% </td><td> 20% </td><td> 10 </td></tr><tr><td> L-glutammina </td><td> 100X (200mm) </td><td> 2mM </td><td> 0,5 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 50mL </td></tr></tbody></table> Conservare a 4 ° C e utilizzare entro una settimana di preparazione </li><li> Al fine di mantenere mStrawberry OP9 cellule, i media devono essere cambiati ogni 2 giorni e le cellule devono essere subcoltura prima di raggiungere le cellule confluenza (sottocultura al 70-90% confluenza). mStrawberry OP9 colture cellulari non sono mai cresciuta oltre il 90% confluenza come questo si tradurrà in loro differenziazione in adipociti. Vedere la Figura 3. <ol class="lalpha"><li> Cellule subcultura da parte delle cellule 2X lavaggio con PBS (o 1x con PBS + 1x 0,1% con tripsina-EDTA) </li><li> Aggiungi preriscaldata 0,1% tripsina-EDTA a 37 ° C per 5 minuti (o fino a staccare le cellule) </li><li> Quando le cellule sono staccati, aggiungere OP-9 mezzo di crescita. Trasferire le cellule in una provetta da 50mL conica. </li><li> Cellule pellet a 300 xg per 5 minuti a temperatura ambiente. Gettare il surnatante. </li><li> Risospendere le cellule in fresco mStrawberry OP9 terreni di crescita </li><li> Cellule piastra ad una densità minima di 10 4 cellule / cm 2 </li><li> Crescere mStrawberry OP9 cellule a confluenza a partire dal 3 giorni prima del giorno necessario per co-coltura di cellule staminali embrionali (giorno 0, 5 ° giorno, o 8 ° giorno / 9 dell&#39;esperimento) </li></ol></li></ol> 3. ES / mStrawberry OP9 Co-cultura <ol><li> Preparare Co-cultura mediatica differenziazione <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Stock </td><td> Finale </td><td> Volume (ml) </td></tr><tr><td> aMEM </td><td></td><td></td><td> 39,5 </td></tr><tr><td> FBS </td><td> 100% </td><td> 20% </td><td> 10 </td></tr><tr><td> L-glutammina </td><td> 200mm </td><td> 2mM </td><td> 0,5 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 50mL </td></tr></tbody></table></li><li> mStrawberry OP9 cellule (Giorno -3) <ol class="lalpha"><li> SEMPRE Subculture OP9 celle -3 ° giorno, in modo da avere strati confluenti di cellule mStrawberry OP9 per 0 Giornata di co-coltura. Vedi Figura 4b. Piastra mStrawberry OP9 cellule a 1x10 4 / cm 2 per confluenza il giorno 0. Assicurati di sottocultura cellule extra per giorno Giorno 5 e 8 / 9 per la prosecuzione del co-coltura. </li></ol></li><li class="jove_content"> ES / mStrawberry OP9 co-coltura Set-Up (giorno 0) <ol class="lalpha"><li class="jove_content"> Lavare le cellule ES 2 volte con PBS </li><li> Trypsinize cellule ES con pre-riscaldato 0,25% tripsina-EDTA, incubare per 5 min @ 37 ° C </li><li> Aggiungi Co-cultura mediatica differenziazione di cellule </li><li> Pellet di cellule staminali a 400xg, 5-7min, RT. Gettare il surnatante </li><li> Risospendere le cellule in co-cultura mediatica differenziazione </li><li> Rimuovere i supporti da mStrawberry OP9 cellule </li><li> Aggiungi Co-cultura mediatica differenziazione mStrawberry fiaschi OP9 </li><li> Piastra 1x10 3 celle ES / cm 2 a fiasco di mStrawberry OP9 cellule. Incubare le cellule a 37 ° C, 5% di CO 2 con l&#39;umidità. </li></ol></li><li> mStrawberry OP9 cellule (Giorno 2) <ol class="lalpha"><li> MStrawberry sottocultura OP9 in modo da avere strati confluenti di cellule mStrawberry OP9 per il giorno 5 di co-coltura. Piastra mStrawberry OP9 cellule a 1x10 4 / cm 2 per confluenza in occasione della Giornata 5 (come al punto 3.2). Assicurati di sottocultura celle supplementari per il giorno 8 / 9, se necessario (come al punto 2.2). </li></ol></li><li> ES / mStrawberry OP9 co-coltura (Giorno 3) <ol class="lalpha"><li> Rimuovere con attenzione medio di co-coltura e sostituire con nuovi co-cultura medio differenziazione </li></ol></li><li> ES / mStrawberry OP9 co-coltura (giorno 5) <ol class="lalpha"><li> Lavare accuratamente co-colture 2x con PBS </li><li> Trypsinize cellule con pre-riscaldato 0,25% tripsina-EDTA </li><li> Lavare le cellule off pallone con co-cultura mediatica differenziazione </li><li> Celle a pellet 400xg, 7min, RT. Gettare il surnatante </li><li>Aggiungi Co-cultura mediatica differenziazione di cellule. Utilizzare una 21-gauge bluntended per risospendere le cellule e per garantire la sospensione singola cella </li><li> Contare le cellule utilizzando un emocitometro. Dovrebbe avere 100-150 volte maggiore del numero di cellule ES da giorno 0. </li><li> Re-seme 6.48x10 4 / cm 2 - 7.76x10 4 / cm 2 co-coltura le cellule su un nuovo livello di confluenti, mStrawberry OP9 cellule </li><li> Giorno 5 TEST-rimanente co-coltura le cellule possono essere utilizzate per l&#39;analisi di citometria a flusso, cytopreps (30K celle), le analisi ChIP, ecc </li></ol></li><li> ES / mStrawberry OP9 co-coltura (giorno 8 / 9 e Giorno 12) <ol class="lalpha"><li> Rimuovere i supporti di differenziazione dal pallone e salvare. Lavare monostrato 1x con PBS per rimuovere le cellule ematopoietiche in sospensione. Non gettare le cellule ematopoietiche. </li><li> Trypsinize cellule aderenti con pre-riscaldato 0,25% tripsina-EDTA </li><li> Lavare le cellule off pallone con i media differenziazione ES e aggiungere alle cellule ematopoietiche si trovano in sospensione = </li><li> Celle a pellet 400xg, 7min, RT. Gettare il surnatante </li><li> Aggiungi Co-cultura differenziazione dei media o PBS alle cellule. Utilizzare una 21-gauge bluntended per risospendere le cellule e di assicurare per le singole cellule delle cellule sospensione Conte utilizzando un emocitometro. </li><li> Co-coltura può essere continuato per 14 giorni per valutare progenitori emopoietici più maturo da risemina co-coltura le cellule su un nuovo livello di confluenti, mStrawberry OP9 cellule in occasione della Giornata 8 o 9 e poi di nuovo il giorno 12. Re-seed numero di cellulare ottimizzato basato sul recupero delle cellule necessarie per giorno di test. </li></ol></li><li> Valutazione della ES-derivati ​​progenie (giorno 1-14). ES-derivati ​​progenie possono essere valutate in qualsiasi giorno della co-coltura di flusso smistamento mStrawberry cellule negative (ES-derivati ​​progenie). <ol class="lalpha"><li> Rimuovere i supporti di differenziazione dal pallone e salvare. Lavare monostrato 1x con PBS per rimuovere le cellule ematopoietiche in sospensione. Non gettare le cellule ematopoietiche. </li><li> Trypsinize cellule aderenti con pre-riscaldato 0,25% tripsina-EDTA </li><li> Lavare le cellule off pallone con co-cultura mediatica differenziazione e aggiungere alle cellule ematopoietiche si trovano in sospensione </li><li> Celle a pellet 400xg, 7min, RT. Gettare il surnatante </li><li> Risospendere le cellule con 21-gauge bluntended e contare </li><li> Progenie ES-derivati ​​(mStrawberry cellule negative) possono essere ordinati dal flusso positivo mStrawberry OP9 cellule. Progenie ES-derivati ​​possono essere caratterizzati con l&#39;analisi in citometria a flusso, cytopreps, analisi ChIP, ecc </li></ol></li></ol> 4. Rappresentante dei risultati: <img src="/files/ftp_upload/2559/2559fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. ES / mStrawberry OP9 co-cultura di sistema. Il nostro laboratorio utilizza un cellulare in vitro in ES co-coltura di sistema per lo sviluppo del modello ematopoietiche. In questo sistema di co-coltura, le cellule ES differentiate, in emangioblasti al 5 ° giorno, quando si trova su uno strato confluente di mStrawberry OP9 cellule. Come co-coltura procede, precursori ematopoietici sono presenti 8 ° giorno, mentre terminalmente differenziate linee ematopoietiche appaiono di giorno 14. Le frecce indicano i giorni di differenziazione quando passaging di ES-derivati ​​progenie sui nuovi strati confluenti di mStrawberry OP9 cellule necessarie. <img src="/files/ftp_upload/2559/2559fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Una corretta differenziazione delle cellule ES. Le cellule staminali sono seminate su uno strato confluente di mStrawberry OP9 il giorno 0. ES-derivati ​​progenie cominciano a diventare visibili a 3 ° giorno di differenziazione, con ES-derivati ​​progenie che sembra un ammasso di cellule con un bordo definito o iniziando a formare un modello spirale. Emangioblasti, che sono i precursori comuni mesoderma per i lignaggi endoteliali e ematopoietiche, dovrebbe apparire come ammucchiate spirali di cellule al 5 ° giorno. Per la co-coltura periodi superiori a cinque giorni, ES-derivati ​​progenie dovrebbe apparire come ammassi di cellule ematopoietiche. Da due a quattro gruppi monocellulari, in occasione della Giornata 6 / 7, dovrebbe comparire e crescere in gruppi di cellule più grandi entro il giorno 8 / 9 della co-coltura. Progenie ES altri derivati ​​si trovano anche strettamente legata allo strato aderente cellule stromali. <img src="/files/ftp_upload/2559/2559fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3. Infruttuoso differenziazione delle cellule ES. I risultati di questa co-coltura riflettere improprio differenziazione delle cellule ES. Si noti come l&#39;ES-derivati ​​progenie non appaiono in un modello a spirale 5 ° giorno. L&#39;assenza di cellule in un modello spirale indica la formazione impropria hemangioblast. Se hemangioblast non si sviluppano correttamente, poi continuò co-coltura si tradurrà in stentato differenziazione lignaggio ematopoietiche. Co-culture con formazione hemangioblast improprio devono essere eliminati. <img src="/files/ftp_upload/2559/2559fig4.jpg" alt="Figura 4" /> Figura 4. mStrawberry OP9 colture cellulari. (A) mStrawberry cellula OP9 sono subcoltura a70-90% confluenza. (B) Per la differenziazione corretta, le cellule ES e ES-derivati ​​progenie sono posti su uno strato troppo confluenti di mStrawberry OP9 cellule. <img src="/files/ftp_upload/2559/2559fig5.jpg" alt="Figura 5" /> Figura 5. Rappresentante ES / mStrawberry OP9 Co-cultura profilo di flusso. Tutti ES-derivati ​​progenie sono mStrawberry cellule negative e possono essere ordinati dal flusso mStrawberry OP9 cellule. mStrawberry porta cellulare negativa è stata determinata utilizzando un tradizionale ES/OP9 co-coltura.

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	<li>Baron, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+origins+of+mammalian+hematopoiesis.">Embryonic origins of mammalian hematopoiesis.</a> Exp Hematol. 31, 1160-1160 (2003).</li><li>Baron, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+patterning+of+the+mouse+embryo:+implications+for+hematopoietic+commitment+and+differentiation.">Early patterning of the mouse embryo: implications for hematopoietic commitment and differentiation.</a> Exp Hematol. 33, 1015-1015 (2005).</li><li>Baron, M. H., Fraser, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+specification+of+early+hematopoiesis+in+the+mammal.">The specification of early hematopoiesis in the mammal.</a> Curr Opin Hematol. 12, 317-317 (2005).</li><li>Desbaillets, I., Ziegler, U., Groscurth, P., Gassmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryoid+bodies:+an+in+vitro+model+of+mouse+embryogenesis.">Embryoid bodies: an in vitro model of mouse embryogenesis.</a> Exp Physiol. 85, 645-645 (2000).</li><li>Ganapati, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+notch+signaling+in+normal+and+neoplastic+hematopoiesis:+global+gene+expression+profiling+in+response+to+activated+notch+expression.">Modeling notch signaling in normal and neoplastic hematopoiesis: global gene expression profiling in response to activated notch expression.</a> Stem Cells. 25, 1872-1872 (2007).</li><li>Hogan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manipulating the mouse embryo : a laboratory manual. , (1994).</li><li>Keller, G., Kennedy, M., Papayannopoulou, T., Wiles, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+commitment+during+embryonic+stem+cell+differentiation+in+culture.">Hematopoietic commitment during embryonic stem cell differentiation in culture.</a> Mol Cell Biol. 13, 473-473 (1993).</li><li>Keller, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+differentiation+of+embryonic+stem+cells.">In vitro differentiation of embryonic stem cells.</a> Curr Opin Cell Biol. 7, (1995).</li><li>Nakano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphohematopoietic+development+from+embryonic+stem+cells+in+vitro.">Lymphohematopoietic development from embryonic stem cells in vitro.</a> Semin Immunol. 7, 862-862 (1995).</li><li>Nakano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+development+of+hematopoietic+system+from+mouse+embryonic+stem+cells:+a+new+approach+for+embryonic+hematopoiesis.">In vitro development of hematopoietic system from mouse embryonic stem cells: a new approach for embryonic hematopoiesis.</a> Int J Hematol. 65, 1-1 (1996).</li><li>Nakano, T., Kodama, H., Honjo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+lymphohematopoietic+cells+from+embryonic+stem+cells+in+culture.">Generation of lymphohematopoietic cells from embryonic stem cells in culture.</a> Science. 265, 1098-1098 (1994).</li><li>Turksen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Embryonic stem cells : methods and protocols. , (2002).</li></ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Corretta differenziazione delle cellule ES sullo strato confluenti di cellule mStrawberry OP9 risultati nella produzione di Flk1 emangioblasti + al 5 ° giorno di co-coltura. Emangioblasti dovrebbe apparire come ammucchiate spirali di cellule, come osservato in Figura 1. Per il resto della co-coltura, visibile ES-derivati ​​progenie dovrebbe apparire come ammassi di cellule ematopoietiche (Figura 1). Al 6 ° giorno / 7 03:58 ammassi cellulari dovrebbe comparire e crescere in cluster cella più grande (sia aderenti e in sospensione) entro il giorno 8 / 9 della co-coltura. Progenie ES altri derivati ​​si trovano anche strettamente legati all&#39;interno dello strato aderente cellule stromali. Anche se non elencati nel protocollo, è fondamentale pre-test del FBS utilizzare nel supporto della crescita ES, la mStrawberry OP9 terreni di coltura e la ES / mStrawberry OP9 mezzi differenziazione. Adeguatamente testati siero dovrebbe garantire la corretta crescita di mStrawberry OP9 cellule, così come, proprio la differenziazione delle cellule ES in co-coltura fino a 5 ° giorno di differenziazione. In alternativa o in aggiunta al mStrawberry OP9 cellule, OP9 cellule possono essere irradiati, a 8000 rad, prima della semina a confluenza (7.8x10 4 celle / cm 2). Irradiazione di cellule OP9 permette l&#39;eliminazione delle ripetute fasi replating, nonché, permette l&#39;eliminazione quasi totale della vecchia, contaminando OP9 cellule di test a valle. OP9 cellule sono state progettate per esprimere la proteina mStrawberry di trasduzione OP9 cellule con 3ug/mL di un mStrawberry vettori lentivirali che esprimono sotto il controllo di un promotore CMV (pRRLsin-CMV vettore, UCLA vettore core). Standard ES/OP9 co-coltura protocolli comportano il collocamento di cellule staminali embrionali su un confluenti strato OP9 cellule, così come, a 5 passo replating giorno per ridurre vecchio, contaminando OP9 cellule dal passaggio delle cellule. Inoltre, solo le cellule ematopoietiche si trovano in sospensione vengono rimossi per la valutazione di ES-derivati ​​progenie. Tuttavia, sia con un passo replating e la raccolta di cellule in sospensione una sola manca potenzialmente un numero considerevole di sviluppo ES-derivato cellule ematopoietiche. Questo problema diventa importante affrontare quando si cerca di caratterizzare i difetti ematopoietiche associati a linee ES eliminazione diretta. Per aggirare questo problema il nostro laboratorio utilizzato una versione modificata di co-cultura, attraverso l&#39;utilizzo di mStrawberry che esprimono OP9 cellule. Questo assicura che tutte le progenie ES sono trasferite al continuo co-cultura al giorno 5, e per la raccolta di tutte le ES-derivati ​​progenie per saggi a valle. Questa modifica fornisce strumenti utili nella valutazione e caratterizzazione di progenie ematopoietiche derivate da entrambe le ES umane e delle linee del mouse. Questo ES-mStrawberry OP9 co-coltura modello ricapitola le varie fasi primitive e ematopoiesi definitiva. Nello studiare le prime fasi di sviluppo ematopoietici, molte persone utilizzano la batteria BL-CFC (Blast-come cellule formanti colonie) test, che valutano lo sviluppo del hemangioblast dalle cellule staminali. Mentre il modello BL-CFC saggio è uno strumento utile nell&#39;ambito delle indagini primi stadi dello sviluppo ematopoietico, il mStrawberry-ES co-coltura sistemi mostre utilità aumentare in quanto consente per la valutazione delle hemangioblast, così come, linee ematopoietiche più adulto. Il lavoro precedente con OP9/ES tradizionali e protocolli differenziazione EB ha dimostrato che altri fattori forse necessario, come l&#39;iperespressione di HoxB4, al fine di ricavare lungo termine ripopolare le cellule staminali ematopoietiche in vitro. Lavoro supplementare è necessario valutare se mStrawberry negativo, in ordine ES-derivati ​​popolazioni contengono vere cellule staminali ematopoietiche.

OP-9 celle di manutenzione Media Archivi Componenti <table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> aMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 12571-063 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> Omega scientifico </td><td> FB01 </td><td> Pre-Tested </td></tr><tr><td> L-glutammina </td><td> Cellgro </td><td> 25-005-CI </td><td> 200nm </td></tr><tr><td> Tripsina-EDTA </td><td> Stem Cell Technologies </td><td> 07901 </td><td></td></tr></tbody></table> ES/OP-9 differenziazione delle cellule Media Archivi Componenti <table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> aMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 12571-063 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> Hyclone </td><td> SH30070 </td><td> Pre-Tested </td></tr><tr><td> L-glutammina </td><td> Cellgro </td><td> 25-005-CI </td><td> 200mm </td></tr><tr><td> PBS (senza Ca 2 + e Mg 2 +) </td><td> Cellgro </td><td> 21-031-CV </td><td></td></tr><tr><td> Tripsina-EDTA </td><td> Stem Cell Technologies </td><td> 07901 </td><td></td></tr></tbody></table>

modified es / op9 co-culture protocol provides enhanced characterization of hematopoietic progeny

La differenziazione in vitro di cellule staminali verso un destino di cellule ematopoietiche è utile quando si studiano popolazioni di cellule che sono di difficile accesso in vivo e per caratterizzare i primi geni coinvolti nella ematopoiesi, senza avere a che fare con lethalities embrionale. Il ES/OP9 co-coltura sistema è stato originariamente progettato per produrre progenie ematopoietiche, senza la produzione su dei macrofagi, come il OP9 linea di cellule stromali deriva dal calvaria di topi mutanti privi di osteopetrosi funzionale M-CSF. In vitro ES/OP9 co-coltura sistema può essere utilizzato al fine di ricapitolare primo sviluppo ematopoietiche. Quando OP9 coltivati ​​su cellule stromali, cellule staminali si differenziano in Flk-1 + emangioblasti, progenitori emopoietici, e finalmente maturo, lignaggi terminalmente differenziate. Lo standard ES/OP9 co-coltura protocollo prevede l&#39;inserimento di cellule staminali embrionali su uno strato confluente di OP9 cellule, così come, a pochi passi replating periodici al fine di rimuovere vecchi, contaminando OP9 cellule. Inoltre, i protocolli attuali coinvolgono valutare solo le cellule ematopoietiche si trovano in sospensione e non sono ottimizzati per la valutazione di ES-derivati ​​della progenie per ogni giorno di differenziazione. Tuttavia, con passi replating e la raccolta di cellule in sospensione una sola manca potenzialmente una grande porzione di ES-derivati ​​progenie e lo sviluppo di cellule ematopoietiche. Questo problema diventa importante affrontare quando si cerca di caratterizzare i difetti ematopoietiche associati a linee ES eliminazione diretta. Qui si descrive una versione modificata ES / mStrawberry OP9 co-coltura, che consente l&#39;eliminazione dei contaminanti OP9 cellule di test a valle. Questo metodo permette la valutazione completa di tutti gli ES-derivati ​​della progenie per tutti i giorni di co-cultura, risultando in un modello di differenziazione ematopoietiche, che più direttamente corrisponde al modello di differenziazione ematopoietiche osservate entro l&#39;embrione.

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Modified ES / OP9 Co-Culture Protocol Provides Enhanced Characterization of Hematopoietic Progeny

mStrawberry OP9 cellule permettere una valutazione completa di tutte le ES-derivati ​​dalla progenie di co-coltura.

Modificato ES / OP9 Co-Cultura Protocollo prevede Caratterizzazione avanzata di Progeny emopoietiche

The in vitro differentiation of ES cells towards a hematopoietic cell fate is useful when studying cell populations that are difficult to access in vivo ...

modified-es-op9-co-culture-protocol-provides-enhanced

Research

JoVE Journal

Biology

20.5K Views.  University of California, Los Angeles. mStrawberry OP9 cellule permettere una valutazione completa di tutte le ES-derivati ​​dalla progenie di co-coltura.