Il sostegno finanziario per questo lavoro è stato fornito attraverso la National Science Foundation, National Institute of Health (NIH), Materials Technology Center (MTC) e ORDA a SIUC. Ringraziamo NSF per una borsa di studio (CHE-0959568) per l&#39;acquisto di un FE-SEM. Vorremmo ringraziare il Prof. Matteo McCarroll per le discussioni utili. Julia Reyes si ringraziare Colciencias, Agenzia colombiano e Universidad Pedagogica y Tecnologica de Colombia per la sua borsa di studio e sostegno finanziario.

A. Sintesi e caratterizzazione di liposomi PDA 4,5,6 Nota 1: Proteggere la soluzione dalla luce PDA utilizzando foglio di imballaggio di alluminio su ogni contenitore in tutte le fasi sperimentali. Nota 2: Due insiemi diversi di soluzione liposomi (B e C) sono stati preparati seguente procedura A (Sintesi e caratterizzazione di liposomi PDA). 1. Sintesi di N-idrossisuccinimmide Diacteylene (NHS-PCDA) <ol><li> Per preparare liposomi, un ingrediente essenziale PCDA-NHS è necessaria. Abbiamo sintetizzato PCDA-NHS utilizzando la seguente procedura: </li><li> Aggiungere acido 10,12-pentacosadiynoic (PCDA) (0,267 g, 0,713 mmol), N-idrossisuccinimmide (0,0914 g, 0,786 mmol) e 1 - (3 - (dimetilammino) propil)-3-etilcarbodiimmide cloridrato (0,144 g, 0,713 mmol ) in secco CH 2 Cl 2 (20 ml). </li><li> Agitare la soluzione a temperatura ambiente per 2 h. </li><li> Rimuovere con cautela il solvente utilizzando revaporatore Rotary per produrre un film secco sottile. </li><li> Utilizzare imbuto separatore per estrarre il residuo con etere etilico (25 ml) e acqua (25 ml) tre volte. </li><li> Asciugare lo strato organico con MgSO 4 (1,0 g) per mezz&#39;ora. Filtrare e rimuovere il solvente mediante evaporazione a rotazione per ottenere una polvere bianca solido (0,24 g,&gt; 90%). </li><li> Analizzare composto finale in Risonanza Magnetica Nucleare (NMR). </li><li> 1 H NMR (300 MHz, DMSO), δ (ppm): 0,893 (t, 3H), 1,268 (m, 26H), 1,512 (m, 4H), 1,754 (m, 2H), 2,252 (t, 4H), 2,365 (m, 1H), 2,610 (m, 1H), 2,842 (s, 2H). </li></ol> 2. Preparazione liposomiale 5,6,7 <ol><li> Sciogliere PCDA: PCDA-NHS: 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DMPC) :: 8: 1: 1 in 20 ml di diclorometano. </li><li> Filtrare la soluzione con un filtro di carta per rimuovere aggregati. </li><li> Evaporare completamente il solvente per produrre un film sottile di monomeri. </li><li> Asciugare il film sottile durante la notte in vacUum. </li><li> Idratare la pellicola con acqua deionizzata (50 ml) per ottenere una soluzione di liposomi concentrazione desiderata (0,65-1 mM). </li><li> Sonicare la sospensione risultante con un sonicatore sonda a 76 ° C per ~ 18 min. </li><li> Attentamente filtrare la soluzione attraverso un filtro di carta per rimuovere gli aggregati lipidici </li><li> Raffreddare la soluzione a 4 ° C per una notte a promuovere l&#39;auto-assemblaggio dei monomeri. La soluzione finale dovrebbe essere otticamente trasparente. </li><li> Polimerizzare i monomeri autoassemblati diacetylene (liposomi) mediante irradiazione con 254 nm di radiazione UV per ~ 2 min utilizzando una sorgente di raggi UV Pen (4,5 mW / cm 2) in aria. </li><li> La soluzione di liposomi è stabile a temperatura ambiente per almeno due settimane. La soluzione era più stabile quando refrigerato. </li></ol> B. Preparazione di rodamina-etichetta albumina sierica bovina (BSA-Rh) liposomi modificati PCDA 1. Legame di BSA-Rh alla superficie del liposoma <ol><li> Sciogliere BSA-Rh in PBS buffer (concentrazione ionica era 0.01M, pH 7,2) per rendere la concentrazione finale di 1,2 pM di BSA-rodamina soluzione. </li><li> Aggiungere 2 ml (1,2 pM) di BSA-rodamina a 10 ml di soluzione di liposomi preparati nel passo A.2. (Vedi sopra) a temperatura ambiente. </li><li> Classica reazione per il legame di gruppi amminici della lisina residui di proteine ​​acido carbossilico attivato da NHS gruppo è stato seguito (schema di reazione in Figura 2). NHS-PCDA è stato progettato (Figura 2, punto 1) per covalentemente molecole di legame con le proteine ​​liposomi con NHS-ammine reazioni (Figura 2, punto 2). NHS è un ottimo agente lasciando che guida l&#39;ammina-acido carbossilico reazione in avanti. La resa di questa reazione in condizioni appropriate devono essere quantitative. </li><li> Rimozione di libero BSA-Rh: Immergere un Spectra / Por Biotech Cellulosa Ester (CE) membrana (MW C O: 100.000) in acqua deionizzata water per 15 min. Questa membrana viene utilizzata per dialisi di non reagito BSA-rodammina (Molecular peso ~ 66.000 Da) in acqua deionizzata. </li><li> Trasferire accuratamente la soluzione per la membrana di dialisi. </li><li> Cambiare l&#39;acqua a 2 ore, 8 ore, 14 ore, 24 ore, e 36 ore durante la dialisi. </li><li> Raccogliere la soluzione finale in un flaconcino coperto con un foglio di alluminio. </li></ol> C. Preparazione di SR-diammina e biotina-tag Liposomi 1. Invece di utilizzare DMPC nel passo 2.1, useremo biotina-etichettato-(1,2-dioleoyl-sn-glicero-3-phosphoethanolamine-N-(Biotinyl) (biotina-DOPE). <ol><li> Seguire tutti i passi da 2.2 a 2,9. </li><li> Invece di BSA-Rh nel passaggio B, utilizzare Diamine Sulphorhodamine tag (SR-diammina). </li><li> Seguire tutte le ulteriori iniziative in B. </li><li> I liposomi di questa preparazione conteneva biotina e SR-diammina sulle loro superfici. I passi successivi sono simili a A e B (vedi sopra) con una sola eccezione: streptavidina è stato aggiunto alla soluzione moltosulla indagare biotina-streptavidina interazioni attraverso cambiamenti nel FRET efficienza. </li></ol> D. Rappresentante Risultati <img alt="Titolo Figura" src="/files/ftp_upload/3805/3805figtitle.jpg" /> Figura titolo. Un cartone spiegare la reazione e FRET processo si verificano in superficie del liposoma (preparata seguendo passo B). A. Controllo dei attaccamento proteina di liposomi mediante FRET 1 Controllo di FRET tra rodamina e liposomi PDA preparati al punto B. Spettri di eccitazione e di emissione di BSA-Rh e spettro di assorbimento del PDA sono prese (Figura 3A). Si può vedere chiaramente che lo spettro di emissione di BSA-Rh sovrappone con lo spettro di assorbimento del PDA. Questo soddisfa il requisito di risonanza per il meccanismo di FRET. BSA-Rodamina liposomi tag prima e dopo la polimerizzazione sono stati analizzati con UV-Vè e spettroscopia di fluorescenza. Per il donatore e accettore isolato, l&#39;efficienza di FRET dipende fortemente donatore-accettore distanza (r) e J 1 (j-value). La tempra in dell&#39;emissione si osserva (Figura 3B) a causa di FRET tra rodamina e PDA a causa della comparsa di spettro di assorbimento elettronica di PDA blu dopo fotopolimerizzazione. Nel nostro caso, l&#39;efficienza FRET è zero per liposomi non polimerizzato e rodamina perché J = 0 per liposomi non polimerizzato nella regione del visibile. Abbiamo eseguito esperimenti simili con solo liposomi PDA che non contenevano NHS sulla loro superficie. In questi casi, BSA-Rh non è stato etichettato alla superficie dei liposomi. In tal caso, la distanza media tra rodamina e PDA (r media) era molto maggiore del raggio Forster (R 0 = 2,8 nm). Quindi, non abbiamo osservato una forte diminuzione l&#39;intensità di fluorescenza. Questa osservazione unaLSO suggerisce che l&#39;estinzione della fluorescenza è dominante quando r &lt;2.8 nm. J e R 0 valori sono stati calcolati usando le formule seguenti: [1] J (λ) = ∫ D F (λ) A ε (λ) dλ λ 4 R 0 = 0,211 [k 2 n -4 Q D J (λ)] 1/6 Il coefficiente di estinzione (ε) di blu-PDA è nell&#39;intervallo 2000-10000 ~ M -1 cm -1 prima dell&#39;aggiunta di streptavidina. Il coefficiente di estinzione del blu-PDA dipende dal foto-polimerizzazione condizione. [2] Ad esempio, i valori ε sarà maggiore di una soluzione che è stata polimerizzata un tempo più lungo. Inoltre, l&#39;auto-assemblaggio dei monomeri diacetylene possono influenzare i valori ε. La J calculzioni tener conto di questi cambiamenti, e riflettono i cambiamenti nei coefficienti di estinzione a causa di PDA biotina-streptavidina interazioni molecolari. valori di J sono calcolati utilizzando l&#39;assorbimento sperimentale PDA e SR-101 dati sulle emissioni. I cambiamenti nei valori J sono dovute a spostare nello spettro di assorbimento elettronica del PDA dopo l&#39;aggiunta della soluzione di streptavidina (Figura 4C). L&#39;unità di valori di J è M -1 cm -1 nm 4. B. Monitoraggio di FRET con aggiunta di streptavidina-biotina al etichettato soluzione liposomi Nota 1: Controllo di FRET tra rodamina e liposomi PDA preparati al punto C sopra. Spettri di eccitazione e di emissione di Sulphorhodamine-etichettato diammina (SR-diammina) e spettro di assorbimento del PDA sono prese (Figura 4A). Liposomi non polimerizzato e polimerizzato biotina contrassegnati sono stati analizzati utilizzando UV-Vise spettroscopia di fluorescenza. L&#39;emissione di rodamina (SR-101) è diminuita di circa il 45% dopo la polimerizzazione (Figura 4B) suggerendo quenching emissione causa FRET. Aggiungere 40 aliquote da 1 ml (pM) di soluzione di streptavidina a 2 ml di soluzione di liposomi. Con l&#39;aggiunta di streptavidina alla soluzione, cambiamenti di valore J è osservato (Figura 4C). Come biotina si lega alla streptavidina, l&#39;intensità del picco di blu PDA liposoma (~ centrato a 645 nm in figura 1) è diminuita, mentre un aumento del picco di assorbimento a 540 nm è osservato (F IGURA 1S). Figura 4D mostra cambiamenti del FRET efficienza. Il FRET efficienza è diminuita con l&#39;aumento della concentrazione di streptavidina è inoltre coerente con la nostra previsione. Registrare l&#39;emissione SR dopo ogni aggiunta un&#39;aliquota 40 microlitri di streptavidina. Abbiamo osservato un costante aumento delle emissioni rodamina dopo l&#39;aggiunta di streptavidina (Figura 5). Questo aumento di emissioni rodamina è dovuto ad una diminuzione del valore di J per lo spettro di emissione Sulphorhodamine e spettro di assorbimento PDA seguendo biotina-streptavidina interazioni. A livello molecolare, biotina-streptavidina interazioni portare a sottili cambiamenti nella lunghezza effettiva coniugazione del PDA che si traduce in una diminuzione del blu-PDA forma ad una più termodinamicamente stabile red-PDA modulo 2. Questa è la base delle variazioni dei valori J. È interessante notare che le sottili differenze nelle interazioni molecolari per covalentemente o non covalentemente biotina legato al liposoma PDA possono essere esaminati utilizzando il nostro test di rilevazione 4. Abbiamo anche eseguito esperimenti di controllo sono monitorati e l&#39;emissione dei campioni di controllo nelle stesse condizioni sperimentali, come quelli per streptavidina-biotina sistema. Gli esperimenti di controllo sono costituiti da: (1) Liposomi soluzioni che contenevano biotina sulla lorosuperficie sono stati aggiunti soluzione tampone stesso volume e concentrazione, e (2) soluzione di liposomi senza biotina recettori sulla loro superficie sono stati aggiunti di streptavidina stesso volume e concentrazione. L&#39;intensità della biotina-etichettato soluzione liposomi dopo l&#39;aggiunta di streptavidina mostrato intensità maggiore, ma l&#39;intensità della soluzione liposoma degli esperimenti di controllo (per esempio, vedere Figura 2S), invece, mostra una diminuita in intensità di emissione. Ciò è attribuito alla diluizione della soluzione. Questi esperimenti indicano chiaramente che l&#39;emissione maggiore della soluzione era dovuto a specifiche interazioni molecolari. Raggio di Forster (R 0) per la coppia rodamina e PDA si calcola (Eq.2) di essere ~ 2.80 nm. Ciò significa che per isolati PDA-rodammina coppie, il 50% delle molecole eccitate rodammina statali avranno la loro energia trasferita al PDA quando r è 2,80 nm. Abbiamo obs<html> erved che quando biotina è covalentemente attaccata alla spina dorsale PDA, l&#39;aumento di emissione era 2-3 volte maggiore di quella dei non-covalentemente legato alla biotina liposomi. 4 Questi risultati suggeriscono che il nostro sistema proposto è sensibile a distinguere le sottili differenze nelle interazioni al trasduttore (linker tra biotina e bilayer liposomiale) dovuta ai recettori legati covalentemente e non covalente a liposomi. Seconda funzionalità di acquisizione dei dati di scansione e del, spettrofotometro monitoraggio in tempo reale (in millisecondi in scala seconda volta) di interazioni proteina (nella spettroscopia UV-Vis) sono possibili con questo sistema di rilevamento. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3805/3805fig1.jpg" /> Figura 1. Spettri di assorbimento di soluzioni PDA blu e rosso. (Interno) al microscopio ottico scattate con una fotocamera digitale. g &quot;/&gt; Figura 2. Schema di reazione per la sintesi PCDA-NHS (passo 1). Reazione di PCDA-NHS al sostituente amminico delle proteine ​​(step 2). Fase 2 è la base del legame di residuo di lisina delle proteine ​​ad acido carbossilico di PCDA monomero. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3805/3805fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per ingrandire figura</a> . <img alt="Figura 3A" src="/files/ftp_upload/3805/3805fig3A.jpg" /> Figura 3A. VARIAZIONE osservata FRET efficienza è dovuta ai cambiamenti nello spettro di assorbimento del PDA. Prima di polimerizzazione non vi è alcuna sovrapposizione tra BSA-Rh di emissione e di assorbimento PDA ma dopo sovrapposizioni di assorbimento di polimerizzazione PDA con BSA-Rh di emissione, che è il requisito di FRET. Rodamina è un donatore (rosso) e liposomi polimerizzati PDA agire come accettore (blu). <img alt="Figura 3B" src="/files/ftp_upload/3805/3805fig3B.jpg" /> Figura3B. Spettri di fluorescenza di BSA-Rh liposomi etichetta prima (blu) e dopo PCDA polimerizzazione (rosso). Una forte diminuzione delle emissioni rodamina è stato osservato a causa di FRET tra rodamina e PDA. <img alt="Figura 4A" src="/files/ftp_upload/3805/3805fig4A.jpg" /> .. Figura 4A sovrapposizione spettrale (J) per cambiare PDA (blu o rosso) spettro di assorbimento e spettro di emissione Sulphorhodamine (arancione) Figura 4A è lo spettro rappresentativo per condizioni estreme, cioè quando un eccesso di streptavidina è stato aggiunto alla soluzione. La figura 4A mostra una quasi completa blu-rosso trasformazione PDA dopo l&#39;aggiunta di un eccesso di streptavidina. Si vede chiaramente che J (sovrapposizione spettrale) aumenta con blu-shift dello spettro di assorbimento PDA <img alt="Figura 4B" src="/files/ftp_upload/3805/3805fig4B.jpg" /> Figura 4B. Spettri di fluorescenza prima (blu) e dopo (red) polimerizzazione liposoma. <img alt="Figura 4C" src="/files/ftp_upload/3805/3805fig4C.jpg" /> Figura 4C Condizione per FRET:. Cambiamento J tra donatore (Sulphorhodamine) e accettore (PDA) con l&#39;aggiunta streptavidina alla soluzione di liposomi. <img alt="Figura 4D" src="/files/ftp_upload/3805/3805fig4D.jpg" /> Figura 4D. FRET cambiamento efficienza tra il donatore (Sulphorhodamine) e accettore (PDA) con l&#39;aggiunta streptavidina alla soluzione liposoma. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/3805/3805fig5.jpg" /> Figura 5. Spettro di emissione Rhodamine dopo l&#39;aggiunta di aliquote streptavidina alla soluzione PDA liposoma. Inset mostra una vista più ampia di variazioni delle emissioni nel SR-101 spettri.

<ol>
	<li>Lakowicz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles of Fluorescence Spectroscopy. , (1999).</li><li>Charych, D. H., Nagy, J. O., Spevak, W., Bednarski, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+Colorimetric+Detection+of+a+Receptor-Ligand+Interaction+by+a+Polymerized+Bilayer+Assembly.">Direct Colorimetric Detection of a Receptor-Ligand Interaction by a Polymerized Bilayer Assembly.</a> Science. 261, 585-588 (1993).</li><li>Yoon, B., Lee, S., Kim, J. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+Conceptual+and+Technological+Advances+in+Polydiacetylene-based+Supramolecular+Chemosensors.">Recent Conceptual and Technological Advances in Polydiacetylene-based Supramolecular Chemosensors.</a> Chem. Soc. Rev. 38, 1958-1968 (2009).</li><li>Xuelian, L. i., Kohli, P. u. n. i. t. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+Molecular+Interactions+in+Biosensors+Based+on+Fluorescence+Resonance+Energy+Transfer.">Investigating Molecular Interactions in Biosensors Based on Fluorescence Resonance Energy Transfer.</a> J. Phys. Chem. C. 114, 6255-6264 (2010).</li><li>Li, X., Matthews, S., Kohli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+Resonance+Energy+Transfer+in+Polydiacetylene+Liposomes.">Fluorescence Resonance Energy Transfer in Polydiacetylene Liposomes.</a> J. Phys. Chem. B. 112, 13263-13272 (2008).</li><li>Li, X., McCarroll, M., Kohli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulating+Fluorescence+Resonance+Energy+Transfer+in+Conjugated+Liposomes.">Modulating Fluorescence Resonance Energy Transfer in Conjugated Liposomes.</a> Langmuir. 22, (2006).</li><li>New, R. R. C., New, R. R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Liposomes: A Practical Approach. , 33-104 (1990).</li><li>Chen, X., Lee, J., Jou, M. J., Kim, J. -. M., Yoon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorimetric+and+Fluorometric+Detection+of+Cationic+Surfactants+Based+on+Conjugated+Polydiacetylene+Supramolecules.">Colorimetric and Fluorometric Detection of Cationic Surfactants Based on Conjugated Polydiacetylene Supramolecules.</a> Chem. Commun. , 3434-3436 (2009).</li><li>Yarimaga, O., Im, M., Choi, Y. -. K., Kim, T. W., Jung, Y. K., Park, H. G., Lee, S., Kim, J. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Color+Display+System+Based+on+Thermochromic+Conjugated+Polydiacetylene.">A Color Display System Based on Thermochromic Conjugated Polydiacetylene.</a> Macromolecular Research. 18, 404-407 (2010).</li></ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Abbiamo effettuato legame selettivo di residuo di lisina della proteina sulla superficie del liposoma con NHS-ammina reazione. Questo metodo basato FRET è capace di fare monitoraggio in tempo reale di biotina-streptavidina vincolanti e proteine ​​(BSA) di legame alla superficie del liposoma. Analoga procedura può essere applicata per studiare la dinamica di legame di proteina diversi con i loro recettori selettivi. C&#39;è flessibilità nella scelta fluorofori che forniranno cambiamenti nei valori J seco...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> 10,12-pentacosadiynoic acido (PCDA) </td><td> GFS sostanze chimiche </td><td> 3261 </td><td> Sensibile alla luce </td></tr><tr><td> N-idrossisuccinimmide (NHS) </td><td> Acros organici </td><td> 157270250 </td><td> Umidità sensibile </td></tr><tr><td> 1 - (3 - (dimetilammino) propil)-3-etilcarbodiimmide cloridrato (EDC) </td><td> Chem-Impex International </td><td> 00050 </td><td></td></tr><tr><td> 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DMPC) </td><td> Avanti Polar Lipids </td><td> 850345P </td><td></td></tr><tr><td> Rodamina-tagged Ser Bovinium Albumina (BSA-Rh) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A4537 </td><td></td></tr><tr><td> (1,2-dioleoyl-sn-glicero-3-phosphoethanolamine-N-(Biotinyl) (biotina-DOPE) </td><td> Avanti Polar Lipids </td><td> 870282 </td><td></td></tr></tbody></table>

real-time monitoring of ligand-receptor interactions with fluorescence resonance energy transfer

FRET è un processo in cui l&#39;energia non è radiativamente trasferita da una molecola donatrice eccitato ad un stato fondamentale molecola accettore a lungo raggio attraverso interazioni dipolo-dipolo 1. Nel saggio di rilevamento presente, utilizziamo una proprietà interessante di PDA: blu-shift in UV-Vis spettro di assorbimento elettronica PDA (figura 1) dopo un analita interagisce con i recettori collegati al PDA 2,3,4,7. Questo spostamento nello spettro di assorbimento PDA fornisce cambiamenti nelle sovrapposizione spettrale (J) tra PDA (accettore) e rodamina (donatore) che porta a variazioni del FRET efficienza. Pertanto, le interazioni tra analita (ligando) e recettori vengono rilevati tramite FRET tra fluorofori donatori e PDA. In particolare, ci mostra il rilevamento di un modello di streptavidina molecola proteica. Abbiamo inoltre dimostrato il legame covalente-di albumina di siero bovino (BSA) alla superficie del liposoma con FRET meccanismo. Queste interazioni tra tegli liposomi bistrato e molecole proteiche possono essere rilevati in tempo reale. Il metodo proposto è un metodo generale per il rilevamento chimico piccole e grandi molecole biochimiche. Poiché fluorescenza è intrinsecamente più sensibile colorimetria, il limite di rilevazione del test può essere in sub-nanomolare gamma o inferiore 8. Inoltre, PDA può agire come accettore universale FRET, il che significa che più sensori possono essere sviluppati con PDA (accettore) funzionalizzato con donatori e recettori diversi attribuiti sulla superficie dei liposomi PDA.

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Monitoring of Ligand-receptor Interactions with Fluorescence Resonance Energy Transfer at JoVE.com

Real-time Monitoring of Ligand-receptor Interactions with Fluorescence Resonance Energy Transfer

Dimostriamo FRET tra polydiacetylene polimero coniugato (PDA) e fluoroforo attaccato alla superficie dei liposomi mobile per il rilevamento di biomolecole. Liposomi PDA conteneva anche molecole recettoriali sulle loro superfici di biomolecole da utilizzare come sonde. Interazioni ligando-recettore portare a cambiamenti nella FRET efficienza tra il fluoroforo e PDA che è alla base del meccanismo di rilevamento.

Monitoraggio in tempo reale delle interazioni ligando-recettore mediante Bonifico Fluorescence Resonance Energy

FRET is a process  whereby energy is non-radiatively transferred from an excited donor molecule to  a ground-state acceptor molecule through long-range ...

real-time-monitoring-ligand-receptor-interactions-with-fluorescence

Research

JoVE Journal

Biology

14.3K Views.  Southern Illinois University. Dimostriamo FRET tra polydiacetylene polimero coniugato (PDA) e fluoroforo attaccato alla superficie dei liposomi mobile per il rilevamento di biomolecole. Liposomi PDA conteneva anche molecole recettoriali sulle loro superfici di biomolecole da utilizzare come sonde. Interazioni ligando-recettore portare a cambiamenti nella FRET efficienza tra il fluoroforo e PDA che è alla base del meccanismo di rilevamento.