Questo lavoro è stato sostenuto da una concessione del &quot;Deutsche Forschungsgemeinschaft&quot; a SU Eisenhardt (EI 866/1-1).

1. Anestesia e monitoraggio <ol><li> Etico competente nazionale e istituzionale dovrebbe essere a posto prima di effettuare esperimenti su animali. Dopo l&#39;approvazione al comitato etico anestetizzare ratti Sprague Dawley maschi con un peso corporeo 120-180 g. Consegna 2 - 3% vol isoflurano a una finestra di plexiglas con vaporizzatore isoflurano e posizionare all&#39;interno ratto. </li><li> Non appena il livello adeguato di anestesia si ottiene (mancanza di reazione a punta o la coda pizzico), il ratto è ponderato e rasato l&#39;area ventrale del collo dell&#39;utero. </li><li> Posizionare il ratto in decubito dorsale su un tappetino di riscaldamento per mantenere la temperatura corporea a 37 ° C e applicare isoflurano al 2% vol utilizzando una maschera di silicone. </li></ol> Le fasi di preparazione seguenti sono meglio realizzato utilizzando un microscopio chirurgico. <ol start="4"><li> Per la preparazione della trachea, l&#39;arteria carotide e la vena giugulare, eseguire una incisione cutanea orizzontale 2 cm nella zona of soprasternale e mobilitare le ghiandole salivari lateralmente. </li><li> Si trovano ora ad affrontare i muscoli del collo ventrali. Separarli accuratamente sulla linea mediana e trovare la trachea. Esporre 1 - 2 cm della trachea e posizionare una pinza micro sotto di esso in modo da sollevarla. </li><li> Ora, tagliato a metà attraverso il lato ventrale della trachea. Fare attenzione a non tagliare tutto il modo attraverso, se lo fai, alla fine taglio della trachea scivolerà nuovamente dentro il petto e essere molto difficile da lavorare. </li><li> Inserire un tubo Abbocath (14G) utilizzato come tubo tracheale nella parte inferiore della trachea, che è stato precedentemente collegato ad un ventilatore animale. Suggerimento: Studio su staffe di fissaggio magnetico, nonché la sutura della trachea intorno al tubo è essenziale per mantenere il tubo tracheale in posizione. Generalmente si usa Terylene 5/0 sutura, il materiale di sutura tuttavia simile può essere utilizzato. </li><li> La respirazione può quindi essere controllata in volume (frequenza, 35 - 45 respiri al minuto, volume corrente, 4.5 - 5 ml; FiO 2 </sub&gt;, 0,35-0,50;. isoflurano 1,5-2% vol) 14 Atelettasia può essere evitata mantenendo una positiva pressione di fine espirazione di 5 a 10 mm di H 2 O. 15 </li><li> Per la canulation carotide, il muscolo destra sterno viene separato per via smussa per individuare l&#39;arteria carotide. </li><li> Separare il nervo vago con attenzione dalla carotide e montare l&#39;arteria su un angolo micro pinza per fermare il sangue che scorre dal cuore. </li><li> Passare due pezzi di lunghezza uguale di sutura sotto la carotide. In riferimento al cuore, la sutura più distale è strettamente legato a occludere il sangue che fluisce dalla regione della testa, mentre la sutura viene legata prossimale liberamente attorno carotide. </li><li> Utilizzando forbici micro un piccolo taglio viene effettuato nella carotide tra i due legature. </li><li> Inserire un catetere di polietilene (0,28 mm di diametro interno) riempito con soluzione fisiologica che è collegato ad un trasduttore di pressione. </li><li> Remuovere le pinze micro e filo ulteriormente il catetere nell&#39;arteria. Quindi stringere la legatura prossimale intorno all&#39;arteria e il catetere. Suggerimento: Applicazione di una seconda sutura prossimale impedisce sanguinamento dopo la rimozione delle micro pinze. </li><li> Legare la legatura distale intorno alla carotide e il catetere per l&#39;ancoraggio aggiuntivo. </li><li> Monitorare costantemente l&#39;anestesia dal monitoraggio della frequenza cardiaca e pressione arteriosa. Eseguire intermittenti arterioso emogas analisi utilizzando un analizzatore di gas di sangue 16. Una frequenza cardiaca inferiore a 300 bpm o superiore a 360 bpm e una pressione arteriosa media cadere di sotto di 80 mmHg per più di 5 minuti sono i criteri di esclusione. 17, 18 Mantenere il sangue pH nei limiti fisiologici (7,35-7,45). Nel caso in cui l&#39;esperimento deve essere chiuso a causa di tassi anomali di monitoraggio, scarificare l&#39;animale dal collo o dislocazione exanguation. </li></ol> Per la somministrazione endovenosa di coloranti fluorescenti o altri farmaci of interesse, effettuare le seguenti operazioni: <ol start="17"><li> Fuoco l&#39;area della vena giugulare sinistra con il microscopio chirurgico. </li><li> Con una pinza in ogni mano, strappare il sottile fascia di rivelare la vena giugulare. Montare la vena su una pinza ad angolo micro. Il flusso di sangue si fermerà. </li><li> Con pinze, due pezzi di lunghezza uguale di sutura vengono passati sotto la vena giugulare concorde al canulation carotide. Legare saldamente la sutura distale e prossimale della sutura liberamente attorno alla vena giugulare. </li><li> Fate un piccolo taglio nella vena giugulare e inserire un catetere di polietilene (0,28 mm di diametro interno) che è stata lavata con soluzione salina. Contrassegnare che incisione e canulation può essere più impegnativo e richiede tempo di quello della carotide. </li><li> Passare il catetere verso il cuore e stringere la legatura più vicina al cuore intorno alla vena e il catetere. </li><li> Dopo la pervietà conforme, legare legatura distale intorno al catetere. Suggerimento: fissaggio supplementare di bocateteri ° con nastro può impedire dislocamento. </li><li> Risciacquare cateteri frequentemente per evitare la coagulazione intraluminale. </li></ol> 2. Preparazione del Muscle Cremaster <ol><li> Usiamo una fase in alluminio di 1,5 - 2 cm di spessore per l&#39;imaging cremasterico. La fase adotta rapidamente la temperatura desiderata del termocuscino attenuando controllo termico del tessuto cremasterico. Questo è fondamentale per gli studi infiammazione. In alternativa, una piattaforma plexiglas può essere utilizzata se la regolazione della temperatura cremasterico è più difficile. Posizionare lo scroto al centro del palco. </li><li> L&#39;incisione iniziale è realizzata in pelle e fascia esterna spermatico sopra scroto alla fine distale seguita dalla dilatazione prudente dello spazio sottocutaneo usando forbici sottili. Evitare di toccare il tessuto sottostante con gli strumenti. </li><li> Non appena il tessuto è esposto è inumidito con pre-riscaldato (37 ° C) soluzione salina tamponata con fosfato with calcio e magnesio. Applicare questa soluzione a qualsiasi tessuto esposto. </li><li> Il tessuto connettivo tra la fascia spermatica esterna e il muscolo cremastere è accuratamente rimosso per liberare il muscolo cremastere dal tessuto circostante. </li><li> La superficie esterna del muscolo cremastere è poi cautamente alla rimozione del tessuto connettivo. Superfusione continuo durante idrati dissezione del tessuto connettivo, facilitando la visibilità e la rimozione. </li><li> Suturare l&#39;estremità distale del sacco cremastere di tenere premuto leggermente e prolungare l&#39;estremità del sacco. </li><li> Incidere l&#39;estremità distale del sacco sulla parte ventrale e allungato l&#39;incisione prossimale usando forbici micro. Con attenzione cauterizzare sanguinamento navi lungo le linee di incisione che utilizzano una cauterizzazione termica. Evitare inutili cauterizzazione per limitare ulteriori stimoli infiammatori. Tip:. Dinamica del flusso sanguigno vicino alla periferia della preparazione sono modificate dal presente danno tissutale 19 Pertanto, per ridurre l&#39;se influisce sulla raccolta di dati, i vasi sanguigni vicino al centro della preparazione deve essere usata per l&#39;imaging. </li><li> Il Cremaster aperto sia piatto sul piedistallo di alluminio anche se ancora collegati da un legamento sottile dell&#39;epididimo sotto il testicolo. Riflettendo il testicolo da un lato espone questo legamento tra cui una piccola arteria e la vena che collegano l&#39;epididimo. Utilizzare il cauterio per sigillare i vasi ed impiegare le forbici per tagliare il micro legamento connettivo tra testicolo e tessuto cremasterico. </li><li> Spingere delicatamente indietro il testicolo isolato nel canale inguinale. Altri autori resecare il testicolo dopo la legatura prossimale (orchiectomia) insieme con il pad associato moda inguinale 20. In un modello sensibile come l&#39;attivazione dei leucociti IRI indotta si cerca di evitare tutti gli stimoli aggiuntivi chirurgici, quindi ci asteniamo dalla resezione del testicolo, che non è di solito necessaria per ottenere una sufficiente esposizione del muscolo cremastere. </li><li> Oltre al primosutura quattro bordi di tessuto (due su ogni lato) e collegare i fili ai nastri di diffondere con cautela il tessuto cremasterico radialmente sul palco in alluminio. Lasciando uno spazio tra la fase di alluminio e l&#39;ingresso esterno del canale inguinale semplifica clipping successiva cremasterico per ischemia. </li><li> Inserire due estremità del catetere di polietilene (0,28 mm di diametro interno) vicino al tessuto cremasterico per l&#39;installazione superfusione. Assicurarsi che il lume è privo di aria, per evitare bolle d&#39;aria nella camera di fluido finale. </li><li> Tracciare una linea di vaselina (vaselina) intorno al muscolo cremastere con una siringa. La linea deve estendere la dimensione del vetrino che viene utilizzato per la copertura. </li><li> Per creare una camera di fluido, posizionare un foglio quadrato coperchio (32 x 32 mm) sul tessuto cremasterico e fissare i bordi alla linea di vaselina. </li><li> Nel caso in cui il tessuto non è cremasterico superfuso con un farmaco specifico, sostituzione continua delle influenza circostanteid è non essenziale. Una singola applicazione di soluzione salina tamponata con fosfato di calcio e magnesio nella camera creata può quindi essere sufficiente. Stimolazione locale con farmaci tuttavia deve essere eseguita in modo continuo tramite micro-perfusione pompa ad una velocità di 3 ml per ora. </li><li> Il tessuto cremasterico è ora pronto per l&#39;imaging microscopico. </li></ol> 3. Setup intravitale La configurazione di base intravitale possono variare. Per l&#39;imaging epifluorescenza gli esperimenti devono essere eseguiti in una stanza buia. <ol><li> L&#39;animale viene trasferito alla fase di un microscopio intravitale epifluorescenza dotato di un LED 470 nm sorgente luminosa per epi-illuminazione. Utilizzare un obiettivo ad immersione in acqua (20 × / 1,0) per ottenere un ingrandimento di circa 800 ×. Osservazioni record mediante una fotocamera digitale ad alta risoluzione e conservare dati su un personal computer per la valutazione in linea. </li><li> Per l&#39;etichettatura dei leucociti, iniettare rodamina6G via endovenosa attraverso il catetere giugulare a concentrazioni di 0,4 mg / kg di peso corporeo. </li><li> Scegli un venule postcapillari per l&#39;osservazione. Dimensioni delle navi deve essere compresa tra 20-60 micron e il flusso sanguigno dovrebbe essere sufficiente. Per ridurre al minimo l&#39;influenza di pre-attivazione del tessuto, in cui solamente navi rotolamento dei leucociti è &lt;20 cells/30 secondo e il numero di cellule aderenti &lt;10 cells/200μm dell&#39;endotelio venulare può essere utilizzato per ulteriori analisi. </li><li> Se possibile, fino a tre venule postcapillari può essere utilizzato per l&#39;osservazione, tuttavia devono essere situati in una corrispondente sezione del tessuto cremasterico non confondere i vasi in punti temporali diversi. </li></ol> 4. Ischemia-riperfusione (IIR) <ol><li> Lasciare tessuto stabilizzare per 30 minuti. </li><li> Eseguire una registrazione di 30 secondi per stabilire i valori basali di rotolamento e l&#39;aderenza dei leucociti. Idealmente, generano in totale tre registrazioni per verificare cellule basalinumeri e per ottenere deviazioni standard. </li><li> Posizionare delicatamente una clip nave Biemer intorno alla fine prossimale del tessuto cremasterico esposto utilizzando la pinza di applicazione. Stasi deve avvenire immediatamente e possono essere visualizzati mediante microscopia in epifluorescenza nella sezione nave osservata. </li><li> Una varietà di andamento nel tempo può essere utilizzato a seconda del livello di danni. Noi applichiamo 30 minuti di tempo di ischemia, come descritto da altri autori. 21-23 Rimuovere la fascetta nave dopo. Lasciare flusso sanguigno di stabilizzarsi per altri 15 minuti. </li><li> Le successive registrazioni di 30 secondi la durata può essere effettuata per tutto il periodo di riperfusione (ad esempio 30 secondi ogni 15 minuti). Salva le registrazioni in digitale per l&#39;analisi offline. </li><li> Per la chiusura del dell&#39;esperimento, il ratto è sacrificati mediante dislocazione cervicale in anestesia sufficiente premendo un corpo contundente come il bordo opaco di una lama forbice alla base del cranio. Con l&#39;altramano, la base della coda viene tirato in fretta, provocando la separazione delle vertebre cervicali dal cranio. </li></ol> 5. Analisi di riproduzione video offline <ol><li> Per l&#39;analisi offline la riproduzione video è utile utilizzare un software che consente la selezione di immagini distinte e l&#39;osservazione della sequenza video al rallentatore. Regolare il contrasto e la luminosità in modo appropriato. Si usa il software fornito dal produttore del microscopio che permette misure di lunghezza e ingrandimento digitale. </li><li> Per la quantificazione di laminazione leucociti, definiscono una linea virtuale che interseca la nave verticale che è coerente in tutti i record. Contare il numero di leucociti colline che passano la linea entro 30 secondi manualmente. </li><li> Per la quantificazione dei leucociti aderenti, definire una sezione a 200 micron nave che sia coerente in tutti i record 23 Contare il numero di leucociti ben visibili che rimangono statici per 30 secondi -. Così defied in quanto aderente 24. </li></ol> 6. Risultati rappresentativi IRI del muscolo cremastere non ha alcun effetto sulla pressione arteriosa media (MAP), la frequenza cardiaca e del pH del sangue Utilizzando la configurazione summenzionata (figura 1), abbiamo studiato la microcircolazione in IRI su un protocollo due ore, ma un tempo di osservazione molto più lungo fino a 6 ore è possibile. Come mostrato in figura 2, IRI del muscolo cremastere non ha effetti significativi sulla circolazione macrohemodynamic ratto come pressione arteriosa media e della frequenza cardiaca rimanere stabile per tutto il periodo dell&#39;inchiesta. Inoltre abbiamo monitorato l&#39;omeostasi da misurazioni frequenti del pH del sangue arterioso che spaziava entro i limiti fisiologici e non ha mostrato significative differenze tra gruppi. IRI induce rotolamento dei leucociti in circolo cremasterico L&#39;interazione leucociti endoteliale è una chiaveevento nel infiammazione acuta. Per mezzo di microscopia intravitale abbiamo trovato un tempo-dipendente aumento del numero di leucociti di laminazione in IRI del muscolo cremastere (Figura 3A) concorde ai dati precedenti 21, 25. Rotolamento montato sopra il tempo di osservazione due ore ad un massimo di 137,63 ± 22,55% del valore basale dopo 120 minuti di riperfusione e quindi raggiunto la significatività statistica rispetto agli animali fittizi azionati (137,63 ± 22,55 vs 99,43 ± 14,04% del valore basale). IRI induce l&#39;adesione dei leucociti in circolo cremasterico Per ulteriore valutazione dei leucociti-endotelio abbiamo analizzato l&#39;adesione dei leucociti in una sezione di 200 micron nave. IRI indotto un aumento del numero di leucociti aderenti notevolmente superati i valori di sham azionato animali dopo 60 minuti (118,33 ± 6,83 vs 96,27 ± 5,78% del valore basale) e ASCE ulteriorended da 120 minuti di riperfusione (Figura 3B). In sintesi, la descritta nel modello in vivo fornisce dati consistenti di acuta attivazione leucocitaria IRI in termini di sopravvivenza degli animali, mentre la circolazione e la stabilità è garantita. <img src="/files/ftp_upload/3973/3973fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Diagramma di flusso A. intravitale prestazioni epifluorescenza in ischemia-riperfusione del muscolo cremastere di ratto. Dopo i preparativi necessari per l&#39;anestesia e il monitoraggio, il muscolo cremastere di ratto è esposto per l&#39;imaging. Record di attivazione dei leucociti sono prese prima e dopo l&#39;ischemia del tessuto. Successiva analisi video è meglio eseguito offline. B. Figura schematica della configurazione proposta intravitale. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3973/3973fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per ingrandire la figura</a> . &lt;p class = &quot;jove_content&quot; fo: keep-together.within-page = &quot;always&quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/3973/3973fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. IRI del muscolo cremastere ha alcun effetto sulla pressione arteriosa media (MAP), la frequenza cardiaca e il pH del sangue. Pressione arteriosa media (A) e frequenza cardiaca (B) sono stati monitorati ogni 30 minuti durante l&#39;esperimento con trasduttore di pressione dopo canulation del diritto carotide. Misurazione del sangue arterioso pH-(C) è stata eseguita dopo 0, 60, e 120 minuti. I valori sono media ± SEM di 6 ratti diverse e andavano sui livelli fisiologici senza significative differenze tra gruppi. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3973/3973fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per ingrandire la figura</a> . <img src="/files/ftp_upload/3973/3973fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3. IRI aumenta leucociti-Endotelio nella circolazione cremasterico. Dopo etichettatura dei leucociti con rodamina 6G (0,4 mg / kg di peso corporeo) intravitale epifluorescenza è stato utilizzato per determinare leucociti-endotelio in riperfusione tramite un protocollo di 120 minuti dopo 30 minuti di ischemia tessuto. Records sono state prese con un ingrandimento di circa × 800. A. IRI aumenta significativamente il numero di leucociti di laminazione in venule postcapillari del muscolo cremastere da 120 minuti di riperfusione, mentre al rotolamento dei leucociti rimane stabile durante l&#39;esperimento nel tessuto cremasterico che non hanno subito ischemia. I valori sono media ± SEM di 6 topi osservati. # P &lt;0,05 utilizzando il test t spaiato. B. Il numero di leucociti aderenti è significativamente aumentata in uno scelto casualmente sezione 200μm nave postcapillari dopo 30 minuti di ischemia cremasterico e dei successivi 60 minuti di riperfusione tessuto. Risultati da ottenere anche moè pronunciata dopo un periodo di riperfusione due ore. I valori sono media ± SEM di 6 topi osservati. # P &lt;0.05 utilizzando il test t spaiato. Foto C. rappresentativi di una venula postcapillari prima di ischemia (a sinistra) e 120 minuti dopo l&#39;IRI (a destra). <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3973/3973fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per ingrandire la figura</a> .

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Physiol. 275, 212-218 (1998).</li><li>Leoni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflamed+phenotype+of+the+mesenteric+microcirculation+of+melanocortin+type+3+receptor-null+mice+after+ischemia-reperfusion.">Inflamed phenotype of the mesenteric microcirculation of melanocortin type 3 receptor-null mice after ischemia-reperfusion.</a> FASEB J. 22, 4228-4238 (2008).</li><li>Simoncini, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+oestrogen+receptor+with+the+regulatory+subunit+of+phosphatidylinositol-3-OH+kinase.">Interaction of oestrogen receptor with the regulatory subunit of phosphatidylinositol-3-OH kinase.</a> Nature. 407, 538-541 (2000).</li><li>Woollard, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiological+levels+of+soluble+P-selectin+mediate+adhesion+of+leukocytes+to+the+endothelium+through+Mac-1+activation.">Pathophysiological levels of soluble P-selectin mediate adhesion of leukocytes to the endothelium through Mac-1 activation.</a> Circ. Res. 103, 1128-1138 (2008).</li><li>Mori, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-reperfusion+induced+microvascular+responses+in+LDL-receptor+-/-+mice.">Ischemia-reperfusion induced microvascular responses in LDL-receptor -/- mice.</a> Am. J. Physiol. 276, H1647-H1654 (1999).</li><li>Eisenhardt, S. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+Molecular+Changes+Induced+by+Ischemia/Reperfusion+in+Human+Free+Muscle+Flap+Tissue+Samples.">Monitoring Molecular Changes Induced by Ischemia/Reperfusion in Human Free Muscle Flap Tissue Samples.</a> Ann. Plast. Surg. , (2011).</li><li>Eisenhardt, S. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+activation-specific+human+anti-{alpha}M{beta}2+single-chain+antibodies+as+potential+diagnostic+tools+and+therapeutic+agents.">Generation of activation-specific human anti-{alpha}M{beta}2 single-chain antibodies as potential diagnostic tools and therapeutic agents.</a> Blood. 109, 3521-3528 (2007).</li><li>Eisenhardt, S. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissociation+of+pentameric+to+monomeric+C-reactive+protein+on+activated+platelets+localizes+inflammation+to+atherosclerotic+plaques.">Dissociation of pentameric to monomeric C-reactive protein on activated platelets localizes inflammation to atherosclerotic plaques.</a> Circ Res. 105, 128-137 (2009).</li><li>Eisenhardt, S. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-reactive+protein:+how+conformational+changes+influence+inflammatory+properties.">C-reactive protein: how conformational changes influence inflammatory properties.</a> Cell Cycle. 8, 3885-3892 (2009).</li><li>Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Physiology and pathophysiology of leukocyte adhesion. , 520 (1995).</li><li>Baatz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+white+blood+cell+staining+by+intravascular+administration+of+rhodamine+6G.">Kinetics of white blood cell staining by intravascular administration of rhodamine 6G.</a> Int. J. Microcirc. Clin. Exp. 15, 85-91 (1995).</li><li>Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+leukocyte+trafficking+in+blood+vessels+and+tissues.">In vivo imaging of leukocyte trafficking in blood vessels and tissues.</a> Curr. Opin. Immunol. 16, 406-417 (2004).</li><li>Abbitt, K. B., Rainger, G. E., Nash, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+fluorescent+dyes+on+selectin+and+integrin-mediated+stages+of+adhesion+and+migration+of+flowing+leukocytes.">Effects of fluorescent dyes on selectin and integrin-mediated stages of adhesion and migration of flowing leukocytes.</a> J. Immunol. Methods. 239, 109-119 (2000).</li></ol>

Non ci sono conflitti di interesse dichiarati.

Leucociti-endotelio, la produzione di specie reattive dell&#39;ossigeno e l&#39;attivazione del sistema del complemento sono le caratteristiche principali di IRI indotta disfunzione tessuto. 26 La microcircolazione del tessuto colpito è considerato come il sito integrale per l&#39;insorgenza infiammatoria. A parte gli esperimenti ex vivo come test camera di flusso 27, 28, è obbligatorio fornire consolidati modelli di imaging intravitale di valutare ulteriormente la rilevanza in vivo....

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del prodotto: </td><td> Società: </td><td> N. di catalogo: </td><td> Commenti: </td></tr><tr><td> Forene 100% (V / V) </td><td> Abate </td><td> B506 </td><td> API isoflurane </td></tr><tr><td> Terylene sutura </td><td> Serag Weissner </td><td> OC108000 </td><td></td></tr><tr><td> Portex Belle Bore tubi in polietilene </td><td> Smiths Medical </td><td> 800/100/100 </td><td> 0,28 mm diametro interno </td></tr><tr><td> 0,9% soluzione salina </td><td> Fresinus Kabi </td><td> 808771 </td><td></td></tr><tr><td> Change-A-tip deluxe kit cautery </td><td> Bovie Medical </td><td> Del1 </td><td></td></tr><tr><td> Abbocath-T 14G </td><td> Venisystems </td><td> G713- A01 </td><td> utilizzato come tubo lente </td></tr><tr><td> Servo Ventilatore 900C </td><td> Maquet </td><td></td><td> utilizzati come ventialtor animale </td></tr><tr><td> Trasduttore di pressione Logical </td><td> Smiths Medical </td><td> MX1960 </td><td></td></tr><tr><td> Sirecust 404 Monitor </td><td> Siemens </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ABL 700 da banco Analyzer </td><td> Radiometro </td><td></td><td> per la misurazione del gas sangue </td></tr><tr><td> Riscaldamento pad </td><td> Effenberger </td><td> 8319 </td><td></td></tr><tr><td> Alluminio stage </td><td> ALFUN </td><td> AW7022 </td><td></td></tr><tr><td> Chirurgica microscopio OPMI 6-SDFC </td><td> Carl Zeiss </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Microchirurgica strumenti di laboratorio set </td><td> S &amp; T </td><td> 767 </td><td></td></tr><tr><td> Biemer nave Clip </td><td> Diener </td><td> 64,562 </td><td></td></tr><tr><td> L&#39;applicazione di forcipe </td><td> Diener </td><td> 64,568 </td><td> per clip nave Biemer </td></tr><tr><td> Rodamina 6G </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> R4127 </td><td></td></tr><tr><td> Vaselina bianca DAB </td><td> Winthrop </td><td> 2726853 </td><td></td></tr><tr><td> Coprire gli occhiali </td><td></td><td></td><td> 32x32 millimetri </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Installazione intravitale </td></tr><tr><td> Zeis Axio Scope A-1 MAT </td><td> Carl Zeis </td><td> 490036 </td><td> microscopio a epifluorescenza </td></tr><tr><td> 470 nm LED </td><td> Carl Zeis </td><td> 423052 </td><td> fluorescenza sorgente luminosa </td></tr><tr><td> Colibri 2 Sistema </td><td> Carl Zeis </td><td> 423052 </td><td></td></tr><tr><td> W Plan-Apochromat 20x / 1,0 DIC </td><td> Carl Zeis </td><td> 421452 </td><td> immersione in acqua obiettivo </td></tr><tr><td> AxioCam MRm Rev. 3 FireWire </td><td> Carl Zeis </td><td> 426509 </td><td> fotocamera digitale ad alta risoluzione </td></tr><tr><td> Axio LE vision software </td><td> Carl Zeis </td><td> 410130 </td><td> utilizzare per l&#39;analisi offline </td></tr></tbody></table>

real-time digital imaging of leukocyte-endothelial interaction in ischemia-reperfusion injury (iri) of the rat cremaster muscle

L&#39;ischemia-riperfusione (IRI) è stata implicata in una vasta gamma di condizioni patologiche come ictus cerebrale, infarto del miocardio, ischemia intestinale così come a seguito di trapianto e chirurgia cardiovascolare. 1 riperfusione di tessuto precedentemente ischemico, mentre essenziale per la prevenzione di irreversibile lesione dei tessuti, provoca infiammazione eccessiva del tessuto colpito. Adiacente alla produzione di specie reattive dell&#39;ossigeno, l&#39;attivazione del sistema del complemento e aumento della permeabilità microvascolare, l&#39;attivazione di leucociti è uno degli attori principali nella cascata patologica del danno tissutale infiammatorio durante la riperfusione. 2, 3 attivazione dei leucociti è un processo multifasico che consiste di laminazione, adesione e la ferma ed è mediata da una complessa interazione tra molecole di adesione in risposta a fattori chemiotattici quali fattori del complemento, chemochine, o fattore attivante le piastrine 4. &lt;p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Mentre rolling leucociti in venule postcapillari è mediato principalmente dall&#39;interazione di selectine 5 con loro ligandi contatore, ferma adesione dei leucociti all&#39;endotelio selectina è controllato tramite legame a molecole di adesione intercellulare (ICAM) e vascolare cellulari molecole di adesione (VCAM) 6, 7. Gold standard per l&#39;osservazione in vivo di leucociti-endotelio è la tecnica della microscopia intravitale, descritta per la prima nel 1968 8. Benché vari modelli di IRI (ischemia-riperfusione) sono stati descritti per vari organi, 9-12 solo pochi sono adatti per la visualizzazione diretta del reclutamento di leucociti nel microcircolo a un alto livello di qualità dell&#39;immagine. 8 Abbiamo qui promuovere la microscopia digitale intravitale epifluorescenza del venule postcapillari del microcircolo cremastericodel ratto 13 come un metodo conveniente per analizzare qualitativamente e quantitativamente il reclutamento dei leucociti per la ricerca IRI-nel tessuto muscolare striato e fornire un manuale dettagliato per realizzare la tecnica. Abbiamo inoltre illustrare le insidie ​​più comuni e fornire consigli utili che dovrebbe consentire al lettore di apprezzare veramente, e sicuro di eseguire il metodo. In un passo dal protocollo passo che raffigurano come iniziare con l&#39;anestesia respirazione controllata sotto il controllo sufficiente a mantenere l&#39;animale saldamente anestetizzato per lunghi periodi di tempo. Abbiamo poi descrivere la preparazione cremasterico come un sottile foglio appartamento in eccellente risoluzione ottica e fornisce un protocollo per l&#39;imaging dei leucociti in IRI che è stato ben stabilito nei nostri laboratori.

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Real-time Digital Imaging of Leukocyte-endothelial Interaction in Ischemia-reperfusion Injury IRI of the Rat Cremaster Muscle

Digital microscopia intravitale epifluorescenza delle venule postcapillari nella microcircolazione cremasterico è un metodo comodo per acquisire conoscenze in leucociti-endotelio<em&gt; In vivo</em&gt; In ischemia-riperfusione (IRI) del tessuto muscolare striato. Noi qui forniamo un protocollo dettagliato per eseguire in sicurezza la tecnica e discutere le sue applicazioni e limitazioni.

In tempo reale Imaging digitale di leucociti-endotelio in ischemia-riperfusione (IRI) del muscolo Cremaster Rat

Ischemia-reperfusion injury (IRI) has been implicated in a large array of pathological conditions such as cerebral stroke, myocardial infarction, ...

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Real-time Digital Imaging of Leukocyte-endothelial Interaction in Ischemia-reperfusion Injury (IRI) of the Rat Cremaster Muscle

15.0K Views.  University of Freiburg Medical Centre. Digital microscopia intravitale epifluorescenza delle venule postcapillari nella microcircolazione cremasterico è un metodo comodo per acquisire conoscenze in leucociti-endotelio In vivo In ischemia-riperfusione (IRI) del tessuto muscolare striato. Noi qui forniamo un protocollo dettagliato per eseguire in sicurezza la tecnica e discutere le sue applicazioni e limitazioni.

Video: Real-time Digital Imaging of Leukocyte-endothelial Interaction in Ischemia-reperfusion Injury IRI of the Rat Cremaster Muscle

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite tissue. Ischemia reperfusion injury (IRI) is a known cause of partial free flap failure and has no effective treatment. Establishing a laboratory model of this injury can prove costly both financially as larger mammals are conventionally used and in the expertise required by the technical difficulty of these procedures typically requires employing an experienced microsurgeon. This publication and video demonstrate the effective use of a model of IRI in rats which does not require microsurgical expertise. This procedure is an in situ model of a transverse abdominis myocutaneous (TRAM) flap where atraumatic clamps are utilized to reproduce the ischemia-reperfusion injury associated with this surgery. A laser Doppler Imaging (LDI) scanner is employed to assess flap perfusion and the image processing software, Image J to assess percentage area skin survival as a primary outcome measure of injury.

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

Free tissue transfer is widely employed in reconstructive surgery to restore form and function following oncological resection and trauma. Preconditioning this tissue prior to surgery may improve outcome. This article describes an in situ transverse rectus abdominis myocutaneous flap (TRAM) in rats as a means for testing preconditioning strategies.

In situ trasversale retto addominale miocutaneo Flap: un modello di ratto di miocutaneo ischemia riperfusione

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite ...

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Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often unreported mortality rates that may confound analyses. Bilateral renal pedicle clamping is commonly used to induce IR-AKI, but differences between effective clamp pressures and/or renal responses to ischemia between kidneys often lead to more variable results. In addition, shorter clamp times are known to induce more variable tubular injury, and while mice undergoing bilateral injury with longer clamp times develop more consistent tubular injury, they often die within the first 3 days after injury due to severe renal insufficiency. To improve post-injury survival and obtain more consistent and predictable results, we have developed two models of unilateral ischemia-reperfusion injury followed by contralateral nephrectomy. Both surgeries are performed using a dorsal approach, reducing surgical stress resulting from ventral laparotomy, commonly used for mouse IR-AKI surgeries. For induction of moderate injury BALB/c mice undergo unilateral clamping of the renal pedicle for 26 min and also undergo simultaneous contralateral nephrectomy. Using this approach, 50-60% of mice develop moderate AKI 24 hr after injury but 90-100% of mice survive. To induce more severe AKI, BALB/c mice undergo renal pedicle clamping for 30 min followed by contralateral nephrectomy 8 days after injury. This allows functional assessment of renal recovery after injury with 90-100% survival. Early post-injury tubular damage as well as post injury fibrosis are highly consistent using this model.

We describe models of moderate and severe ischemia-reperfusion-induced kidney injury in which the mice undergo unilateral renal pedicle clamping followed by simultaneous or delayed contralateral nephrectomy, respectively. These models consistently give rise to renal dysfunction and post-injury fibrosis, but injury severity and survival are dependent on mouse background, age and surgical equipment.

Ischemia-riperfusione Modello di danno renale acuta e post Infortunio fibrosi nei topi

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for myocardial infarction and cardiac complications of thoracic surgery. The ability of certain drugs to precondition the myocardium against ischemia reperfusion injury has led to multiple clinical trials, with little success. The isolated heart model allows acute observation of the functional effects of ischemia reperfusion injury in real time, including the effects of various pharmacological interventions administered at any time-point before or within the ischemia-reperfusion injury window. Since brief periods of ischemia can precondition the heart against ischemic injury, in situ aortic cannulation is performed to allow for functional assessment of non-preconditioned myocardium. A saline filled balloon is placed into the left ventricle to allow for real-time measurement of pressure generation. Ischemic injury is simulated by the cessation of perfusion buffer flow, followed by reperfusion. The duration of both ischemia and reperfusion can be modulated to examine biochemical events at any given time-point. Although the Langendorff isolated heart model does not allow for the consideration of systemic events affecting ischemia and reperfusion, it is an excellent model for the examination of acute functional and biochemical events within the window of ischemia reperfusion injury as well as the effect of pharmacological intervention on cardiac pre- and postconditioning. The goal of this protocol is to demonstrate how to perform in situ aortic cannulation and heart excision followed by ischemia/reperfusion injury in the Langendorff model.

The isolated rat heart is an enduring model for ischemia reperfusion injury. Here, we describe the process of harvesting the beating heart from a rat via in situ aortic cannulation, Langendorff perfusion of the heart, simulated ischemia-reperfusion injury, and infarct staining to confirm the extent of ischemic insult.

Induzione e valutazione di ischemia-riperfusione Injury in Langendorff-perfusi Hearts Rat

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Modello murino di ischemia-riperfusione intestinale Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent re-oxygenation of the tissues (reperfusion). In the skin, ischemia-reperfusion (IR) is the main contributing factor to the pathophysiology of pressure ulcers. While the cascade of events leading up to the inflammatory response has been well studied, the spatial and temporal responses of the different subsets of immune cells to an IR injury are not well understood. Existing models of IR using the clamping technique on the skin flank are highly invasive and unsuitable for studying immune responses to injury, while similar non-invasive magnet clamping studies in the skin flank are less-than-ideal for intravital imaging studies. In this protocol, we describe a robust model of non-invasive IR developed on mouse ear skin, where we aim to visualize in real-time the cellular response of immune cells after reperfusion via multiphoton intravital imaging (MP-IVM).

This protocol describes the induction of an ischemia-reperfusion (IR) model on mouse ear skin using magnet clamping. Using a custom-built intravital imaging model, we study in vivo inflammatory responses post-reperfusion. The rationale behind the development of this technique is to extend the understanding of how leukocytes respond to skin IR injury.

Inducendo ischemia-riperfusione lesioni in Ear pelle mouse per intravitale Multiphoton Imaging delle risposte immunitarie

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via recanalization of the coronary artery is the most effective strategy for reducing the size of ischemic myocardium. The coronary microvasculature cannot be visualized and imaged&#160;in vivo, but there are several invasive and noninvasive techniques that can be used to assess parameters which depend directly on coronary microvascular function. The endothelial function after ischemia reperfusion can be assessed also at the level of the coronary circulation via the coronary flow reserve (CFR).&#160;In this study, peak velocity of left anterior descending (LAD) coronary arteries was measured in rats in vivo via Transthoracic Doppler Echocardiography during resting and stress challenge (induced by Dobutamine). A normal heart can increase its coronary blood flow up to four times above the resting values during stress induction. Following ischemia reperfusion, we found a significantly diminished CFR, which can be used as a marker of coronary microvascular dysfunction. CFR has opened a window on the importance of microvascular dysfunction and has been shown to predict cardiovascular risk independent of whether the severe obstructive disease is present.

Coronary flow reserve (CFR), is defined as the ratio of maximal coronary blood flow to the resting coronary blood flow. We present a protocol for evaluating CFR in rats via ultrasound, which offers the opportunity to predict cardiovascular risk factors in the absence of obstructive coronary disease.

Valutazione della riserva del flusso coronario dopo la miaocardia Ischemia Reperfusione nei ratti

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many areas of biomedical research due to its cost-effectiveness and its translation to humans. This protocol describes a method to create a preclinical free skin flap model in rats with ischemia-reperfusion injury. The described 3 cm x 6 cm rat free skin flap model is easily obtained after the placement of several vascular ligatures and the section of the vascular pedicle. Then, 8 h after the ischemic insult and completion of the microsurgical anastomosis, the free skin flap develops the tissue damage. These ischemia-reperfusion injury-related damages can be studied in this model, making it a suitable model for evaluating therapeutic agents to address this pathophysiological process. Furthermore, two main monitoring techniques are described in the protocol for the assessment of this animal model: transit-time ultrasound technology and laser speckle contrast analysis.

Here, we describe a pre-clinical animal model for studying the pathophysiology of ischemia-reperfusion injury in reconstructive microsurgery. This free skin flap model based on the superficial caudal epigastric vessels in the rat may also allow for the evaluation of different therapies and compounds to counteract ischemia-reperfusion injury-related damage.

Un modello di ratto preclinico per lo studio delle lesioni ischemia-reperfusione in microchirurgia ricostruttiva

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, cardiac stem cell therapy is studied by delivering SCs concurrently with the induction of myocardial injury. However, this approach presents two significant limitations: the early hostile pro-inflammatory ischemic environment may affect the survival of transplanted SCs, and it does not represent the subacute infarction scenario where SCs will likely be used. Here we describe a two-part series of surgical procedures for the induction of ischemia-reperfusion injury and delivery of mesenchymal stem cells (MSCs). This method of stem cell administration may allow for the longer viability and retention around damaged tissue by circumventing the initial immune response. A model of ischemia reperfusion injury was induced in mice accompanied by the delivery of mesenchymal stem cells (3.0 x 105), stably expressing the reporter gene firefly luciferase under the constitutively expressed CMV promoter, intramyocardially 7 days later. The animals were imaged via ultrasound and bioluminescent imaging for confirmation of injury and injection of cells, respectively. Importantly, there was no added complication rate when performing this two-procedure approach for SC delivery. This method of stem cell administration, collectively with the utilization of state-of-the-art reporter genes, may allow for the in vivo study of viability and retention of transplanted SCs in a situation of chronic ischemia commonly seen clinically, while also circumventing the initial pro-inflammatory response. In summary, we established a protocol for the delayed delivery of stem cells into the myocardium, which can be used as a potential new approach in promoting regeneration of the damaged tissue.

Stems cells are continuously investigated as potential treatments for individuals with myocardial damage, however, their decreased viability and retention within injured tissue can impact their long-term efficacy. In this manuscript we describe an alternative method for stem cell delivery in a murine model of ischemia reperfusion injury.

Consegna intramiocardica ritardata di cellule staminali dopo l'infortunio di ricottamento ischemia in un modello Murine

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, including ischemia-reperfusion injury (IRI) of extrahepatic organs. This model requires numerous experiments and devices. The duration of anhepatic phase is closely related to the time to develop IRI after transplantation. In this experiment, we used hemodynamic changes to induce extrahepatic organ damage in rats and determined the maximum tolerance time. The time until the most severe organ injury varied for different organs. This method can easily be replicated and can also be used to study IRI of the extrahepatic organs after liver transplantation.

This paper provides a detailed description of how to build an animal model of the anhepatic phase (liver ischemia) in rats to facilitate basic research into ischemia-reperfusion injury after liver transplantation.

Lesione da ischemia-riperfusione dell'organo simulando cambiamenti emodinamici nel modello di trapianto di fegato di ratto

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...

Real-Time Assessment of Spinal Cord Microperfusion in a Porcine Model of Ischemia/Reperfusion

Spinal cord injury is a devastating complication of aortic repair. Despite developments for the prevention and treatment of spinal cord injury, its incidence is still considerably high and therefore, influences patient outcome. Microcirculation plays a key role in tissue perfusion and oxygen supply and is often dissociated from macrohemodynamics. Thus, direct evaluation of spinal cord microcirculation is essential for the development of microcirculation-targeted therapies and the evaluation of existing approaches in regard to spinal cord microcirculation. However, most of the methods do not provide real-time assessment of spinal cord microcirculation. The aim of this study is to describe a standardized protocol for real-time spinal cord microcirculatory evaluation using laser-Doppler needle probes directly inserted in the spinal cord. We used a porcine model of ischemia/reperfusion to induce deterioration of the spinal cord microcirculation. In addition, a fluorescent microsphere injection technique was used. Initially, animals were anesthetized and mechanically ventilated. Thereafter, laser-Doppler needle probe insertion was performed, followed by the placement of cerebrospinal fluid drainage. A median sternotomy was performed for exposure of the descending aorta to perform aortic cross-clamping. Ischemia/reperfusion was induced by supra-celiac aortic cross-clamping for a total of 48 min, followed by reperfusion and hemodynamic stabilization. Laser-Doppler Flux was performed in parallel with macrohemodynamic evaluation. In addition, automated cerebrospinal fluid drainage was used to maintain a stable cerebrospinal pressure. After completion of the protocol, animals were sacrificed, and the spinal cord was harvested for histopathological and microsphere analysis. The protocol reveals the feasibility of spinal cord microperfusion measurements using laser-Doppler probes and shows a marked decrease during ischemia as well as recovery after reperfusion. Results showed comparable behavior to fluorescent microsphere evaluation. In conclusion, this new protocol might provide a useful large animal model for future studies using real-time spinal cord microperfusion assessment in ischemia/reperfusion conditions.

Spinal cord microcirculation plays a pivotal role in spinal cord injury. Most methods do not allow real-time assessment of spinal cord microcirculation, which is essential for the development of microcirculation-targeted therapies. Here, we propose a protocol using Laser-Doppler-Flow Needle probes in a large animal model of ischemia/reperfusion.

Valutazione in tempo reale della microperfusione del midollo spinale in un modello suino di ischemia/riperfusione

Spinal cord injury is a devastating complication of aortic repair. Despite developments for the prevention and treatment of spinal cord injury, its ...