Lesione da ischemia-riperfusione dell'organo simulando cambiamenti emodinamici nel modello di trapianto di fegato di ratto. La lesione da ischemia-riperfusione è un'applicazione comune dopo il trapianto di fegato. I pazienti con coinvolgimento di organi extraepatici tendono a rimanere più a lungo in ospedale, trascorrono di più e hanno una prognosi peggiore.
Lo sviluppo della complicazione è strettamente correlato alla durata della fase anepatica del trapianto di fegato. Tuttavia, la ricerca di base sulla lesione da ischemia-riperfusione dopo il trapianto di fegato ha dimostrato che il tasso di sopravvivenza dopo il trapianto di fegato è inversamente correlato al grado di lesione agli organi extrahaptici. Sulla base della definizione della fase anhaptica, abbiamo simulato il cambiamento emodinamico nel trapianto di fegato con conseguente lesione ischemia-riperfusione degli organi extrahaptici.
Di questo documento è quello di fornire una descrizione dettagliata di come costruire un modello animale della fase anhaptica nei ratti, ricerca di base sulla lesione da ischemia-riperfusione dopo il trapianto di fegato. Il dottor Yuan Yuan è responsabile di tutte le operazioni video sugli animali. Due pinze oftalmiche, dritte e pieganti, e lente interocolare, pinze IOL, forbici oftalmiche, retrattili da uno a due, tamponi di cotone, suture chirurgiche 3-0, garza iodoforme, aghi di sutura, biosistemi quando necessario e lente interocolare, pinze IOL vengono utilizzate per separare i vasi sanguigni a causa delle teste rotonde.
Macchina per anestesia animale, macchina di de-irrigazione, macchina incorporante, affettatrice patologica, macchina congelata, affettatrice di tessuto, forno ad essiccazione ad aria, microscopio ottico neurale, scanner, enflurane per anestesia generale, soluzione di paraformaldeide al 4%, etanolo idratato, xilene, cera di paraffina ad alta efficienza, soluzione colorante ematossilina-eosina, acido cloridrico, ammoniaca, scivolo, vetro di copertura, gomma neutra e reagenti morenti e materiali consumabili. Pipette, centrifuga, analizzatore biochimico automatico, alanina aminotransferasi, kit ALT, aspartato, ammino transferasi, kit AST, kit creatinina. Dopo la pesatura, i ratti vengono anestetizzati con isoflurane da una macchina per anestesia animale.
Dopo la disinfezione addominale, fare un'incisione mediana di tre centimetri sotto il processo xifoide usando forcep e forbici. Aprire la cavità addominale, esporre il fegato usando un riavvolgitore e mobilitare il legamento epatogastrico. Utilizzare tamponi di cotone per capovolgere delicatamente il lobo centrale del fegato e girarlo verso l'alto per esporre la porta habitis.
Identificare il condotto biliare, la vena portale e l'arteria epatica. Spingere l'intestino tenue verso la cavità addominale inferiore sinistra utilizzando scambi di cotone e spostare la vena cava inferiore sulla vena renale destra, isolare la vena porta, l'arteria epatica e la vena cava inferiore sopra la vena renale destra con una lente intraoculare, IOL, forcep contrassegnate con 3-0 filo di seta ciascuna con un nodo di slittamento. Tagliare la pelle degli arti inferiori sinistro e destro ed esporre la vena femorale usando flesse oftalmiche.
Iniettare lentamente eparina a basso peso molecolare 625 UI/kg attraverso la vena femorale per eparinare tutto il corpo. Legare la vena porta, l'arteria epatica e la vena cava inferiore sopra la vena renale destra con suture numero 3-0, della durata di 45 minuti. Sostituire l'intestino tenue nella cavità addominale e coprirlo con una garza.
L'anestesia per inalazione è ridotta durante questi periodi. Dopo 45 minuti, rilasciare la vena portale, l'arteria epatica e la vena cava inferiore sopra la vena renale destra. Suturare il muscolo e la pelle strato per strato e terminare l'anestesia inalatoria.
Fornire analgesia post-operatoria utilizzando morfina sottocutanea di 5 mg/kg ogni quattro ore Osservare il ratto fino a quando non è sveglio e tenersi alimentato a una temperatura di 25 più o meno due gradi Celsius e l'umidità di 50 più o meno 10% Lampade per il riscaldamento degli animali è necessaria. In questo modello animale, i ratti sono stati divisi casualmente in cinque gruppi secondo l'ischemia per 15 minuti, I 15 gruppo, 30 minuti, I 30 gruppo, 45 minuti, I 45 gruppo, 60 minuti, I 60 e un gruppo fittizio con 10 ratti in ogni gruppo. Il loro tasso di sopravvivenza di ogni gruppo è stato osservato 14 giorni dopo l'operazione.
Tutti i ratti sopravvissero nei gruppi I 15, I 30 e Sham. Otto sopravvissero per 14 giorni nel gruppo I 45 e solo due sopravvissero nel gruppo I 60. I risultati suggerirono che i ratti potevano tollerare la fase anepatica per al massimo 45 minuti.
Durante l'esperimento, Biosystems è stato utilizzato per registrare i cambiamenti della frequenza cardiaca e della pressione sanguigna, l'intubazione dell'arteria carotide interna destra prima e dopo la fase anepatica. Abbiamo scoperto che la frequenza cardiaca e la pressione arteriosa media, MAP dei ratti, sono cambiate drasticamente dopo la legatura vascolare. Dopo la legazione, l'ischemia epatica, la congestione e l'edema nell'intestino, le varici gastriche e la splenomegaly erano evidenti.
80 ratti sono stati divisi casualmente in otto gruppi tra cui ischemia per 45 minuti, T0, riperfusione per sei ore, T6, 12 ore, T12, 24 ore, T24, 48 ore, T48, 72 ore, T72, sette giorni, T7, in 14 giorni, T14, rispettivamente. Il rene, il pancreas, l'intestino tenue, il cuore e i tessuti polmonari sono stati presi e macchiati con HE dopo che i ratti sono stati sacrificati. Ad eccezione del cuore, i punteggi patologici sono stati dati rispettivamente in base ai riferimenti.
I risultati hanno mostrato che il tempo di lesione massima degli organi extraepatici variava. Sono state da sei a 24 ore dopo l'operazione per il pancreas e da 24 a 48 ore per i polmoni. Il tratto intestinale e il rene sono stati feriti più gravemente dopo 45 minuti di ischemia.
Non c'era alcuna anomalia evidente della mucosa intestinale 24 ore dopo l'operazione e i reni si sono ripresi dopo 48 ore. Per quanto riguarda il cuore, con il passare del tempo dopo la riperfusione, la narcosi cellulare miocardica locale, la frammentazione e la dissoluzione cellulare, l'infiltrazione infiammatoria delle cellule e la vasodilatazione e congestione locali sono state trovate nel tessuto da 24 a 48 ore dopo l'operazione. Il siero è stato raccolto e i livelli di ALT, AST, creatinina e amilasi sono stati rilevati da un analizzatore biochimico automatico.
Tutti gli indicatori hanno raggiunto un picco di 24-48 ore, a differenza dei cambiamenti patologici. Sebbene i livelli fossero sostanzialmente normali 48 ore dopo l'operazione, il danno patologico continuava. Per riassumere, il modello nei ratti è semplice e più facile da usare senza microchirurgia e fornisce la base per la ricerca fondamentale della lesione ischemia-riperfusione degli organi extraepatici dopo ischemia epatica.
