Ringraziamo Wendy Chao per il suo supporto nella revisione critica. Questo lavoro è stato sostenuto da Bausch &amp; Lomb vitreoretinica Fellowship (HM), National Eye Institute concessione EY014104 (JWM), la ricerca per prevenire la cecità Foundation (DGV), Fondo per la ricerca oculistica Lions (DGV), e una generosa donazione della famiglia Yeatts (JWM e DGV).

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti in conformità con l&#39;Associazione per la Ricerca in Oftalmologia e Vision Statement per l&#39;uso di animali in Oftalmica e Vision Research, e le linee guida e regolamenti stabiliti dal Massachusetts Eye and Ear Infirmary Comitato Animal Care. 1. Pretrattamento <ol><li> Anestetizzare un 8 settimane di età mouse con un&#39;iniezione intraperitoneale di una miscela di 60 mg / kg di ketamina e 6 mg / kg xilazina. </li><li> Tagliare i baffi. Ciò avviene perché interferiscono con la visualizzazione e il posizionamento dello strumento. </li><li> Dilatare la pupilla con il 5% fenilefrina e dello 0,5% tropicamide. </li><li> Tagliare le ciglia. Questo è anche fatto perché interferiscono con la visualizzazione e il posizionamento dello strumento. </li><li> Applica anestesia topica (0,5% proparacaina cloridrato soluzione oftalmica). </li></ol> 2. Chirurgia sotto il microscopio <ol><li> Impostare il mouse in un pos lateraleition con il naso verso il chirurgo. Un pizzico punta viene eseguito per confermare l&#39;anestesia chirurgica e guanti sterili sono indossato prima di iniziare l&#39;intervento chirurgico. </li><li> Incidere la congiuntiva temporale al limbus posteriore e separare la congiuntiva della sclera. Evitare di penetrare la sclera. Dopo questo passo, afferrare la congiuntiva al limbus con una pinza per controllare l&#39;occhio. </li><li> Effettuare un&#39;incisione sclerale autosigillante con la punta di un ago G 30 con la smussatura rivolta verso l&#39;alto. Fare un tunnel sclerale attraverso la sclera e penetrare la sclera nella coroide (Figura 1). Evitare di penetrare la retina. Se l&#39;emorragia si verifica coroide ed esce attraverso la ferita sclerale, eseguire un astriction con una lancia chirurgica fino a quando le fermate sanguinamento. Questa ferita sclerale sarà auto-sigillato con pressione intraoculare. </li><li> Pungere la cornea con un ago 30 G per ridurre la pressione intraoculare. Utilizzare l&#39;ago parallelo alle diaframma per evitare di ferire l&#39;iride e lente durante entry nella camera anteriore. La pressione intraoculare causerà la ferita di auto-guarnizione. </li><li> Inserire un ago G 33 collegato ad una siringa Hamilton 10 microlitri nello spazio sottoretinico con lo smusso rivolto verso il basso (verso l&#39;occhio interiore), e iniettare 3,5 ml di sodio ialuronato delicatamente per staccare la retina neurosensoriale dal RPE sottostante. Evitare di penetrare la retina con l&#39;ago 33 G perché ialuronato di sodio andrà nello spazio vitreo ma non lo spazio sottoretinico se la retina è penetrato. Inoltre, evitare iniezione rapida perché creerà una lacrima orale, e ialuronato di sodio colerà nella camera anteriore. </li><li> Lasciate che l&#39;umore acqueo fuoriuscire dalla puntura della cornea spingendo la cornea intorno alla puntura corneale con una pinza per regolare la pressione intraoculare. </li><li> Confermare l&#39;assenza di perdite dalla ferita sclerale con una sonda chirurgica. </li><li> Per ridurre il rischio di perdite di ialuronato di sodio, collocare cianoacrilato colla chirurgica sula ferita sclerale. </li><li> Riattaccare la congiuntiva nella posizione originale usando cianoacrilato colla chirurgica. Ciò consentirà di ridurre ulteriormente il rischio di perdite ialuronato di sodio. </li><li> Controllare il fondo con un vetro di copertura e confermare la creazione di un RD bollosa, senza emorragia sottoretinico. </li></ol> 3. Dopo il trattamento <ol><li> Applicare bacitracina pomata antibiotica all&#39;occhio per ridurre il rischio di infezione. </li><li> Tenere il mouse su una piastra elettrica per impedire l&#39;anestesia (miscela di ketamina e xilazina) di causare bassa temperatura corporea successiva alla bassa pressione sanguigna. </li><li> Mettere i topi in gabbia animale dopo si risvegliano dall&#39;anestesia. Monitorare i topi al giorno per complicazioni. Se sorgono complicazioni, eutanasia il mouse come descritto di seguito. </li></ol> 4. Sacrificio <ol><li> Euthanize il topo per dislocazione cervicale dopo iniezione intraperitoneale di 100 mg / kg di sodio pentobarbital e enucleaTe gli occhi appropriati intervalli di tempo per ogni esperimento (non mostrato). Evitare di applicare pressione sugli occhi durante enucleazione perché ialuronato di sodio potrebbe fuoriuscire. RDs bollose dovrebbero essere persistente per almeno 14 giorni. </li></ol>

<ol>
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N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase+Activation+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment.">Caspase Activation in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 1262-1267 (2003).</li><li>Zacks, D. N., Han, Y., Zeng, Y., Swaroop, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Signaling+Pathways+and+Stress-Response+Genes+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment.">Activation of Signaling Pathways and Stress-Response Genes in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 47, 1691-1695 (2006).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cytokine+responses+to+retinal+detachment+in+rats.">Characterization of cytokine responses to retinal detachment in rats.</a> Mol. Vis. 12, 867-878 (2006).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+Necrosis+Factor-Mediates+Photoreceptor+Death+in+a+Rodent+Model+of+Retinal+Detachment.">Tumor Necrosis Factor-Mediates Photoreceptor Death in a Rodent Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. 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G., Miller, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Edaravone,+an+ROS+Scavenger,+Ameliorates+Photoreceptor+Cell+Death+after+Experimental+Retinal+Detachment.">Edaravone, an ROS Scavenger, Ameliorates Photoreceptor Cell Death after Experimental Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3825-3831 (2011).</li><li>Mantopoulos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tauroursodeoxycholic+acid+(TUDCA)+protects+photoreceptors+from+cell+death+after+experimental+retinal+detachment.">Tauroursodeoxycholic acid (TUDCA) protects photoreceptors from cell death after experimental retinal detachment.</a> PLoS One. 6, e24245 (2011).</li><li>Yang, L., Bula, D., Arroyo, J. G., Chen, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventing+retinal+detachment-associated+photoreceptor+cell+loss+in+Bax-deficient+mice.">Preventing retinal detachment-associated photoreceptor cell loss in Bax-deficient mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 648-654 (2004).</li><li>Cebulla, C. M., Ruggeri, M., Murray, T. G., Feuer, W. J., Hernandez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+murine+retinal+detachment+model.">Spectral domain optical coherence tomography in a murine retinal detachment model.</a> Exp. Eye Res. 90, 521-527 (2010).</li><li>Secondi, R., Kong, J., Blonska, A. M., Staurenghi, G., Sparrow, J. 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Il Massachusetts Eye and Ear Infirmary ha un interesse di proprietà in tre brevetti statunitensi diretti verso l&#39;uso di verteporfina. Inoltre, il Massachusetts Eye Ear Infirmary ha interesse di proprietà in alcune domande di brevetto dirette alla distruzione selettiva di sottoretinico neovascolarizzazione coroideale per il trattamento della degenerazione maculare e altri disturbi. Il Massachusetts Eye and Ear Infirmary riceve royalties come risultato di questi brevetti e domande di brevetto e il dottor Miller riceve una quota dello stesso in conformità con la Massachusetts Eye and Policy Ear Infirmary istituzionale di brevetti e procedure, che include disposizioni Royalty-sharing. L&#39;autore, il dottor Joan W. Miller, è un membro del consiglio passato ed ex socio di Alcon, Inc., e attualmente è consulente per Alcon, Imagen Biotech, Inc.; ISIS Pharmaceuticals, Kalvista Pharmaceuticals, Regeneron Pharmaceuticals, Inc e ONL Therapeutics, LLC. Dr. Demetrios G. Vavvas servecome consulente per Roche, Genentech, Kala Pharmaceuticals.

Diversi metodi per la creazione di un modello di RD negli occhi di roditori sono stati segnalati 3-15, 22. La maggior parte di loro utilizzano iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio perché è un materiale viscoso comunemente usato durante la chirurgia intraoculare nell&#39;uomo, e non è associata ad alcuna nota tossicità oculare 1-15. Ialuronato di sodio, piuttosto che normale soluzione salina o soluzione salina tamponata con fosfato (PBS), aumenta la durata del RD. I metodi per l&#39;iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio utilizzare uno dei due approcci: un approccio transvitreal 3-6 o di un approccio transscleral 7-15. Entrambi i metodi vengono eseguite con l&#39;osservazione del fondo. Nell&#39;approccio transvitreal, un iniettore sottoretinico viene introdotto nella cavità vitreale, un retinotomia viene creato nella retina periferica, e il sodio ialuronato viene iniettato nello spazio sottoretinico. In questo metodo, due rotture retiniche sono fatti, che aumenta il rischio di retinal emorragia che potrebbe andare nello spazio sottoretinico. Inoltre, vi è il rischio di lesioni dell&#39;obiettivo quando viene creato il retinotomia. Ci sono diversi metodi modificati per l&#39;approccio transscleral. Nella maggior parte di questi metodi 7-12, dopo riduzione della pressione intraoculare con una puntura camera anteriore, un ago G 30 collegato ad una siringa riempita di ialuronato di sodio è direttamente inserita nello spazio sottoretinico attraverso la congiuntiva, sclera, coroide, e RPE. Il ialuronato di sodio viene quindi iniettato nello spazio sottoretinico. Il rischio di strappo e lente lesioni retiniche con questo metodo transscleral è inferiore che utilizzando l&#39;approccio transvitreal. Tuttavia, il foro praticato nella sclera da un ago 30 G è grande, soprattutto per gli occhi del mouse, e il sodio ialuronato iniettato nello spazio sottoretinico fuoriesce facilmente fuori dall&#39;occhio attraverso la ferita sclerale. Questo porta ad un più basso, RD meno persistente e più morte cellulare dei fotorecettori variabile. Inoltre, se l&#39;emorragia coroideale si verifica inil passo perforazione sclerale, l&#39;emorragia si diffonderà nello spazio sottoretinico perché la pressione intraoculare è stata ridotta prima della iniezione ialuronato sottoretinico. Diversi fattori possono influenzare l&#39;effetto del RD sulla retina distaccata, che comprende sia l&#39;emorragia sottoretinico e l&#39;altezza e la persistenza di RD 16-21. Cellule fotorecettore morte aumenta con l&#39;aumentare dell&#39;altezza del RD 16, 17, e danni alle cellule fotorecettori possono essere più ampia a causa della ridotta diffusione di ossigeno e di nutrienti essenziali dalle coriocapillare con una maggiore RD rispetto a poco RD. Emorragia sottoretinico è anche tossico per le cellule fotorecettrici 18-21; possibili meccanismi di questa tossicità nella retina distaccata comprendono l&#39;ipossia e la distruzione metabolica da emorragia sottoretinico come barriera di diffusione, e neurotossicità diretta indotta da componenti del sangue (come il ferro). Lesioni Lens, che è stato segnalato per avere un effetto protettivo sulla retinacellule gangliari nali 23, possono anche influenzare la morte delle cellule fotorecettori dopo l&#39;induzione di RD. Inoltre, se il sito di entrata ferita non è sigillato, ialuronato di sodio potrebbe fuoriuscire con la manipolazione occhi durante l&#39;enucleazione. Questo può portare alla classificazione errata di un RD come superficiale, che può a sua volta influenzare l&#39;interpretazione dei risultati. Abbiamo modificato il metodo transscleral per l&#39;iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio per aumentare la riproducibilità di RDS e ridurre il tasso di emorragia sottoretinico. La fase critica di questo protocollo è la creazione di un&#39;incisione sclerale autosigillante utilizzando un ago G 30, che impedisce la fuoriuscita di ialuronato di sodio dopo l&#39;iniezione. A differenza dei metodi precedenti, questo protocollo viene eseguita senza l&#39;osservazione del fondo oculare in modo maggiore attenzione è rivolta alla ferita sclerale. Applicazione di colla impedisce anche il sodio ialuronato di fuoriuscire dell&#39;occhio. Nella nostra esperienza, il tasso di emorragia sottoretinico con questo protocollo wsignificativamente inferiore a quella di altri protocolli. Se l&#39;emorragia coroideale si verifica durante la fase di incisione sclerale, uscirà l&#39;occhio attraverso la ferita sclerale perché questo passo è eseguito prima di ridurre la pressione intraoculare. Se l&#39;emorragia coroideale si verifica dopo la riduzione della pressione intraoculare e distacco della retina neurosensoriale, sangue sezionare nello spazio sottoretinico. Abbiamo trovato che questo accada in circa il 5% dei casi in contrasto con circa il 10-20% con le altre tecniche. Questi animali dovrebbero essere esclusi dall&#39;analisi. Questa tecnica può essere utilizzata anche per l&#39;iniezione sottoretinico mediata da vettori di trasferimento genico per colpire le cellule fotorecettrici o RPE 24, 25. Poiché il veicolo tipico (PBS, soluzione salina) per queste iniezioni è significativamente meno viscoso di ialuronato di sodio, tecniche standard sono afflitti da più perdite. La tecnica qui descritta, riducendo tale rischio, rende esperimenti di trasferimento vettore più riproducibile eaffidabile.

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/50660/">Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate</a>. The footnotes were removed from the abstract due to redundancy in the introduction.

Erratum: Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Morte cellulare dei fotorecettori e conseguente diminuzione visiva si verifica quando i fotorecettori sono separati dal sottostante epitelio pigmentato retinico. Separazione fisica dei fotorecettori è visto in vari disturbi della retina, tra cui la degenerazione maculare legata all&#39;età (AMD), corioretinopatia sierosa centrale, retinopatia diabetica e retinopatia della prematurità, nonché rhegmatogenous (cioè causata da una rottura della retina) distacco della retina ( RD). Iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio è un modello ampiamente accettato di creare un RD che porta alla morte cellulare dei fotorecettori, permettono di approfondire la fisiopatologia della degenerazione dei fotorecettori 1-15. Degenerazione dei fotorecettori indotta da sottoretinico iniezione ialuronato di sodio, introdotto nel 2001 7, ha il vantaggio di un corso di tempo ragionevole (giorni o settimane). Tuttavia, può avere un notevole variabilità della perdita dei fotorecettori da animale ad animal a causa di due fattori principali che influenzano la morte cellulare dei fotorecettori dopo RD: 1) l&#39;altezza e la durata della RD, e 2) l&#39;insorgenza di emorragia sottoretinico. C&#39;è una ripida curva di apprendimento tecnico per il metodo che contribuisce ad entrambi i fattori. Aumenti di degenerazione delle cellule fotorecettore con l&#39;altezza del RD, come la distanza tra la epiteliale del pigmento retinico (RPE) livello e fotorecettori aumenta 16-17. Coerentemente con questi rapporti, i nostri esperimenti precedenti hanno mostrato più la morte dei fotorecettori in RDs bollose che RDs poco profonde. E &#39;stato anche riportato che emorragia sottoretinico è tossico per le cellule fotorecettrici e colpisce morte cellulare dei fotorecettori 18-21. Allo stesso modo, abbiamo osservato più fotorecettori morte RDS con emorragia sottoretinico di RDs senza emorragia sottoretinico. Quindi, le tecniche per ridurre al minimo la variabilità devono concentrarsi sul raggiungimento di altezze consistenti di RD evitando emorragia sottoretinico. Il nostro metodo modificato di indurre RD può fare bollosa riproducibile e RD persistente nella stessa posizione dell&#39;occhio con rara presenza di emorragia sottoretinico. Abbiamo eseguito un intervento chirurgico utilizzando un approccio temporale perché è più facile ottenere un campo operatorio più ampio rispetto ad altri siti. Dopo l&#39;incisione congiuntivale, un&#39;incisione sclerale autosigillante è realizzato con un ago G 30. Un tunnel sclerale viene creato, seguita dalla penetrazione sclerale nella coroide. Se l&#39;emorragia della coroide si verifica in questa fase, l&#39;emorragia uscirà l&#39;occhio attraverso la ferita sclerale, e il sanguinamento può essere fermato da astriction con una lancia chirurgico. Una puntura camera anteriore viene quindi eseguita dalla cornea per ridurre la pressione intraoculare. Questo è un passo importante perché l&#39;iniezione sottoretinico da sola porterà ad un aumento della pressione intraoculare con conseguente occlusione dell&#39;arteria retinica e ischemia della retina interna. A 33 G ago collegato ad una siringa Hamilton 10 microlitri viene quindi inserito nello spazio sottoretinico, e 3,5 μ; L ialuronato di sodio è leggermente iniettato per staccare la retina neurosensoriale dal RPE sottostante. A differenza di altri metodi per indurre RD che vengono eseguite sotto osservazione fundus, questa tecnica viene eseguita sotto osservazione diretta. Dal momento che la ferita sclerale è autosigillante, ialuronato di sodio non fuoriesca dopo l&#39;iniezione. Infine, la colla viene messo sulla ferita sclerale, e la congiuntiva viene ricollegato alla sua posizione originale. Questi dura passi riducono anche il rischio di perdite di ialuronato di sodio. L&#39;iniezione di 3,5 ialuronato di sodio microlitri crea RDs riproducibili (il 50% della retina), agli occhi di 8 settimane di età topi. Creazione del autosigillante ferita è il passo più importante nella nostra procedura modificata perché impedisce la ialuronato di sodio iniettato di fuoriuscire dell&#39;occhio, permettendo così bollosa riproducibile e RDs persistenti.

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketaject</td>
 <td>Phoenix</td>
 <td>2010025</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>AnaSed</td>
 <td>LLOYD</td>
 <td>4004821</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5% Phenylephrine / 0.5% Tropicamide</td>
 <td>Massachusetts Eye and Ear Pharmacy</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.5% Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution</td>
 <td>AKORN</td>
 <td>17478-263-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Provics</td>
 <td>Alcon</td>
 <td>8065183085</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Webglue</td>
 <td>Patterson Veterinary</td>
 <td>07-8566128</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td>MG90</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>30G1/2 PrecisionGlide Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>305106</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Weck-Cel Eye Spears</td>
 <td>Beaver-Visitec</td>
 <td>0008685</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 Microliter Syringe</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>7635-01</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>33 gauge, 0.5 inch needle</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>7803-05</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>18x18mm Cover Glass</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>18-548A</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

retinal detachment model in rodents by subretinal injection of sodium hyaluronate

Iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio è un metodo ampiamente accettato di indurre distacco di retina (RD). Tuttavia, l&#39;altezza e la durata della RD o il verificarsi di emorragia sottoretinico possono influenzare la morte delle cellule fotorecettrici nella retina distaccata. Quindi, è vantaggioso creare RDs riproducibili senza emorragia sottoretinico per valutare la morte cellulare dei fotorecettori. Abbiamo modificato un metodo riportato in precedenza per creare bollosa e RDs persistenti in una posizione riproducibile con rara presenza di emorragia sottoretinico. La fase critica di questo metodo modificato è la creazione di una incisione sclerale autosigillante, che può impedire la perdita di ialuronato di sodio dopo l&#39;iniezione nello spazio sottoretinico. Per effettuare l&#39;incisione sclerale autosigillante, un tunnel sclerale viene creato, seguita dalla penetrazione sclerale nella coroide con un ago G 30. Anche se l&#39;emorragia della coroide può verificarsi durante questa fase, astriction con una lancia chirurgico riduce il tasso di orlo della coroideorrhage. Questo metodo permette un modello più riproducibile e affidabile della morte dei fotorecettori in malattie che coinvolgono RD come rhegmatogenous RD, retinopatia della prematurità, retinopatia diabetica, corioretinopatia sierosa centrale, e la degenerazione maculare legata all&#39;età (AMD).

Per valutare la persistenza del RD fatta da questo protocollo, criosezioni sono stati effettuati nei giorni 3, 7, e 14 dopo l&#39;induzione di RD. Sei occhi sono stati usati per ogni punto temporale. Ematossilina ed eosina (HE) colorazione è stato usato per visualizzare le sezioni. Tutte le sezioni mostrato un RD bollosa avvicinando la lente (Figura 2). Un occhio mostrato emorragia sottoretinico il giorno 7. Nessun occhi mostravano segni di infezioni o lesioni lente. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1.jpg" alt="Figura 1" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1highres.jpg" /> Figura 1. Creazione un&#39;incisione sclerale autosigillante. Questo schema mostra un&#39;immagine in sezione trasversale di un occhio normale mouse. La linea rossa indica l&#39;autosigillante incisione sclerale. Un tunnel sclerale seguita dalla penetrazione sclerale nella coroide con un ago G 30 crea un&#39;incisione sclerale autosigillante. Questa ferita scleralesarà auto-sigillato con pressione intraoculare, che può impedire la perdita di ialuronato di sodio dopo l&#39;iniezione nello spazio sottoretinico e raggiungere persistenti distacchi retinici bollose. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2.jpg" alt="Figura 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2highres.jpg" /> Figura 2. Naturalmente il tempo di distacco di retina. Questa foto fundus mostra un distacco di retina bolloso senza emorragia sottoretinico subito dopo l&#39;intervento chirurgico. Criosezioni con ematossilina ed eosina (HE) colorazione spettacolo persistente distacco di retina bolloso senza emorragia sottoretinico attraverso almeno 14 giorni.

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Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Creazione di distacchi di retina sperimentali con un&#39;altezza riproducibile e sostenuto di distacco, e senza emorragia subretinica, è importante per lo studio della fisiopatologia della perdita di cellule fotorecettori della retina nella malattia e valutare possibili interventi terapeutici. Qui riportiamo tale metodo in dettaglio.

Distacco della retina Modello in Roditori da iniezione sottoretinico di ialuronato di sodio

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

retinal-detachment-model-rodents-subretinal-injection-sodium

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Medicine

20.6K Views.  Massachusetts Eye and Ear Infirmary, Harvard Medical School.  Creazione di distacchi di retina sperimentali con un'altezza riproducibile e sostenuto di distacco, e senza emorragia subretinica, è importante per lo studio della fisiopatologia della perdita di cellule fotorecettori della retina nella malattia e valutare possibili interventi terapeutici. Qui riportiamo tale metodo in dettaglio. 

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Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy and stem cell transplantations have become key therapeutic tools for treating blindness resulting from retinal degenerative diseases. Several forms of autologous transplantation for age-related macular degeneration (AMD), such as iris pigment epithelial cell transplantation, have generated encouraging results, and human clinical trials have begun for other forms of gene and stem cell therapies.2 These include RPE65 gene replacement therapy in patients with Leber's congenital amaurosis and an RPE cell transplantation using human embryonic stem (ES) cells in Stargardt's disease.3-4 Now that there are gene therapy vectors and stem cells available for treating patients with retinal diseases, it is important to verify these potential therapies in animal models before applying them in human studies. The mouse has become an important scientific model for testing the therapeutic efficacy of gene therapy vectors and stem cell transplantation in the eye.5-8 In this video article, we present a technique to inject gene therapy vectors or stem cells into the subretinal space of the mouse eye while minimizing damage to the surrounding tissue.

This surgical technique illustrates the injection of gene therapy vectors and stem cells into the subretinal space of the mouse eye.

Iniezione sottoretinico di vettori di terapia genica e cellule staminali nel Eye mouse

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

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Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment epithelium (RPE) cells. RPE provide critical support for photoreceptors and death or dysfunction of RPE cells is characteristic of age-related macular degeneration (AMD), the leading cause of permanent vision loss in people age 55 and older. While no cure for AMD has been identified, implantation of healthy RPE in diseased eyes may prove to be an effective treatment, and large numbers of RPE cells can be readily generated from pluripotent stem cells. Several interesting questions regarding the safety and efficacy of RPE cell delivery can still be examined in animal models, and well-accepted protocols used to inject RPE have been developed. The technique described here has been used by multiple groups in various studies and involves first creating a hole in the eye with a sharp needle. Then a syringe with a blunt needle loaded with cells is inserted through the hole and passed through the vitreous until it gently touches the RPE. Using this injection method, which is relatively simple and requires minimal equipment, we achieve consistent and efficient integration of stem cell-derived RPE cells in between the host RPE that prevents significant amount of photoreceptor degeneration in animal models. While not part of the actual protocol, we also describe how to determine the extent of the trauma induced by the injection, and how to verify that the cells were injected into the subretinal space using in vivo imaging modalities. Finally, the use of this protocol is not limited to RPE cells; it may be used to inject any compound or cell into the subretinal space.

Here we present a community accepted protocol in multimedia format for subretinally injecting a bolus of RPE cells in rats and mice. This approach can be used for determining rescue potentials, safety profiles, and survival capacities of grafted RPE cells upon implantation in animal models of retinal degeneration.

Esecuzione sottoretinico Iniezioni in roditori di agire cellule retiniche epitelio pigmentato in sospensione

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in adults in industrially developed countries. RPE transplantation appears to be a promising therapy, as it may replace dysfunctional RPE, restore its function, and thereby vision.
Here we describe a method for transplanting a cultured RPE monolayer on a scaffold into the subretinal space (SRS) of rabbits. After vitrectomy xenotransplants were delivered into the SRS using a custom made shooter consisting of a 20-gauge metallic nozzle with a polytetrafluoroethylene (PTFE) coated plunger. The current technique evolved in over 150 rabbit surgeries over 6 years. Post-operative follow-up can be obtained using non-invasive and repetitive in vivo imaging such as spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) followed by perfusion-fixed histology.
The method has well-defined steps for easy learning and high success rate. Rabbits are considered a large eye animal model useful in preclinical studies for clinical translation. In this context rabbits are a cost-efficient and perhaps convenient alternative to other large eye animal models.

Retinal pigment epithelium (RPE) replacement strategies and gene-based therapy are considered for several retinal degenerative conditions. For clinical translation, large eye animal models are required to study surgical techniques applicable in patients. Here we present a rabbit model for subretinal surgery geared towards RPE transplantation, which is versatile and cost-efficient.

Un passo per passo protocollo per la chirurgia sottoretinico in Conigli

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Misurazione di contrattilità isometrica dell'arteria mesenterica Mouse con filo Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Studying Left Ventricular Reverse Remodeling by Aortic Debanding in Rodents

To better understand the left ventricular (LV) reverse remodeling (RR), we describe a rodent model wherein, after aortic banding-induced LV remodeling, mice undergo RR upon removal of the aortic constriction. In this paper, we describe a step-by-step procedure to perform a minimally invasive surgical aortic debanding in mice. Echocardiography was subsequently used to assess the degree of cardiac hypertrophy and dysfunction during LV remodeling and RR and to determine the best timing for aortic debanding. At the end of the protocol, terminal hemodynamic evaluation of the cardiac function was conducted, and samples were collected for histological studies. We showed that debanding is associated with surgical survival rates of 70-80%. Moreover, two weeks after debanding, the significant reduction of ventricular afterload triggers the regression of ventricular hypertrophy (~20%) and fibrosis (~26%), recovery of diastolic dysfunction as assessed by the normalization of left ventricular filling and end-diastolic pressures (E/e&#39;&#160;and LVEDP). Aortic debanding is a useful experimental model to study LV RR in rodents. The extent of myocardial recovery is variable between subjects, therefore, mimicking the diversity of RR that occurs in the clinical context, such as aortic valve replacement. We conclude that the aortic banding/debanding model represents a valuable tool to unravel novel insights into the mechanisms of RR, namely the regression of cardiac hypertrophy and the recovery of diastolic dysfunction.

Here we describe a step-by-step protocol of surgical aorta debanding in the well-established mice model of aortic-constriction. This procedure not only allows studying the mechanisms underlying the left ventricular reverse remodeling and regression of hypertrophy but also to test novel therapeutic options that might accelerate myocardial recovery.

Studiare il rimodellamento inverso ventricolare sinistro mediante lo scioglimento aortico nei roditori

To better understand the left ventricular (LV) reverse remodeling (RR), we describe a rodent model wherein, after aortic banding-induced LV remodeling, ...

Osteoarthritis Pain Model Induced by Intra-Articular Injection of Mono-Iodoacetate in Rats

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the pathophysiological changes of human OA. However, as the main symptom in the late stage of OA, pain affects the patients&#39; daily life, and there are not many available models. The mono-iodoacetate (MIA)-induced model is the most widely used OA pain model, mainly used in rodents. MIA is an inhibitor of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, which causes chondrocyte death, cartilage degeneration, osteophyte, and measurable changes in animal behavior. Besides, expression changes of matrix metalloproteinase (MMP) and pro-inflammatory cytokines (IL1 &#946; and TNF &#945;) can be detected in the MIA-induced model. Those changes are consistent with OA pathophysiological conditions in humans, indicating that MIA can induce a measurable and successful OA pain model. This study aims to describe the methodology of intra-articular injection of MIA in rats and discuss the resulting pain-related behaviors and histopathological changes.

This study describes the method of intra-articular injection of mono-iodoacetate in rats and discusses the resulting pain-related behaviors and histopathological changes, which provide references for future applications.

Modello di dolore da osteoartrite indotto dall'iniezione intra-articolare di mono-iodoacetato nei ratti

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR model induction and its readouts in both mice and rats. Retinal neovascularization is induced in OIR by exposing rodent pups either to hyperoxia (mice) or alternating levels of hyperoxia and hypoxia (rats). The primary readouts of these models are the size of neovascular (NV) and avascular (AVA) areas in the retina. This preclinical in vivo model can be used to evaluate the efficacy of potential anti-angiogenic drugs or to address the role of specific genes in the retinal angiogenesis by using genetically manipulated animals. The model has some strain and vendor specific variation in the OIR induction which should be taken into consideration when designing the experiments.

Oxygen-induced retinopathy (OIR) can be used to model ischemic retinal diseases such as retinopathy of prematurity and proliferative diabetic retinopathy and to serve as a model for proof-of-concept studies in evaluating antiangiogenic drugs for neovascular diseases. OIR induces robust and reproducible neovascularization in the retina that can be quantified.

Modello di retinopatia indotta dall'ossigeno per le malattie retiniche ischemiche nei roditori

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...

A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. To investigate pathological mechanisms of retinal ischemia, relevant experimental models need to be developed. Anatomically, a main retinal blood supplying vessel is the ophthalmic artery (OpA) and OpA originates from the internal carotid artery of the common carotid artery (CCA). Thus, disruption of CCA could effectively cause retinal ischemia. Here, we established a mouse model of retinal ischemia by transient bilateral common carotid artery occlusion (tBCCAO) to tie the right CCA with 6-0 silk sutures and to occlude the left CCA transiently for 2 seconds via a clamp, and showed that tBCCAO could induce acute retinal ischemia leading to retinal dysfunction. The current method reduces reliance on surgical instruments by only using surgical needles and a clamp, shortens occlusion time to minimize unexpected animal death, which is often seen in mouse models of middle cerebral artery occlusion, and maintains reproducibility of common retinal ischemic findings. The model can be utilized to investigate the pathophysiology of ischemic retinopathies in mice and further can be used for in vivo drug screening.

Here, we describe a mouse model of retinal ischemia by transient bilateral common carotid artery occlusion using simple sutures and a clamp. This model can be useful for understanding the pathological mechanisms of retinal ischemia caused by cardiovascular abnormalities.

Un modello murino di lesione retinica ischemica indotta dall'occlusione dell'arteria carotide comune transiente

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. ...

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These conditions include retinitis pigmentosa (RP) and advanced forms of age-related macular degeneration (AMD), such as geographic atrophy (GA). Together, these disorders represent a significant proportion of currently untreatable blindness globally. These unmet medical needs have generated heightened academic interest in developing methods of RPE replacement. Among the animal models commonly utilized for preclinical testing of therapeutics, the non-human primate (NHP) is the only animal model that has a macula. As it shares this anatomical similarity with the human eye, the NHP eye is an important and appropriate preclinical animal model for the development of advanced therapy medicinal products (ATMPs) such as RPE cell therapy.
This manuscript describes a method for the submacular transplantation of an RPE monolayer, cultured on a polyethylene terephthalate (PET) cell carrier, underneath the macula onto a surgically created RPE wound in immunosuppressed NHPs. The fovea-the central avascular portion of the macula-is the site of the greatest mechanical weakness during the transplantation. Foveal trauma will occur if the initial subretinal fluid injection generates an excessive force on the retina. Hence, slow injection under perfluorocarbon liquid (PFCL) vitreous tamponade is recommended with a dual-bore subretinal injection cannula at low intraocular pressure (IOP) settings to create a retinal bleb. 
Pretreatment with an intravitreal plasminogen injection to release parafoveal RPE-photoreceptor adhesions is also advised. These combined strategies can reduce the likelihood of foveal tears when compared to conventional techniques. The NHP is a key animal model in the preclinical phase of RPE cell therapy development. This protocol addresses the technical challenges associated with the delivery of RPE cellular therapy in the NHP eye.

The non-human primate (NHP) is an ideal model for studying human retinal cellular therapeutics due to the anatomical and genetic similarities. This manuscript describes a method for submacular transplantation of retinal pigment epithelial cells in the NHP eye and strategies to prevent intraoperative complications associated with macular manipulation.

Trapianto di epitelio pigmentato retinico in un modello di primati non umani per malattie degenerative della retina

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

A Simplified Model for Heterotopic Heart Valve Transplantation in Rodents

There is an urgent clinical need for heart valve replacements that can grow in children. Heart valve transplantation is proposed as a new type of transplant with the potential to deliver durable heart valves capable of somatic growth with no requirement for anticoagulation. However, the immunobiology of heart valve transplants remains unexplored, highlighting the need for animal models to study this new type of transplant. Previous rat models for heterotopic aortic valve transplantation into the abdominal aorta have been described, though they are technically challenging and costly. For addressing this challenge, a renal subcapsular transplant model was developed in rodents as a practical and more straightforward method for studying heart valve transplant immunobiology. In this model, a single aortic valve leaflet is harvested and inserted into the renal subcapsular space. The kidney is easily accessible, and the transplanted tissue is securely contained in a subcapsular space that is well vascularized and can accommodate a variety of tissue sizes. Furthermore, because a single rat can provide three donor aortic leaflets and a single kidney can provide multiple sites for transplanted tissue, fewer rats are required for a given study. Here, the transplantation technique is described, providing a significant step forward in studying the transplant immunology of heart valve transplantation.

This protocol describes a simple and efficient method for the transplantation of aortic valve leaflets under the renal capsule to allow for the study of alloreactivity of heart valves.