Un grazie speciale a Sarah Kossak, Mitchell Guanzon, Sung Yeun Yang e Li Guo Jia, per la loro collaborazione durante la valutazione endoscopica dei loro animali da esperimento.

1. Impostazione del sistema Endoscopia <ol><li> Impostare il sistema di endoscopia prima di anestetizzare i topi, seguendo le istruzioni del produttore. Utilizzare un ureteroscopio video progettato per gli esseri umani di questo protocollo (Figura 1). Il diametro esterno del tubo di inserimento è 9,9 Fr (3,3 mm), la sua estremità distale è 8,5 Fr (2,8 mm), e il diametro interno del canale strumentazione è 6 Fr (1,2 mm). </li><li> Sebbene l&#39;uso di endoscopi non sono stati collegati a trasmissione di malattie [9], sterilizzare l&#39;endoscopio e lente con etanolo al 70% o 10 con tecniche appropriate quando si lavora con microrganismi sporigeni. Preparare batteriostatico lubrificante sterile e non graffiare pulire i tessuti per saturare la punta dell&#39;endoscopio. </li><li> Attaccare una siringa da 3 ml pieno di aria (o una miscela di gas CO 2 adatto) all&#39;inizio del canale strumentazione. </li><li> Accendere l&#39;alimentazione e impostare il bilanciamento del bianco in normale luce bianca,Modalità nonché stretta fascia di imaging (NBI), ove applicabile. Dal 2001, NBI ha fornito prestazioni di diagnostica per immagini, come sottolinea sottili strutture dei vasi sanguigni sulle membrane mucose, tra cui lesioni ulcerative e tumorali, che hanno caratteristiche vascolarizzazione anormale 11. Modalità NBI-filtro limita la lunghezza d&#39;onda della luce catturata a 390-445 nm e 530-550 nm, che mette in luce le strutture con l&#39;emoglobina. </li><li> Stampare il modulo di valutazione di punteggio (Figura 2) per registrare i vostri risultati. Acquisire familiarità con le immagini attesi normali e NBI (Figura 3a) e la definizione e qualità di ogni criterio prima dell&#39;esame (vedi Sezione 6.1). </li><li> Preparare una soluzione basata colorante-on tampone fosfato salino (PBS) per chromoendoscopy, se desiderato. In chromoendoscopy, l&#39;esame viene eseguito utilizzando un colorante come mezzo di contrasto per evidenziare i cambiamenti della mucosa. Usare blu di metilene (0,1-1%) e soluzioni di indaco carminio (0,1%) (Figura 3B). Appuntoblu di metilene che è un agente di ossidazione-riduzione che può produrre radicali ossidanti, reticolazione indiretta di residui amminoacidici, e la degradazione del DNA 12, che potrebbero interferire con l&#39;analisi del campione. </li></ol> 2. Anestesia generale del mouse <ol><li> Scegliere il percorso agente e la somministrazione di anestetici. Consultare un veterinario di una struttura risorsa animale o Istituzionale cura degli animali e del Comitato Usa (IACUC) per quanto riguarda possibili interferenze dei farmaci con il sistema immunitario e gli obiettivi della ricerca. Alcuni farmaci possono influenzare il profilo delle citochine espressione in animali, tra cui roditori 13. Utilizzare tribromoethanol iniettabile per le procedure di terminali o isoflurano per endoscopie sopravvivenza, insieme a controlli appropriati. </li><li> Per l&#39;induzione, somministrare 4-5% di isoflurano in ossigeno al 100% ad una velocità di 0,2-0,5 L / min; utilizzare 0,5-2% per la manutenzione. Questo protocollo non è appropriato per tutti gli animali. Consultare il veterinario strutturaper le istruzioni corrette e la formazione. Rispettare le raccomandazioni pertinenti IACUC per raggiungere i più alti standard di benessere degli animali. Assicurarsi che il mouse, se completamente anestetizzato. </li><li> &#39;Strap&#39; il topo anestetizzato ad un tavolo superficie di appoggio in una dorsale o posizione ventrale con del nastro adesivo di laboratorio. Attenzione l&#39;orientamento anatomico sul vostro schermo endoscopio. Fissare le estremità inferiori e coda. Una banda di nastro può anche essere posizionato sul petto per impedire il movimento lontano dal respiratore, ma evitare di limitare i movimenti respiratori toracici. </li></ol> 3. Dettagliata endoscopica esame <ol><li> Ricerca lesioni perianali prima di inserire l&#39;endoscopio nel retto, poi avanzare la portata attraverso l&#39;ano. </li><li> Cappotto l&#39;endoscopio con lubrificante sterile chirurgica. Assicuratevi di non rivestire la superficie del CCD (dispositivo ad accoppiamento di carica) del sensore. </li><li> Inserire l&#39;endoscopio e avviare la registrazione. I video registrati sono utili per mla valutazione eticulous dell&#39;endoscopia se necessario dopo l&#39;esame. Provare a eseguire l&#39;endoscopia nel minor possibile durata del ridurre al minimo l&#39;irritazione intestinale / mucosa. </li><li> Applicare aria usando una siringa per impostare lentamente a parte le pareti intestinali. A seconda delle dimensioni del mouse, usare 1-2 ml di aria. Evitare l&#39;eccessiva insufflazione di aria, può causare difficoltà respiratorie e la morte del topo anestetizzato. </li><li> Far avanzare l&#39;endoscopio avanti come si cancella il modo con aria o la rotazione dolce del campo di applicazione. Non far avanzare l&#39;endoscopio se non si vede lume intestinale. Perforazioni o lacerazioni rettali / colon possono verificarsi in questa fase, soprattutto in topi giovani (&lt;8-10 settimane di età). Scattare foto come necessario. </li><li> Poiché la portata avanza, valutare se vi è sanguinamento spontaneo (definito come in natura mucosa emorragia non associata a endoscopia traumatico). Sanguinamento spontaneo può osservare come l&#39;endoscopio entra nel retto e del colon. </li><li> ComeSess la trasparenza della parete del colon. La trasparenza è definita come la capacità di visualizzare i vasi sanguigni intramurali nel colon e quella degli altri visceri circostanti (Figura 4). Dolce movimento del campo di applicazione (back-forward, in senso orario, antiorario) contribuirà a determinare se i vasi sanguigni può essere visto nel contesto di altri visceri. Tessuto adiposo mesenterico può anche essere visto. Nota se il retto all&#39;interno della cavità pelvica appare meno trasparente rispetto alla parete del colon nella cavità addominale. </li><li> Controllare per determinare il tipo e il numero di lesioni focali (aree edematose, erosioni, ulcere, masse tumorali). Questo verrà registrato nella forma di punteggio con il punteggio di infiammazione del colon e gli identificatori decimali che sono stati sviluppati. </li><li> Una volta che la zona in cui il colon flette caudalmente nel colon prossimale viene raggiunto, ritirare l&#39;endoscopio lentamente e cercare la presenza di contatto sanguinamento (che si verifica a causa di friabilità della mucosa dopo l&#39;endoscopio è avanzato o rimosso). Non è necessario raschiare la superficie colon intenzionalmente. Healthy mucosa del colon-retto non sanguina dopo un esame endoscopico corretta. </li></ol> 4. Biopsia <ol><li> Quando sono necessarie biopsie, inserire le pinze biopsia attraverso il canale dell&#39;endoscopio dedicato per la strumentazione. Monitorare l&#39;avanzamento della pinza sullo schermo endoscopio per evitare perforazione intestinale. </li><li> Aprire le tazze biopsia della pinza a circa 60-80 ° angolo tazza al bicchiere, e dirigerli verso la zona di interesse. Forcipe o pressione eccessivamente aperti possono comprendere strati supplementari di tessuto intestinale, che si traduce in una perforazione biopsia indotta delle pareti intestinali trasparenti sani. Se si verifica la perforazione, eutanasia dell&#39;animale durante l&#39;anestesia con le raccomandazioni IACUC. Perforazioni comportano dell&#39;endotossemia e peritonite. </li><li> Chiudere le coppe biopsia, e tirarli fuori mantenendo le pinze chiuse. </li><li> Remove il campione dal forcipe dal lavaggio del tessuto con una soluzione che è delicato per il tessuto e le pinze. RNA tardi e PBS sono soluzioni di lavoro comuni, se necessario, utilizzare l&#39;ago per rimuovere il campione. Evitare erodendo le tazze forcep o taglienti. </li></ol> 5. Recupero da anestesia <ol><li> Al termine dell&#39;esame, fornire un ambiente caldo al mouse finché non recupera. Utilizzare una luce elettrica, o un pad calda a 37 ° C. Evitare il surriscaldamento; vasodilatazione periferica compromette il recupero degli animali. Monitorare il mouse vicino fino al completo recupero. </li></ol> 6. Integrato endoscopica Scoring System of Colorectal Salute con decimali identificatori <ol><li> Utilizza il modulo di punteggio (Figura 2) e le definizioni dei parametri sottostanti (valutazione endoscopica del colon-retto murini infiammazione e tumori utilizzo di un sistema di punteggio decimale ponderato: parametri definizioni, e il protocollo) peresempi e opzionale &#39;sistema di punteggio distale-prossimale endoscopica Colite&#39; (D-PECS) come linee guida per la valutazione nonbiased e dettagliata tenuta dei registri. </li><li> Segnare i quattro parametri di infiammazione colorettale descritti nel modulo sistema di punteggio (Figura 2). Meticolosamente valutare la regione perianale, trasparenza intestinale, tipo di sanguinamento intestinale (se presente), e la presenza e la quantità di lesioni focali (erosiva, ulcerativa, e / o tumorale). </li><li> Nel valutare i tumori per scopi di ricerca, di esaminare la quantità, la posizione e le dimensioni, e descriverli utilizzando la mappa del colon e grafico a barre sul modulo di punteggio. La somma numerica dei punteggi ottenuti ed il numero di lesioni (se del caso) determinerà sfondo infiammazione del colon, il tipo più predominante di lesione, e il numero di lesioni. </li></ol>

<ol>
	<li>Huang, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonoscopy+in+mice.">Colonoscopy in mice.</a> Surg. Endosc. 16, 22-24 (2002).</li><li>Wirtz, S., Becker, C., Blumberg, R., Galle, P. R., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+T+cell-dependent+experimental+colitis+in+SCID+mice+by+local+administration+of+an+adenovirus+expressing+IL-18+antisense+mRNA.">Treatment of T cell-dependent experimental colitis in SCID mice by local administration of an adenovirus expressing IL-18 antisense mRNA.</a> J. Immunol. 168, 411-420 (2002).</li><li>Funovics, M. A., Alencar, H., Su, H. S., Khazaie, K., Weissleder, R., Mahmood, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Miniaturized+multichannel+near+infrared+endoscope+for+mouse+imaging.">Miniaturized multichannel near infrared endoscope for mouse imaging.</a> Mol Imaging. 2, 350-357 (2003).</li><li>Becker, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+colitis+and+colon+cancer+development+in+mice+using+high+resolution+chromoendoscopy.">In vivo imaging of colitis and colon cancer development in mice using high resolution chromoendoscopy.</a> Gut. 54, 950-954 (2005).</li><li>Ravnic, D. J., Konerding, M. A., Huss, H. T., Wolloscheck, T., Pratt, J. P., Mentzer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+microvideo+endoscopy+of+the+colonic+microcirculation.">Murine microvideo endoscopy of the colonic microcirculation.</a> J. Surg. Res. 142, 97-103 (2007).</li><li>Hamilton, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+role+for+mast+cell+tryptase+in+acute+experimental+colitis.">Essential role for mast cell tryptase in acute experimental colitis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 290-295 (2011).</li><li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+colonoscopy+in+live+mice.">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat. Protoc. 1, 2900-2904 (2006).</li><li>Hensley, H. H., Merkel, C. E., Chang, W. C., Devarajan, K., Cooper, H. S., Clapper, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoscopic+imaging+and+size+estimation+of+colorectal+adenomas+in+the+multiple+intestinal+neoplasia+mouse.">Endoscopic imaging and size estimation of colorectal adenomas in the multiple intestinal neoplasia mouse.</a> Gastrointest. Endosc. 69, 742-749 (2009).</li><li>Banerjee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+control+during+GI+endoscopy.">Infection control during GI endoscopy.</a> Gastrointest. Endosc. 67, 781-790 (2008).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleaning+and+disinfection+of+equipment+for+gastrointestinal+endoscopy.+Report+of+a+Working.">Cleaning and disinfection of equipment for gastrointestinal endoscopy. Report of a Working.</a> Party of the British Society of Gastroenterology Endoscopy Committee. Gut. 42, 585-593 (1998).</li><li>Sano, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+diagnostic+method+based+on+color+imaging+using+narrow+band+imaging+(NBI)+system+for+gastrointestinal+tract.">New diagnostic method based on color imaging using narrow band imaging (NBI) system for gastrointestinal tract.</a> Gastrointest. Endosc. 53, 125-12 (2001).</li><li>Davies, J., Burke, D., Olliver, J. R., Hardie, L. J., Wild, C. P., Routledge, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methylene+blue+but+not+indigo+carmine+causes+DNA+damage+to+colonocytes+in+vitro+and+in+vivo+at+concentrations+used+in+clinical+chromoendoscopy.">Methylene blue but not indigo carmine causes DNA damage to colonocytes in vitro and in vivo at concentrations used in clinical chromoendoscopy.</a> Gut. 56, 155-156 (2007).</li><li>Chiang, N., Schwab, J. M., Fredman, G., Kasuga, K., Gelman, S., Serhan, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthetics+impact+the+resolution+of+inflammation.">Anesthetics impact the resolution of inflammation.</a> PLoS One. 3, e1879 (2008).</li><li>Zilberman, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+digital+flexible+ureteroscope:+in+vitro+assessment+of+optical+characteristics.">The digital flexible ureteroscope: in vitro assessment of optical characteristics.</a> J. Endourol. 25, 519-522 (2011).</li><li>Machida, H., Sano, Y., Hamamoto, Y., Muto, M., Kozu, T., Tajiri, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Narrow-band+imaging+in+the+diagnosis+of+colorectal+mucosal+lesions:+a+pilot+study.">Narrow-band imaging in the diagnosis of colorectal mucosal lesions: a pilot study.</a> Endoscopy. 36, 1094-1098 (2004).</li><li>Dohoo, I., Martin, W., Stryhn, H., McPike, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cohort+studies.">Cohort studies.</a> Veterinary Epidemiologic Research. , 151-162 (2003).</li><li>Yiou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathophysiology+of+pelvic+floor+disorders:+evidence+from+a+histomorphologic+study+of+the+perineum+and+a+mouse+model+of+rectal+prolapse.">The pathophysiology of pelvic floor disorders: evidence from a histomorphologic study of the perineum and a mouse model of rectal prolapse.</a> J. Anat. 199, 599-607 (2001).</li></ol>

Non finanziaria o conflitto di interessi resi noti.

Ci sono diverse considerazioni per quanto riguarda la modifica e la risoluzione dei problemi della tecnica endoscopica nei topi. Aspetti critici della procedura che deve essere padroneggiato durante l&#39;uso di endoscopia flessibile includono la regolazione del volume d&#39;aria necessario per prevenire distensione addominale e compromissione respiratoria del mouse, e gli aspetti tecnici minori del controllo della vista con il coordinamento dei controlli angolazione e di coppia . Controllo di coppia è importante ridur...

Endoscopia murino è stato eseguito come strumento di ricerca utile per oltre un decennio 1-3. Ad oggi, la maggior parte degli studi che impiegano endoscopia murini hanno utilizzato endoscopi rigidi, anche se alcuni hanno anche utilizzato sigmoidoscopia flessibile. Endoscopia murini offre risultati immediati e una valutazione più oggettiva del grado di normalità intestinale, la gravità dell&#39;infiammazione, e la progressione del tumore rispetto alle misure indirette, come la perdita di peso corporeo, diarrea, e istologia (che è ottimale quando le lesioni sono di leopardo), mentre offrendo approfondimenti sulla salute generale del colon. Più in particolare, l&#39;endoscopia permette di valutare ripetuto di modelli animali di laboratorio nel tempo, al contrario di esame istologico tradizionale che richiede l&#39;animale essere eutanasia e due punti per essere raccolti per analisi 1. Nonostante questi vantaggi, l&#39;uso della tecnologia endoscopica murino non e &#39;stato diffuso ed è limitata dalla mancanza di protocolli standardizzati per implementatisu e il punteggio di reperti patologici. Correttamente attuato, endoscopia murino rappresenta una grande promessa per facilitare ulteriormente la nostra comprensione e caratterizzazione di modelli animali di molteplici stati di malattia croniche gastrointestinali, comprese le malattie infiammatorie croniche intestinali, colite, e tumori del colon-retto. L&#39;utilità della tecnologia endoscopica murino dipende dalla sua riproducibilità e oggettività, che richiede l&#39;esistenza di procedure standardizzate di esame e di un sistema di punteggio consistente, non ridondante, affidabile per patologie intestinali. Almeno tre sistemi di punteggio descrittivi per la valutazione endoscopica di colite 4-6, e anche per i tumori del colon 4,7,8 in topi sono stati pubblicati. Tuttavia, questi approcci segnalati e sistemi di punteggio non sono facilmente comparabili tra gli studi. In molti casi, non esiste una definizione chiara dei criteri utilizzati per la classificazione delle lesioni, e quando i criteri sono indicati, essi variano ampiamente. Inoltre,non esistono sistemi di punteggio riferito che integrano la valutazione sia di colite e tumori, due delle patologie del colon più comuni che possono verificarsi contemporaneamente e avere effetti interattivi sul risultato, in un unico strumento di misurazione. Infine, i sistemi di scoring endoscopici che esistono per la colite hanno spesso categorie infiammatorie con la discriminazione limitati (ad esempio. Opzioni strette di punteggio su scale interi brevi, spesso 1-4) per rappresentare correttamente la malattia scenari progressione e consentire l&#39;uso di analisi statistica parametrica. In questo documento, si descrive l&#39;utilizzo di un endoscopio flessibile per valutare la gravità della colite murina e tumori del colon e descrivere un protocollo standardizzato per impiegare questa tecnologia nella valutazione anatomica della regione perianale, del retto e colon distale. Illustriamo la risoluzione dei problemi efficace durante l&#39;endoscopia per ridurre al minimo trauma e di immagine manufatti, e si descrive un sistema di punteggio riproducibilebasato su parametri clinici pubblicati validate. Il sistema di punteggio integra valutazione sia infiammazione intestinale e tumori con un elevato livello di discriminazione con 12 possibili gradi di infiammazione, mappatura tumore e opzioni di rilevamento, e un sistema di unità decimale romanzo (cioè identificatori decimali) per evidenziare risultati con valore diagnostico specifico ( vale a dire lo sviluppo del tumore, complicazioni durante l&#39;endoscopia, ecc.) L&#39;uso di identificatori decimali consente un rapido monitoraggio dei set di dati rilevanti per ulteriori analisi a valle. Infine, eseguiamo affidabilità e test validità del sistema di punteggio in diversi modelli murini di colite e colite cancro-associata (destrano solfato sodico (DSS)-indotta colite, infezione da Clostridium difficile, e azoxymethane / DSS-indotta cancro del colon).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="696">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Isoflurane, USP</td>
			<td style="width:160px;">Webster Veterinary&#160;</td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">Surgical lubricant</td>
			<td style="width:160px;">Savage laboratories</td>
			<td style="width:217px;">surgilube, 0281-0205-45</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:160px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:217px;">SH30256</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">RNAlater</td>
			<td style="width:160px;">Ambion</td>
			<td style="width:217px;">AM7021</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">Methylene Blue 1% Aqueous Solution</td>
			<td style="width:160px;">Fisher Science Education</td>
			<td style="width:217px;">S96393</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:240px;"></td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Flexible digital ureteroscope</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">URF-V</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Video system center</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">VISERA Pro OTV-S7 Pro</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Xenon light source</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">VISERA Pro CLV-S40 Pro</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Video recorder</td>
			<td style="width:160px;">MediCapture, Inc.</td>
			<td style="width:217px;">MediCap USB200</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Flexible biopsy cup forceps</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">FBC-3115</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Anesthesia machine</td>
			<td style="width:160px;">Euthanex Corporation</td>
			<td style="width:217px;">EZ-7000 Classic System</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

flexible colonoscopy in mice to evaluate the severity of colitis and colorectal tumors using a validated endoscopic scoring system

L&#39;uso della moderna endoscopia per scopi di ricerca ha notevolmente facilitato la nostra comprensione di patologie gastrointestinali. In particolare, l&#39;endoscopia sperimentale è stato molto utile per gli studi che richiedono valutazioni ripetute in un singolo animale da laboratorio, come quelli valutazione dei meccanismi di malattia intestinale infiammatoria cronica e la progressione del tumore colorettale. Tuttavia, i metodi utilizzati negli studi sono molto variabili. Almeno tre sistemi di punteggio endoscopici sono stati pubblicati per la colite murina e pubblicato protocolli per la valutazione dei tumori colorettali non tengono conto della presenza di concomitante infiammazione del colon. Questo studio sviluppa e convalida un sistema riproducibile punteggio endoscopico che integra valutazione sia infiammazione e tumori simultaneamente. Questo nuovo sistema di punteggio ha tre componenti principali: 1) la valutazione della portata e della gravità di infiammazione del colon-retto (basata sui risultati perianali, la trasparenza del wall, sanguinamento delle mucose e lesioni focali), 2) la registrazione quantitativa delle lesioni tumorali (sugli rete e grafico a barre), e 3) ordinamento numerico di casi clinici per la loro rilevanza patologica e la ricerca basata su unità decimali con categorie assegnate delle lesioni osservate e complicanze endoscopiche (identificatori decimali). Il video e manoscritto qui presentati sono stati preparati, seguendo protocolli IACUC approvati, per permettere agli investigatori di segnare i propri topi sperimentali utilizzando una metodologia endoscopica ben validato e altamente riproducibile, con l&#39;opzione di sistema per differenziare distale di colite endoscopico prossimale (D-PECS ).

Il protocollo e le immagini presentate in questo studio sono stati preparati con una Olympus URF-V endoscopio flessibile 14 e NBI 11,15. Le immagini video sono state salvate in formato MPEG-2 e le immagini in formato JPG, TIF, PNG, o in formato DICOM con un massimo di 1.280 x 1.024 pixel, valori di memorie portatili USB flash standard. NBI aumenta il contrasto visivo dei tessuti-emoglobina contiene. Luce normale e di imaging NBI sono caratteristiche fondamentali per illustrare l&#39;anatomia normal...

Watch this Scientific Journal Video about Flexible Colonoscopy in Mice to Evaluate the Severity of Colitis and Colorectal Tumors Using a Validated Endoscopic Scoring System at JoVE.com

Flexible Colonoscopy in Mice to Evaluate the Severity of Colitis and Colorectal Tumors Using a Validated Endoscopic Scoring System

Negli ultimi anni, endoscopi di nuova generazione sono emersi come importanti ausili di ricerca diagnostici per la valutazione colite murina e tumori colorettali. Presentiamo qui un protocollo dettagliato per la valutazione endoscopica di infiammazione e tumori colorettali nei topi, nonché un sistema di punteggio romanzo che utilizza gli identificatori decimali per documentare la gravità endoscopica di colite e tumori colorettali.

La colonscopia flessibile in topi per valutare la gravità della colite e colon-retto Tumori Utilizzo di un sistema Validated endoscopica Scoring

The use of modern endoscopy for research purposes has greatly facilitated our understanding of gastrointestinal pathologies. In particular, experimental ...

flexible-colonoscopy-mice-to-evaluate-severity-colitis-colorectal

Research

JoVE Journal

Medicine

31.5K Views.  Case Western Reserve University School of Medicine, Cleveland.  Negli ultimi anni, endoscopi di nuova generazione sono emersi come importanti ausili di ricerca diagnostici per la valutazione colite murina e tumori colorettali. Presentiamo qui un protocollo dettagliato per la valutazione endoscopica di infiammazione e tumori colorettali nei topi, nonché un sistema di punteggio romanzo che utilizza gli identificatori decimali per documentare la gravità endoscopica di colite e tumori colorettali. 

Video: Flexible Colonoscopy in Mice to Evaluate the Severity of Colitis and Colorectal Tumors Using a Validated Endoscopic Scoring System

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited time. These cultured tumorspheres may exhibit markedly different cellular phenotypes when compared to the original tumors. Demonstration that cultured cells have the capability of forming new tumors is important to ensure that cultured cells model the biology of the original tumor. 
Here we present a protocol for propagating human retinoblastoma tumors in vivo using Rag2-/- immune deficient mice. Cultured human retinoblastoma tumorspheres of low passage or cells obtained from freshly harvested human retinoblastoma tumors injected directly into the vitreous cavity of murine eyes form tumors within 2-4 weeks. These tumors can be harvested and either further passaged into murine eyes in vivo or grown as tumorspheres in vitro. Propagation has been successfully carried out for at least three passages thus establishing a continuing source of human retinoblastoma tissue for further experimentation. 
Wesley S. Bond and Lalita Wadhwa are co-first authors.

A method is described to propagate human retinoblastoma tumors in mice. Tumor cells are directly injected into the eyes of immune deficient mice. Secondary tumors have been successfully established using both cells directly harvested from human tumors and cultured tumorspheres.

Istituzione e Propagazione dei Tumori retinoblastoma umani in topi privi di sistema immunitario

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Ricerca

Medicina

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several techniques, including infusion of exogenous bacterial toxin (endotoxemia) or bacteria (bacteremia), as well as surgical perforation of the cecum by cecal ligation and puncture (CLP)1-3. CLP allows bacteria spillage and fecal contamination of the peritoneal cavity, mimicking the human clinical disease of perforated appendicitis or diverticulitis. The severity of sepsis, as reflected by the eventual mortality rates, can be controlled surgically by varying the size of the needle used for cecal puncture2. In animals, CLP induces similar, biphasic hemodynamic cardiovascular, metabolic, and immunological responses as observed during the clinical course of human sepsis3. Thus, the CLP model is considered as one of the most clinically relevant models for experimental sepsis1-3.
Various animal models have been used to elucidate the intricate mechanisms underlying the pathogenesis of experimental sepsis. The lethal consequence of sepsis is attributable partly to an excessive accumulation of early cytokines (such as TNF, IL-1 and IFN-&gamma;)4-6 and late proinflammatory mediators (e.g., HMGB1)7. Compared with early proinflammatory cytokines, late-acting mediators have a wider therapeutic window for clinical applications. For instance, delayed administration of HMGB1-neutralizing antibodies beginning 24 hours after CLP, still rescued mice from lethality8,9, establishing HMGB1 as a late mediator of lethal sepsis. The discovery of HMGB1 as a late-acting mediator has initiated a new field of investigation for the development of sepsis therapies using Traditional Chinese Herbal Medicine. In this paper, we describe a procedure of CLP-induced sepsis, and its usage in screening herbal medicine for HMGB1-targeting therapies.

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection, and can be simulated by a surgical technique termed cecal ligation and puncture (CLP). Here we describe a method to use CLP-induced animal model to screen medicinal herbs for therapeutic agents.

Uso di un modello animale di sepsi per valutare nuove terapie a base di erbe

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Non-invasive Assessment of the Efficacy of New Therapeutics for Intestinal Pathologies Using Serial Endoscopic Imaging of Live Mice

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic mechanisms that contribute to the onset and progression of intestinal diseases. The identification of new molecules that promote these pathologies has led to a flurry of activity focused on the development of potential new therapies to inhibit their function. As a result, various pre-clinical mouse models with an intact immune system and stromal microenvironment are now heavily used. Here we describe three experimental protocols to test the efficacy of new therapeutics in pre-clinical models of (1) acute mucosal damage, (2) chronic colitis and/or colitis-associated colon cancer, and (3) sporadic colorectal cancer. We also outline procedures for serial endoscopic examination that can be used to document the therapeutic response of an individual tumor and to monitor the health of individual mice. These protocols provide complementary experimental platforms to test the effectiveness of therapeutic compounds shown to be well tolerated by mice.

We describe methods for longitudinal monitoring of the efficacy of therapeutics for the treatment of colonic pathologies in mice using a rigid endoscope. This protocol can be readily used for the characterization of the therapeutic response of an individual tumor in live mice and also for monitoring potential disease relapse.

Valutazione non invasiva della efficacia di nuove terapie per patologie intestinali Utilizzando Serial Imaging endoscopica Live Mice

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic ...

Dry Powder and Nebulized Aerosol Inhalation of Pharmaceuticals Delivered to Mice Using a Nose-only Exposure System

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and bronchodilator drugs. Despite the availability of multiple treatments, both diseases are growing public health concerns. The majority of asthma patients are well controlled on current inhaled therapies but a substantial number of patients with severe asthma are not. Asthma affects an estimated 300 million people worldwide and approximately 20 percent have a severe form of the disease. In contrast to asthma, there are few effective therapies for COPD. An estimated 10% of the population has COPD and the trend in death rates is increasing for COPD while decreasing for other major diseases. Although developing drugs for inhaled delivery is challenging, the nose-only inhalation unit enables direct delivery of novel drugs to the lung of rodents for pre-clinical efficacy and safety/toxicology studies. Inhaled drug delivery has multiple advantages for respiratory diseases, where high concentration in the lung improves efficacy and minimizes systemic side effects. Inhaled corticosteroids and bronchodilators benefit from these advantages and inhaled delivery may also hold potential for future biologic therapies. The inhalation unit described herein can generate, sample for characterization, and uniformly deposit a drug aerosol in the lungs of rodents. This enables the pre-clinical determination of the efficacy and safety of drug doses deposited in the lungs of rodents, key data required before initiating clinical development.

The inhalation unit described herein can generate, sample for characterization, and uniformly deposit a drug aerosol in the lungs of rodents. This enables the pre-clinical determination of the efficacy and safety of drug doses deposited in the lungs; key data enabling clinical inhaled drug development.

Polvere secca e nebulizzata Aerosol L&#39;inalazione di prodotti farmaceutici distribuito nelle topo, utilizzando un naso-only Sistema di esposizione

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and ...

Taste Exam: A Brief and Validated Test

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement classic taste-testing methods in two ways. First, we explain how to do a brief assessment of the mouth, including the tongue, to ensure that taste papillae are present and to note evidence of relevant disease. Second, we draw on genetics to validate taste test data by comparing reports of perceived bitterness intensity and inborn receptor genotypes. Discordance between objective measures of genotype and subjective reports of taste experience can identify data collection errors, distracted subjects or those who have not understood or followed instructions. Our expectation is that fast and valid taste tests may persuade researchers and clinicians to assess taste regularly, making taste testing as common as testing for hearing and vision. Finally, because many tissues of the body express taste receptors, taste responses may provide a proxy for tissue sensitivity elsewhere in the body and, thereby, serve as a rapid, point-of-care test to guide diagnosis and a research tool to evaluate taste receptor protein function.

This protocol measures human taste responses and includes a brief anatomical assessment, a short taste test, and a validation method using the subject&#39;s reported sensation and taste receptor genotype.

Esame gustativo: Un Test breve e convalidato

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement ...

The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status epilepticus (SE) is frequently selected to recapitulate spontaneous recurrent seizures (SRS). Here we present a protocol of SE induction by intraperitoneal (i.p.) injection of pilocarpine and monitoring of chronic recurring seizures in live animals using a wireless telemetry video and electroencephalogram (EEG) system. We demonstrated notable behavioral changes that need attention after pilocarpine injection and their correlation with hippocampal neuronal loss at 7 days and 6 weeks post-pilocarpine. We also describe the experimental procedures of electrode implantation for video and EEG recording, and analysis of the frequency and duration of chronic recurrent seizures. Finally, we discuss the possible reasons why the expected results are not achieved in each case. This provides a basic overview of modeling chronic epilepsy in mice and guidelines for troubleshooting. We believe this protocol can serve as a baseline for suitable models of chronic epilepsy and epileptogenesis.

This manuscript describes a method of inducing status epilepticus by systemic pilocarpine injection and of monitoring spontaneous recurrent seizures in live animals using a wireless telemetry video and electroencephalogram system. This protocol can be utilized for studying the pathophysiologic mechanisms of chronic epilepsy, epileptogenesis, and acute seizures.

Il modello di pilocarpina di epilessia del lobo temporale e monitoraggio EEG utilizzando il sistema di radiotelemetria in topi

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

Murino colostomia distale, un nuovo modello di colite di diversione in topi C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Using a Knee Arthrometer to Evaluate Tissue-specific Contributions to Knee Flexion Contracture in the Rat

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ROM is called a joint contracture and results in increased morbidity. Due to the difficulty of reversing established knee contractures, early detection is important, and hence, knowing risk factors for their development is essential. The rat represents a good model with which the effect of an intervention can be studied due to the similarity of rat knee anatomy to that of humans, the rat's ability to tolerate long durations of knee immobilization in flexion, and because mechanical data can be correlated with histologic and biochemical analysis of knee tissue.
Using an automated arthrometer, we demonstrate a validated, precise, reproducible, user-independent method of measuring the extension ROM of the rat knee joint at specific torques. This arthrometer can be used to determine the effects of interventions on knee joint ROM in the rat.

The goal of the protocol is to measure the extension range of motion of the rat knee. The effects of various diseases that increase the stiffness of the knee joint and the effectiveness of treatments can be quantified.

Utilizzando un ginocchio Kt1000 per valutare tessuto-specifici contributi alla contrattura della flessione del ginocchio nel ratto

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ...

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal cancer, inflammatory bowel disease, and Parkinson&#8217;s disease. To study the function of the appendix, a gut disease-associated murine appendectomy model has been established and its step-by-step protocol is described here. This report introduces a facile protocol for caecal patch removal in mice followed by the chemical induction of chronic colitis-associated colorectal cancer using a combination of dextran sulfate sodium (DSS) and azoxymethane (AOM). IgA specific cells and IgA concentration were significantly reduced upon removal of the caecal patch in male C57BL/6 mice&#160;compared to those in the sham group. Simultaneously administering 2% DSS and AOM resulted in nearly 80% mice survival in both sham and appendectomy groups without significant body weight loss. Histological results confirmed colonic inflammation and different degrees of adenocarcinoma. This model can be used for the study of the functional role of the appendix in maintaining gut microbiota homeostasis and pathogenesis of gut colitis and malignancies, as well as for the potential development of drug targeting therapies.

The presented protocol describes a facile surgical removal of the appendix (caecal patch) in a mouse followed by the induction of inflammatory bowel disease-associated colorectal cancer. This murine appendectomy model enables investigation of the biological role of the appendix in the pathogenesis of human gastrointestinal disease.

Murine Appendectomy Modello di Cronica Colite Associata Cancro Colorettale da Localizzazione precisa di Patch Caecal

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

Establishing In Situ Closed Circuit Perfusion of Lower Abdominal Organs and Hind Limbs in Mice

Ex vivo perfusion is an important physiological tool to study the function of isolated organs (e.g. liver, kidneys). At the same time, due to the small size of mouse organs, ex vivo perfusion of bone, bladder, skin, prostate, and reproductive organs is challenging or not feasible. Here, we report for the first time an in situ lower body perfusion circuit in mice that includes the above tissues, but bypasses the main clearance organs (kidney, liver, and spleen). The circuit is established by cannulating the abdominal aorta and inferior vena cava above the iliac artery and vein and cauterizing peripheral blood vessels. Perfusion is performed via a peristaltic pump with perfusate flow maintained for up to 2 h. In situ staining with fluorescent lectin and Hoechst solution confirmed that the microvasculature was successfully perfused. This mouse model can be a very useful tool for studying pathological processes as well as mechanisms of drug delivery, migration/metastasis of circulating tumor cells into/from the tumor, and interactions of immune system with perfused organs and tissues.

A protocol is described for in situ perfusion of the mouse lower body, including the bladder, the prostate, sex organs, bone, muscle and foot skin.

Creazione in Situ Circuito Chiuso Perfusione di Organi Addominali Inferiori e Arti Hind in Topi

Ex vivo perfusion is an important physiological tool to study the function of isolated organs (e.g. liver, kidneys). At the same time, due to the small ...