Il protocollo generale descrive le procedure chirurgiche facilmente eseguite per rimuovere l'appendice nota come cerotto caecale nei topi. Il modello di appendicectomia murina può essere utilizzato per studiare i ruoli biologici dell'appendice nella patogenesi della malattia gastrointestinale umana. L'appendice umana è un organo discutibile.
Studi recenti hanno suggerito che l'appendice svolge un ruolo importante nel mantenimento della salute intestinale. Per studiare la funzione biologica dell'appendice, è fondamentale generare un modello animale di appendectomia associato alla malattia. In questo protocollo, descriveremo una procedura chirurgica semplice e sicura per rimuovere l'appendice, nota come cerotto caecale nei topi.
Per garantire il successo di questo modello, ci sono tre passaggi chiave come vedrai nel video seguente. In primo luogo, individuare il feco dei topi prima dell'intervento chirurgico. In secondo luogo, fare una piccola incisione nell'addome.
In terzo luogo, disinfettare e chiudere il ceppo di caecum. La prima parte, appendectomia dei topi. Preparare strumenti chirurgici sterili e soluzioni di pulizia prima dell'intervento chirurgico.
Anestetizzare e fissare il mouse su una piattaforma in posizione supina posizionando quattro strisce di nastro adesivo medico sugli arti per prevenire il movimento posturale durante l'intervento chirurgico. Toccare delicatamente l'intero addome del mouse per trovare la sensazione di urto. Coprire il drappo e disinfettare l'area rasata dell'addome del topo il più ampia possibile utilizzando due volte di entoiodina.
Fai un'incisione longitudinale che va da 0,5 centimetri a un centimetro sulla linea mediana dell'addome. Secondo la posizione predeterminata del caecum, cercare il feco e esternalizzarlo delicatamente per circa un centimetro di lunghezza per identificare il cerotto fecale. Utilizzare una salina fisiologica pre-riscaldata e sterile per idratare l'intestino.
Per prevenire potenziali complicanze del sanguinamento post-operatorio e dell'infezione, ligate i vasi sanguigni mesenterici del caecum usando l'8-0 Sutura. Idratare il feco con la salina. Contrassegnare la regione di resezione utilizzando la sutura 4-0 con loop aperto vicino all'apice del caecum ai due punti prossimali.
Tagliare il cerotto fecale sotto la resezione marcata utilizzando micro-forbici e pulire il contenuto fecale residuo con tamponi di cotone medicali. Disinfettare il ceppo di caecum con entoiodina. Chiudere il ceppo con sutura in esecuzione utilizzando l'8-0 Sutura.
Rimuovere con cura il ciclo del filo 4-0, precedentemente utilizzato per contrassegnare la resezione sul ceppo di caecum. Sterilizzare la posizione suturata utilizzando entoiodina. Reidratare l'area di taglio con la salina.
Chiudere il livello di muscolatura con sutura in esecuzione utilizzando 8-0 filo di sutura. Chiudere gli strati della pelle usando suture interrotte con 4-0 filo di sutura. Disinfettare il taglio chirurgico due volte con entoiodina.
Quindi, rimuovere lo iodio usando il 75% di alcol medico. Capovolgere delicatamente il mouse indietro. Iniettare per via sottocutanea 0,1 milligrammo per chilogrammo di peso corporeo di buprenorfina e 0,4 millilitri di soluzione salina fisiologica.
E appoggia il mouse sul dissipatore di calore, fino a quando non ritorna alla coscienza. Rimettere il mouse nella gabbia sterile e monitorare attentamente il mouse per i segni del dolore per tre giorni dopo l'intervento chirurgico per assicurarne il recupero. La seconda parte:Induzione del cancro colorettale associato alla colite con azossimetano, AOM e solfato di sodio di Dextran, DSS, sette giorni dopo l'appendicectomia.
Scongelare un'aliquota di AOM e diluirla all'1 milligrammo per millilitro utilizzando lo 0,9% di soluzione salina normale. L'intero processo di preparazione viene effettuato nella cappa aspirante. Sciogliere quattro grammi di polvere DSS in soluzione di acqua autoclavata da 200 millilitri per preparare il 2%DSS.
Ogni gabbia contiene cinque topi. Effettuare un'iniezione intraperitoneale di AOM con 0,01 millilitro per grammo per topo basandosi sul suo peso. Sostituire l'acqua in autoclave con 2%DSS per cinque giorni.
I topi saranno nutriti con acqua autoclavata per altri due cicli. Terza parte:Risultati. I risultati del flusso e dell'ELISA indicano la corretta rimozione del cerotto fecale.
Questa procedura può contribuire a una significativa riduzione delle cellule plasmatiche specifiche dell'IgA, un evidente cambiamento dell'IgA secretorio nell'intestino grande, rispetto al 3%DSS, che ha un alto tasso di mortalità e un significativo cambiamento di peso a causa di gravi feci sanguinanti, prolasso ano e acesso addominale. Il 2%DSS è adatto per l'intero processo per il suo alto tasso di sopravvivenza a quasi l'80% e un ragionevole cambiamento di peso sia nei gruppi fittizi che in quello appendectomia. Come mostrato in queste immagini, abbiamo indotto con successo i tumori colorettali associati alla colite.
Nelle immagini di colorazione H&E, la freccia nera indica l'ulcera della mucosa, la punta della freccia indica l'adenocarcinoma e una freccia bianca indica l'infiltrazione di neutrofili tra le ghiandole. Diverse fasi dell'adenocarcinoma possono essere viste sia nei gruppi fittizi che in quello appendectomia. Questo modello di appendice murina conveniente può essere utilizzato per rispondere ad alcune domande importanti come: qual è il ruolo dell'appendice nella regolazione dei batteri intestinali e come partecipa alla risposta immunitaria nel tessuto linfoide associato all'intestino.
Ricorda, per evitare il danno nell'adesione dell'intestino, la pre-posizione del caecum e l'incisione della piccola pelle sono importanti. Inoltre, abbiamo usato il 2%DSS per indurre la colite. Ma una maggiore concentrazione di DSS può essere utilizzata per altri ceppi di topi.
