L'autore desidera ringraziare Li Zhang, Xian-Zhi Li, Aaron Hinz e Clayton Hall per l'aiuto editoriale con questo manoscritto. Questo saggio è stato inizialmente sviluppato nel laboratorio di George O'Toole, Geisel School of Medicine al Dartmouth. La ricerca nel laboratorio del Dr. Mah è supportata da sovvenzioni del Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada e della Cistica Fibrosis Canada.

1. MBC-B
<ol><li>
Coltivare un biofilm (adattato da O'Toole9).
	<ol>
<li>Coltiva una cultura del ceppo di interesse di tipo selvaggio e del ceppo mutante per 16 ore in un mezzo ricco a 37 °C.</li>
		<li>Diluire le colture notturne sature 1:100 in mezzo fresco per i test di resistenza agli antibiotici. Un mezzo standard per P. aeruginosa è il mezzo minimo M63 integrato con solfato di magnesio e arginina (vedi tabella 1). Questo mezzo stimola la formazione di un biofilm più robusto.</li>
		<li>Aggiungere 100 μl di diluizione per pozzo in un piatto di microtitolo da 96 po' (vedi tabella 1). Poiché questi saggi vengono in genere eseguiti in triplice copia per ogni ceppo, dovrebbero esserci 24 pozzi di ogni ceppo.</li>
		<li>Incubare la piastra del microtitoro per 24 ore a 37 °C.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Esposizione del biofilm preformato a un gradiente di concentrazione di antibiotici
	<ol>
<li>Preparare una serie di diluizione 10x di antibiotico per 7 pozzi. Esempio: per la tobramicina antibiotica, le concentrazioni finali nei pozzi sono 0,4, 0,2, 0,1, 0,05, 0,025, 0,0125 e 0,006 mg/ml 5-8 . Da uno stock di 25 mg/ml, preparare 10 diluizioni di 4, 2, 1, 0,5, 0,25, 0,125 e 0,06 mg/ml. Lascia sul ghiaccio.</li>
		<li>Rimuovere il supernatante speso (contenente celle planctoniche) utilizzando una pipetta multicanale (vedere tabella 1).</li>
		<li>Aggiungere 90 μl M63 (Mg/Arg) a tutti i pozzi.</li>
		<li>Aggiungere 10 μl di ogni concentrazione antibiotica 10x per ottenere le concentrazioni finali desiderate. Aggiungere 10 μl di acqua (nessun controllo antibiotico) al pozzo finale per ogni replica e ceppo.</li>
		<li>Incubare la piastra del microtitoro per 24 ore a 37 °C.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Rinfrescare il supporto e consentire il distacco di cellule vive.
	<ol>
<li>Rimuovere il supernatante speso (contenente celle planctoniche) utilizzando una pipetta multicanale.</li>
		<li>Aggiungere 115 μl M63 (Mg/Arg) a tutti i pozzi.</li>
		<li>Incubare la piastra del microtitoro per 24 ore a 37 °C.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Saggio per cellule vive.
	<ol>
<li>Etichettare due piastre di agar LB per piastra microtiter a 96 pozzo.</li>
		<li>Sterilizzare il dispositivo multiprong (vedi tabella 1) immergere i prong in etanolo al 100% e passare le sporgenze attraverso la fiamma aperta di un bruciatore Bunsen. ripetere. Lascia raffreddare leggermente le sporgenze. Utilizzando il dispositivo multiprong, trasferire ~3 μl (quantità che viene tipicamente trattenuta sulle punte delle punte) della coltura planctonica da ogni pozzo della piastra del microtitolo alla superficie di una piastra di agar LB.</li>
		<li>Incubare le piastre di agar LB per 16 ore a 37 °C.</li>
		<li>Determinare la concentrazione battericida minima dell'antibiotico identificando, a occhio, il taglio per la crescita batterica (Figura 1).</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. MBC-P
<ol><li>
Preparazione di ceppi batterici
	<ol>
<li>Coltiva una cultura del ceppo di interesse di tipo selvaggio e del ceppo mutante per 16 ore in un mezzo ricco a 37 °C.</li>
		<li>Diluire le colture notturne sature 1:100 in mezzo fresco per i test di resistenza agli antibiotici. Un mezzo standard per P. aeruginosa è il mezzo minimo M63 integrato con solfato di magnesio e arginina (vedi tabella 1).</li>
		<li>Aggiungere 90 μl di diluizione per pozzo in un piatto di microtitolo da 96 po' (vedi tabella 1). Poiché questi saggi vengono in genere eseguiti in triplice copia per ogni ceppo, dovrebbero esserci 24 pozzi di ogni ceppo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Esposizione delle cellule planctoniche a un gradiente di concentrazione di antibiotici
	<ol>
<li>Preparare una serie di diluizione 10x di antibiotico per 7 pozzi. Esempio: per la tobramicina antibiotica, le concentrazioni finali nei pozzi sono 0,032, 0,016, 0,008, 0,004, 0,002, 0,001 e 0,0005 mg/ml. Da uno stock di 25 mg/ml, preparare diluizioni di 0,32, 0,16, 0,08, 0,04, 0,02, 0,01 e 0,005 mg/ml. Lascia sul ghiaccio.</li>
		<li>Aggiungere 10 μl di ogni concentrazione antibiotica 10x per ottenere le concentrazioni finali desiderate. Aggiungere 10 μl di acqua (nessun controllo antibiotico) al pozzo finale per ogni replica e ceppo.</li>
		<li>Incubare la piastra del microtitoro per 24 ore a 37 °C.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Saggio per cellule vive.
	<ol>
<li>Etichettare due piastre di agar LB per piastra microtiter a 96 pozzo.</li>
		<li>Sterilizzare il dispositivo multiprong (vedi tabella 1) immergere i prong in etanolo al 100% e passare le sporgenze attraverso la fiamma aperta di un bruciatore Bunsen. ripetere. Lascia raffreddare leggermente le sporgenze. Utilizzando il dispositivo multiprong, trasferire ~3 μl (quantità che viene tipicamente trattenuta sulle punte delle punte) della coltura planctonica da ogni pozzo della piastra del microtitolo alla superficie di una piastra di agar LB.</li>
		<li>Incubare le piastre di agar LB per 16 ore a 37 °C.</li>
		<li>Determinare la concentrazione battericida minima dell'antibiotico identificando, a occhio, il taglio per la crescita batterica (Figura 2).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Hoiby, N., Bjarnsholt, T., Givskov, M., Molin, S., Ciofu, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+resistance+of+bacterial+biofilms.">Antibiotic resistance of bacterial biofilms.</a> Int. J. Antimicrob. Agents. 35 (4), 322-332 (2010).</li><li>Mah, T. F., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+biofilm+resistance+to+antimicrobial+agents.">Mechanisms of biofilm resistance to antimicrobial agents.</a> Trends Microbiol. 9 (1), 34-39 (2001).</li><li>Mah, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilm-specific+antibiotic+resistance.">Biofilm-specific antibiotic resistance.</a> Future Microbiol. 7 (9), 1061-1072 (2012).</li><li>Mah, T. F., Pitts, B., Pellock, B., Walker, G. C., Stewart, P. S., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetic+basis+for+Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+antibiotic+resistance.">A genetic basis for Pseudomonas aeruginosa biofilm antibiotic resistance.</a> Nature. 426 (6964), 306-310 (2003).</li><li>Zhang, L., Mah, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Involvement+of+a+Novel+Efflux+System+in+Biofilm-Specific+Resistance+to+Antibiotics.">The Involvement of a Novel Efflux System in Biofilm-Specific Resistance to Antibiotics.</a> J. Bacteriol. 190 (13), 4447-4452 (2008).</li><li>Zhang, L., Hinz, A. J., Nadeau, J. P., Mah, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+tssC1+Links+Type+VI+Secretion+and+Biofilm-specific+Antibiotic+Resistance.">Pseudomonas aeruginosa tssC1 Links Type VI Secretion and Biofilm-specific Antibiotic Resistance.</a> J. Bacteriol. 193 (19), 5510-5513 (2011).</li><li>Beaudoin, T., Zhang, L., Hinz, A. J., Parr, C. J., Mah, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Biofilm-Specific+Antibiotic+Resistance+Gene,+ndvB,+is+Important+for+Expression+of+Ethanol+Oxidation+Genes+in+Pseudomonas+aeruginosa+Biofilms.">The Biofilm-Specific Antibiotic Resistance Gene, ndvB, is Important for Expression of Ethanol Oxidation Genes in Pseudomonas aeruginosa Biofilms.</a> J. Bacteriol. 194 (12), 3128-3136 (2012).</li><li>O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtiter+Dish+Biofilm+Formation+Assay.">Microtiter Dish Biofilm Formation Assay.</a> J. Vis. Exp. (47), e2437 (2011).</li><li>Lewis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multidrug+tolerance+of+biofilms+and+persister+cells.">Multidrug tolerance of biofilms and persister cells.</a> Curr. Top. Microbiol. Immunol. 322, 107-131 (2008).</li><li>Merritt, J. H., Kadouri, D. E., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growing+and+Analyzing+Static+Biofilms.">Growing and Analyzing Static Biofilms.</a> Curr. Protoc. Microbiol. 1, 1B.1.1-1B.1.17 (2005).</li><li>Ramey, B. E., Parsek, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+1.+Growing+and+analyzing+biofilms+in+fermenters.">Chapter 1. Growing and analyzing biofilms in fermenters.</a> Curr. Protoc. Microbiol. 1, 1B.3.1-1B.3.14 (2005).</li></ol>

L'autrice dichiara di non avere interessi finanziari concorrenti.

La resistenza agli antibiotici nelle cellule planctoniche è definita come un aumento della concentrazione inibitoria minima (MIC) di un antibiotico a causa di un cambiamento permanente nelle cellule(ad esempio una mutazione). I meccanismi di resistenza o tolleranza specifici del biofilm che sono stati identificati fino ad oggi sono il risultato dell'espressione di geni di tipo selvatico all'interno dei biofilm. Pertanto, la definizione classica di resistenza non si applica ai biofilm. Tuttavia, è stata presentata un'altra serie di definizioni: i meccanismi di resistenza impediscono all'antibiotico di accedere al suo obiettivo, mentre i meccanismi di tolleranza chiudono gli obiettividegli antibiotici 10. I meccanismi di resistenza agli antibiotici specifici del biofilm comprendono entrambe queste definizioni. Il termine "resistenza" è stato usato in tutto questo protocollo, ma devono essere effettuate ulteriori sperimentazioni per determinare se un gene sta contribuendo alla resistenza o alla tolleranza.
I test MBC-P e MBC-B possono essere adattati per qualsiasi ceppo batterico biofilm-forming e qualsiasi agente antimicrobico battericida. I due importanti criteri per adattare questo saggio ad altri batteri e ad altri agenti antimicrobici sono la determinazione delle condizioni che portano alla formazione di biofilm e la determinazione dell'intervallo appropriato di concentrazioni per l'agente antimicrobico utilizzando il ceppo di tipo selvatico di interesse. Le corrette condizioni di formazione del biofilm possono essere determinate utilizzando un protocollo di formazione di biofilm JoVE pubblicato da George O'Toole9. Al fine di determinare un intervallo di concentrazione appropriato per il saggio MBC-B, una buona regola empirica è utilizzare 25 x MIC (concentrazione inibitoria minima11) come concentrazione centrale dell'intervallo e regolarsi di conseguenza. Per il saggio MBC-P, utilizzare 1/10 dei valori identificati per il saggio MBC-B. L'obiettivo è quello di definire una gamma di concentrazioni che consentano una chiara differenza tra l'MBC-B del ceppo di tipo selvaggio e un ceppo mutante sensibile. Pertanto, l'estremità superiore dell'intervallo dovrebbe essere vicina all'MBC-B della varietà di tipo selvaggio. Ripetiamo questo esperimento almeno tre volte, dando un minimo di 9 punti dati per deformazione.
Il passo più critico di questi test è evitare la contaminazione. Per evitare la contaminazione tra ceppi, una colonna vuota deve essere lasciata tra i ceppi. Un altro passo fondamentale è quello di concedere abbastanza tempo per i prong metallici sul dispositivo multiprong per raffreddare abbastanza. Questo può essere testato infiammando le sporgenze, cronometrando il periodo di raffreddamento e toccando rapidamente le sporgenze con le mani.
Se il distacco delle cellule dal biofilm dopo l'esposizione agli antibiotici è un problema, il metodo MBC-B può essere modificato per includere una fase di sonicazione. Saltare il passaggio 1.3.3 (incubazione di 24 ore dopo l'aggiunta di mezzi freschi). Coprire invece i pozzi della piastra microtitere a 96 po' di pozzo dopo aver aggiunto 115 μl di mezzi freschi (fase 1.3.2) con guarnizione sterile della piastra adesiva e piastra sonicata per spodestare le cellule del biofilm dalle pareti dei pozzi. Usa un sonicatore per bagni d'acqua. Le condizioni specifiche (tempo, intensità) per l'efficiente rimozione delle cellule del biofilm dalla plastica devono essere determinate in anticipo.
Una variante dell'MBC-B è stata utilizzata per migliorare una libreria di 4.000 mutanti di inserimento di transposon di P. aeruginosa per mutanti di resistenza agli antibiotici specifici del biofilm. È stata scelta una concentrazione di tobramicina (50 μg/ml) che non ucciderebbe le cellule del biofilm di tipo selvatico, ma consentirebbe l'identificazione di mutanti 3 volte più sensibili del biofilm di tipo selvatico. Invece di inoculare colonne di pozzi con uno specifico ceppo di batteri, ogni pozzo è stato inoculato con un mutante diverso. I mutanti sono stati lasciati a formare un biofilm, esposto a 50 μg/ml di tobramicina, lasciato per riprendersi dall'esposizione alla tobramicina e poi analizzato per la vitalità. I mutanti che non sopravvissero a 50 μ'esposizionealla tobramicina g/ml furono ritestati nelle stesse condizioni di screening. I protocolli MBC-P e MBC-B sono stati utilizzati per confermare i fenotipi sensibili alla tobramicina dei mutanti.
Esistono altri metodi per saggiare la resistenza agli antibiotici nei biofilm, cioè biofilm e biofilm di colonia coltivati in bioreattori12,13. Questi metodi sono considerevolmente più laboriosi e limitati nel numero di ceppi che possono essere facilmente saggiati. Pertanto, un vantaggio che l'MBC-B ha rispetto a questi altri metodi è che è ad alta produttività, consentendo al ricercatore di condurre schermi o di saggiare diversi ceppi, così come diverse concentrazioni di antibiotici contemporaneamente.
<table border="1"><tbody>
<tr>
<td>Nome del reagente</td>
			<td>società</td>
			<td>Numero di catalogo</td>
			<td>Commenti (facoltativo)</td>
		</tr>
<tr>
<td>1x M63</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Preparare come stock 5x M63 sciogliendo 15 g KH2PO4, 35 g K2HPO4 e 10 g (NH4)2SO4 in 1 L di acqua. Questo stock non ha bisogno di essere autoclavato e può essere conservato a temperatura ambiente.  Diluire 5x stock 1:5, autoclave, raffreddare, quindi aggiungere i componenti desiderati.</td>
		</tr>
<tr>
<td>KH2PO4
</td>
			<td>pescatore</td>
			<td>P285-500</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>K2HPO4
</td>
			<td>pescatore</td>
			<td>P288-500</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>(NH4) 2 la commissione per i SO4
</td>
			<td>sigma</td>
			<td>A5132</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Solfato di magnesio</td>
			<td>pescatore</td>
			<td>M63-500</td>
			<td>Aggiungere a 1 mM di concentrazione finale.  Preparare come magazzino da 1 M in acqua e autoclave.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Tobramicina</td>
			<td>sigma</td>
			<td></td>
			<td>Preparare 50 mg/ml di stock. Aliquota e conservare a -20 °C.</td>
		</tr>
<tr>
<td>arginina</td>
			<td>sigma</td>
			<td>A5131</td>
			<td>Aggiungere allo 0,4% la concentrazione finale.  Preparare come stock al 20% in acqua e filtrare sterilizzare.  Questa fonte alternativa di carbonio/energia può sostituire glucosio e casaminoacidi</td>
		</tr>
<tr>
<td>Piastre microtiter a 96 pozzi</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3595</td>
			<td>Sterile, a fondo piatto, bassa evaporazione</td>
		</tr>
<tr>
<td>Tranferpette (pipetta multicanale)</td>
			<td>BrandTech</td>
			<td>2703610</td>
			<td>8 canali, 20-200 μl</td>
		</tr>
<tr>
<td>Dispositivo multiprong</td>
			<td>Dan-Kar</td>
			<td>Mc48</td>
			<td>48 prong si inseriscono in 1/2 di una piastra microtitere a 96 po</td>
		</tr>
</tbody></table>La tabella 1.

I test di resistenza agli antibiotici sono stati inizialmente sviluppati per saggiare la resistenza delle colture planctoniche (a nuoto libero) dei batteri. Poiché molte infezioni batteriche coinvolgono biofilm (cellule attaccate alla superficie), eravamo interessati a sviluppare un metodo per saggiare la resistenza agli antibiotici specifica del biofilm. Tuttavia, la maggior parte dei test di resistenza agli antibiotici sono poco adatti per misurare la resistenza dei biofilm. Ad esempio, determinare la concentrazione inibitoria minima (MIC) è il gold standard per determinare la resistenza agli antibiotici delle colture batteriche planctoniche 1. Questo saggio comporta la miscelazione di una coltura planctonica diluita con una serie di diluizione di antibiotici.  La concentrazione di antibiotico che inibisce la crescita visibile delle cellule planctoniche è il MIC. Poiché questo saggio si basa sull'inibizione della crescita, per definizione, non può funzionare con colture di biofilm, il che richiede l'esame della sensibilità antibiotica delle cellule in un biofilm precarato. Invece di misurare l'inibizione della crescita, il saggio MBC-B qui descritto determina la concentrazione di antibiotici che uccide le cellule già esistenti in un biofilm. Pertanto, questo test mira a imitare i trattamenti antibiotici delle infezioni da biofilm accertate e fornire una visione più pertinente della resistenza agli antibiotici batterici in vivo.
Poiché i biofilm sono generalmente più resistenti agli antibiotici rispetto alle colture planctoniche 2-4 , è stato necessario escogitare un metodo che mette direttamente in relazione la resistenza antibiotica di un biofilm a quella di una coltura planctonica. Quindi un altro obiettivo di questo metodo è quello di essere in grado di confrontare direttamente il livello di resistenza agli antibiotici tra cellule planctoniche e biofilm. I test MBC-P e MBC-B qui descritti lo rendono possibile perché le cellule sono coltivate in condizioni simili. Abbiamo utilizzato questo metodo per studiare diversi geni che sono importanti per la resistenza agli antibiotici specifica del biofilm 5-8 .

<table><tbody><tr><td> &lt;p&gt;1x&amp;nbsp;M63&lt;/p&gt; </td><td></td><td>&lt;p align=&quot;center&quot;&gt;&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;Prepare as a 5x&amp;nbsp;M63 stock by dissolving 15g KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, 35g K&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt; and 10g (NH&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;)&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;SO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt; in 1 L of water. This stock does not need to be autoclaved and can be stored at room temperature.&amp;nbsp; Dilute 5x&amp;nbsp;stock 1:5, autoclave, cool, then add the desired components.&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;&lt;/p&gt; </td><td>Fisher</td><td>&lt;p align=&quot;center&quot;&gt;P285-500&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;K&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;&lt;/p&gt; </td><td>Fisher</td><td>&lt;p align=&quot;center&quot;&gt;P288-500&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;(NH&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;)&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;SO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;&lt;/p&gt; </td><td>Sigma</td><td>&lt;p align=&quot;center&quot;&gt;A5132&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;Magnesium sulfate&lt;/p&gt; </td><td>Fisher</td><td>&lt;p align=&quot;center&quot;&gt;M63-500&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;Add to 1 mM final concentration.&amp;nbsp; Prepare as a 1 M stock in water and autoclave.&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;Tobramycin&lt;/p&gt; </td><td>Sigma</td><td>&lt;p align=&quot;center&quot;&gt;&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;Prepare 50 mg/m&amp;nbsp;stock. Aliquot and store at &lt;span style=&quot;font-size: 11.199999809265137px;&quot;&gt;-&lt;/span&gt;20&amp;deg;C.&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;Arginine&lt;/p&gt; </td><td>Sigma</td><td>&lt;p align=&quot;center&quot;&gt;A5131&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;Add to 0.4% final concentration.&amp;nbsp; Prepare as a 20% stock in water and filter sterilize.&amp;nbsp; This alternative carbon/energy source can replace glucose and casamino acids&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;96-well microtiter plates&lt;/p&gt; </td><td>Corning</td><td>&lt;p align=&quot;center&quot;&gt;3595&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;Sterile, flat-bottom, low evaporation&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;Tranferpette (multichannel pipette)&lt;/p&gt; </td><td>BrandTech</td><td>&lt;p align=&quot;center&quot;&gt;2703610&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;8-channel, 20-200 &amp;mu;l&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;Multiprong device&lt;/p&gt; </td><td>Dan-Kar</td><td>&lt;p align=&quot;center&quot;&gt;MC48&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;48 prongs fit into &amp;frac12; of a 96-well microtiter plate&lt;/p&gt; </td></tr></tbody></table>

establishing the minimal bactericidal concentration of an antimicrobial agent for planktonic cells (mbc-p) and biofilm cells (mbc-b)

Questo protocollo consente un confronto diretto tra resistenza planctonica e biofilm per un ceppo batterico in grado di formare un biofilm in vitro. I batteri vengono inoculati nei pozzi di una piastra di microtitolo da 96 po '. Nel caso del saggio planctonico, alle sospensioni batteriche vengono aggiunte diluizioni seriali dell'agente antimicrobico di scelta. Nel saggio del biofilm, una volta inoculato, i batteri vengono lasciati a formare un biofilm per un determinato periodo di tempo. Le cellule non attaccate vengono rimosse dai pozzi, il supporto viene rifornito e vengono aggiunte diluizioni seriali dell'agente antimicrobico di scelta. Dopo l'esposizione all'agente antimicrobico, le cellule planctoniche vengono studiate per la crescita. Per il saggio del biofilm, il supporto viene rinfrescato con nuovi mezzi privi dell'agente antimicrobico e le cellule del biofilm vengono lasciate recuperare. La vitalità delle cellule biofilm viene saggiata dopo il periodo di recupero. L'MBC-P per l'agente antimicrobico è definito come la più bassa concentrazione di farmaco che uccide le cellule nella coltura planctonica.  Al contrario, l'MBC-B per un ceppo è determinato esponendo biofilm preformati ad concentrazioni crescenti di agente antimicrobico per 24 ore. L'MBC-B è definito come la più bassa concentrazione di agente antimicrobico che uccide le cellule nel biofilm.

Sono stati eseguiti saggi MBC-P e MBC-B, confrontando la sensibilità del tipo selvaggio PA14 con PA14 ∆ndvB. La tobramicina è stata usata come antibiotico. Vengono presentati i risultati corrispondenti al passaggio 1.4.4 (Figura 1) e al passaggio 2.3.4 (Figura 2). PA14 e ∆ndvB sono stati inoculati nei saggi MBC-P e MBC-B in triplice copia. Dopo aver completato i passaggi 1.0-1.4 del protocollo MBC-B e i passaggi 2.0-2.3 del protocollo MBC-P, le celle vitali sono state placcate su una piastra di agar LB. Le concentrazioni di tobramicina(μg/ml) sono indicate a sinistra delle cellule. L'MBC-B per PA14 è di 100 μg/ml e l'MBC-B per ∆ndvB è di 12,5 μg/ml. L'MBC-P sia per PA14 che per il ∆mutante ndvB è di 8 μg/ml.
<img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50854/50854fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50854/50854fig1.jpg"> Figura 1. Risultati rappresentativi di un test MBC-B con tipo selvatico PA14 rispetto a PA14 ∆ndvB e tobramicina. I valori si riferiscono alla concentrazione finale di tobramicina (μg/ml).
<img alt="Figure 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50854/50854fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50854/50854fig2.jpg"> Figura 2. Risultati rappresentativi di un test MBC-P con tipo selvaggio PA14 rispetto a PA14 ∆ndvB e tobramicina. I valori si riferiscono alla concentrazione finale di tobramicina(μg/ml).

Watch this Scientific Journal Video about Establishing the Minimal Bactericidal Concentration of an Antimicrobial Agent for Planktonic Cells MBC-P and Biofilm Cells MBC-B at JoVE.com

Establishing the Minimal Bactericidal Concentration of an Antimicrobial Agent for Planktonic Cells MBC-P and Biofilm Cells MBC-B

Questo protocollo consente un confronto diretto tra resistenza planctonica e biofilm per un ceppo batterico che può formare un biofilm in vitro utilizzando una piastra microtitere a 96 pozzoli. I batteri planctonici o biofilm sono esposti a diluizioni seriali dell'agente antimicrobico di scelta. La vitalità è dimostrata dalla crescita sulle piastre di agar.

Stabilire la concentrazione battericida minima di un agente antimicrobico per cellule planctoniche (MBC-P) e cellule biofilm (MBC-B)

This protocol allows for a direct comparison between planktonic and biofilm resistance for a bacterial strain that can form a biofilm in vitro. Bacteria ...

establishing-minimal-bactericidal-concentration-an-antimicrobial

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Establishing the Minimal Bactericidal Concentration of an Antimicrobial Agent for Planktonic Cells (MBC-P) and Biofilm Cells (MBC-B)

19.9K Views.  University of Ottawa. Questo protocollo consente un confronto diretto tra resistenza planctonica e biofilm per un ceppo batterico che può formare un biofilm in vitro utilizzando una piastra microtitere a 96 pozzoli. I batteri planctonici o biofilm sono esposti a diluizioni seriali dell'agente antimicrobico di scelta. La vitalità è dimostrata dalla crescita sulle piastre di agar.

Video: Establishing the Minimal Bactericidal Concentration of an Antimicrobial Agent for Planktonic Cells MBC-P and Biofilm Cells MBC-B

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

There is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from cystic fibrosis (CF) patients. Existing methods rely on single or a few isolates grown aerobically and planktonically. Predetermined cut-offs are used to define whether the bacteria are sensitive or resistant to any given antibiotic1. However, during chronic lung infections in CF, P. aeruginosa populations exist in biofilms and there is evidence that the environment is largely microaerophilic2. The stark difference in conditions between bacteria in the lung and those during diagnostic testing has called into question the reliability and even relevance of these tests3.
 Artificial sputum medium (ASM) is a culture medium containing the components of CF patient sputum, including amino acids, mucin and free DNA. P. aeruginosa growth in ASM mimics growth during CF infections, with the formation of self-aggregating biofilm structures and population divergence4,5,6. The aim of this study was to develop a microtitre-plate assay to study antimicrobial susceptibility of P. aeruginosa based on growth in ASM, which is applicable to both microaerophilic and aerobic conditions.
 An ASM assay was developed in a microtitre plate format. P. aeruginosa biofilms were allowed to develop for 3 days prior to incubation with antimicrobial agents at different concentrations for 24 hours. After biofilm disruption, cell viability was measured by staining with resazurin. This assay was used to ascertain the sessile cell minimum inhibitory concentration (SMIC) of tobramycin for 15 different P. aeruginosa isolates under aerobic and microaerophilic conditions and SMIC values were compared to those obtained with standard broth growth. Whilst there was some evidence for increased MIC values for isolates grown in ASM when compared to their planktonic counterparts, the biggest differences were found with bacteria tested in microaerophilic conditions, which showed a much increased resistance up to a &gt;128 fold, towards tobramycin in the ASM system when compared to assays carried out in aerobic conditions.
 The lack of association between current susceptibility testing methods and clinical outcome has questioned the validity of current methods3. Several in vitro models have been used previously to study P. aeruginosa biofilms7, 8. However, these methods rely on surface attached biofilms, whereas the ASM biofilms resemble those observed in the CF lung9 . In addition, reduced oxygen concentration in the mucus has been shown to alter the behavior of P. aeruginosa2 and affect antibiotic susceptibility10. Therefore using ASM under microaerophilic conditions may provide a more realistic environment in which to study antimicrobial susceptibility.

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Current diagnostic antimicrobial susceptibility testing relies on the planktonic growth of isolates in nutrient rich, aerobic conditions. Here, we employ an alternative artificial sputum medium to study antimicrobial susceptibility of Pseudomonas aeruginosa biofilms under both aerobic and microaerophilic conditions more representative of the cystic fibrosis lung.

Uso di un terreno dell&#39;espettorato artificiale per testare l&#39;efficacia degli antibiotici contro<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; In condizioni più rilevanti al polmone Fibrosi Cistica

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

Anti-virulent Disruption of Pathogenic Biofilms using Engineered Quorum-quenching Lactonases

The rapid emergence of multi-drug resistant bacteria has accelerated the need for novel therapeutic approaches to counter life-threatening infections. The persistence of bacterial infection is often associated with quorum-sensing-mediated biofilm formation. Thus, the disruption of this signaling circuit presents an attractive anti-virulence strategy. Quorum-quenching lactonases have been reported to be effective disrupters of quorum-sensing circuits. However, there have been very few reports of the effective use of these enzymes in disrupting bacterial biofilm formation. This protocol describes a method to disrupt biofilm formation in a clinically relevant A. baumannii S1 strain through the use of an engineered quorum-quenching lactonase. Acinetobacter baumannii is a major human pathogen implicated in serious hospital-acquired infections globally and its virulence is attributed predominantly to its biofilm's tenacity. The engineered lactonase treatment achieved significant A. baumannii S1 biofilm reduction. This study also showed the possibility of using engineered quorum-quenching enzymes in future treatment of biofilm-mediated bacterial diseases. Lastly, the method may be used to evaluate the competency of promising quorum-quenching enzymes.

Quorum-quenching enzymes are anti-virulent and anti-bacterial options that can mitigate pathogenesis without risk of incurring resistance, by preventing the expression of virulence factors and genes associated with antibiotic resistance and biofilm formation. In this study, we report a method that demonstrates the efficacy of quorum-quenching enzymes in bacterial biofilm disruption.

Turbativa Anti-virulento di patogeni biofilm utilizzando Engineered Quorum-tempra Lactonases

The rapid emergence of multi-drug resistant bacteria has accelerated the need for novel therapeutic approaches to counter life-threatening infections. The ...

Targeting Biofilm Associated Staphylococcus aureus Using Resazurin Based Drug-susceptibility Assay

Most pathogenic bacteria are able to form biofilms during infection, but due to the difficulty of manipulating and assessing biofilms, the vast majority of laboratory work is conducted with planktonic cells. Here, we describe a peg plate biofilm assay as performed with Staphylococcus aureus. Bacterial biofilms are grown on pegs attached to a 96-well microtiter plate lid, washed through gentle submersion in buffer, and placed in a drug challenge plate. After subsequent incubation they are again washed and moved to a final recovery plate, in which the fluorescent dye resazurin serves as a viability indicator. This assay offers greatly increased ease-of-use, reliability, and reproducibility, as well as a wealth of data when conducted as a kinetic read. Moreover, this assay can be adapted to a medium-throughput drug screening approach by which an endpoint fluorescent readout is taken instead, offering a path for drug discovery efforts.

Targeting Biofilm Associated Staphylococcus aureus Using Resazurin Based Drug-susceptibility Assay

Most bacterial infections produce a biofilm. By virtue of their environment, biofilm associated bacteria are often phenotypically drug resistant. Novel antibacterial molecules that kill bacteria in biofilms are thus a high priority. We establish an assay to quickly screen for antimicrobial compounds that are effective at eradicating biofilms.

Targeting biofilm Associated<em&gt; Staphylococcus aureus</em&gt; Uso resazurina base Assay farmaco-sensibilità

Most pathogenic bacteria are able to form biofilms during infection, but due to the difficulty of manipulating and assessing biofilms, the vast majority ...

Methodologies for Studying B. subtilis Biofilms as a Model for Characterizing Small Molecule Biofilm Inhibitors

This work assesses different methodologies to study the impact of small molecule biofilm inhibitors, such as D-amino acids, on the development and resilience of Bacillus subtilis biofilms. First, methods are presented that select for small molecule inhibitors with biofilm-specific targets in order to separate the effect of the small molecule inhibitors on planktonic growth from their effect on biofilm formation. Next, we focus on how inoculation conditions affect the sensitivity of multicellular, floating B. subtilis cultures to small molecule inhibitors. The results suggest that discrepancies in the reported effects of such inhibitors such as D-amino acids are due to inconsistent pre-culture conditions. Furthermore, a recently developed protocol is described for evaluating the contribution of small molecule treatments towards biofilm resistance to antibacterial substances. Lastly, scanning electron microscopy (SEM) techniques are presented to analyze the three-dimensional spatial arrangement of cells and their surrounding extracellular matrix in a B. subtilis biofilm. SEM facilitates insight into the three-dimensional biofilm architecture and the matrix texture. A combination of the methods described here can greatly assist the study of biofilm development in the presence and absence of biofilm inhibitors, and shed light on the mechanism of action of these inhibitors.

Methodologies for Studying B. subtilis Biofilms as a Model for Characterizing Small Molecule Biofilm Inhibitors

This study presents the development of reproducible methodologies to study biofilm inhibitors and their effects on Bacillus subtilis multicellularity.

Metodologie per lo studio<em&gt; B. subtilis</em&gt; I biofilm come modello per Caratterizzare piccole molecole inibitori biofilm

This work assesses different methodologies to study the impact of small molecule biofilm inhibitors, such as D-amino acids, on the development and ...

A Platform of Anti-biofilm Assays Suited to the Exploration of Natural Compound Libraries

Biofilms are regarded as one of the most challenging topics of modern biomedicine, and they are potentially responsible for over 80% of antibiotic-tolerant infections. Biofilms have displayed an exceptionally high tolerance for chemotherapy, which is thought to be multifactorial. For instance, the matrix provides a physical barrier that decreases the penetration of antibiotics into the biofilm. Also, cells within the biofilms are phenotypically diverse. Likely, biofilm resilience arises from a combination of these and other, yet unknown, mechanisms. All of the currently existing antibiotics have been developed against single-cells (planktonic) bacteria. Therefore, so far, a very limited repertoire of molecules exists that can selectively act on mature biofilms. This situation has driven a progressive paradigm shift in drug discovery, in which searching for anti-biofilms has been urged to occupy a more prominent place. An additional challenge is that there are a very limited number of standardized methods for biofilm research, especially those that can be used for large-throughput screening of chemical libraries. Here, an experimental anti-biofilm platform for chemical screening is presented. It uses three assays to measure biofilm viability (with resazurin staining), total biomass (with crystal violet staining), and biofilm matrix (using a wheat germ agglutinin, WGA-fluorescence-based staining of the poly-N-acetyl-glucosamine, PNAG, fraction). All the assays were developed using Staphylococcus aureus as the model bacteria. Examples of how the platform can be used for primary screening as well as for functional characterization of identified anti-biofilm hits are presented. This experimental sequence further allows for the classification of the hits based upon the measured end-points. It also provides information on their mode of action, especially on long-term versus short-term chemotherapeutic effects. Thus, it is very advantageous for the quick identification of high-quality hit compounds that can serve as starting points for various biomedical applications.

Biofilm infections show high tolerance towards chemotherapy. No single assay captures the complexity of biofilms. Instead, complementary assays are needed. We present a screening platform (developed for S. aureus) that combines assays for viability, biomass, and biofilm matrix. It allows anti-biofilm drug discovery, including the assessment of long-term chemotherapeutic effects.

Una piattaforma di test anti-biofilm Adatto per l&#39;esplorazione del Biblioteche composto naturale

Biofilms are regarded as one of the most challenging topics of modern biomedicine, and they are potentially responsible for over 80% of ...

Metabolic Profiling to Determine Bactericidal or Bacteriostatic Effects of New Natural Products using Isothermal Microcalorimetry

Due to the global threat of rising antimicrobial resistance, novel antibiotics are urgently needed. We investigate natural products from Myxobacteria as an&#160;innovative source of such new compounds. One bottleneck in the process is typically the elucidation of their mode-of-action. We recently established isothermal microcalorimetry as part of a routine profiling pipeline. This technology allows for investigating the effect of antibiotic exposure on the total bacterial metabolic response, including processes that are decoupled from biomass formation. Importantly, bacteriostatic and bactericidal effects are easily distinguishable without any user intervention during the measurements. However, isothermal microcalorimetry is a rather new approach and applying this method to different bacterial species usually requires pre-evaluation of suitable measurement conditions. There are some reference thermograms available of certain bacteria, greatly facilitating interpretation of results. As the pool of reference data is steadily growing, we expect the methodology to have increasing impact in the future and expect it to allow for in-depth fingerprint analyses enabling the differentiation of antibiotic classes.

The elucidation of the mode-of-action of a novel antibiotic is a challenging task in the drug discovery process. The goal of the method described here is the application of isothermal microcalorimetry using calScreener in antibacterial profiling to provide additional insight into drug-microbe interactions.

Profilazione metabolica per determinare gli effetti batterici o batteriosfondi dei nuovi prodotti naturali utilizzando la microcalorimetria isotermica

Due to the global threat of rising antimicrobial resistance, novel antibiotics are urgently needed. We investigate natural products from Myxobacteria as ...

Bioingegneria

Evaluation of Antimicrobial Activities of Nanoparticles and Nanostructured Surfaces In Vitro

The antimicrobial activities of nanoparticles and nanostructured surfaces, such as silver, zinc oxide, titanium dioxide, and magnesium oxide, have been explored previously in clinical and environmental settings and in consumable food products. However, a lack of consistency in the experimental methods and materials used has culminated in conflicting results, even amongst studies of the same nanostructure types and bacterial species. For researchers who wish to employ nanostructures as an additive or coating in a product design, these conflicting data limit their utilization in clinical settings. 
To confront this dilemma, in this article, we present four different methods to determine the antimicrobial activities of nanoparticles and nanostructured surfaces, and discuss their applicability in different scenarios. Adapting consistent methods is expected to lead to reproducible data that can be compared across studies and implemented for different nanostructure types and microbial species. We introduce two methods to determine the antimicrobial activities of nanoparticles and two methods for the antimicrobial activities of nanostructured surfaces. 
For nanoparticles, the direct co-culture method can be used to determine the minimum inhibitory and minimum bactericidal concentrations of nanoparticles, and the direct exposure culture method can be used to assess real-time bacteriostatic versus bactericidal activity resulting from nanoparticle exposure. For nanostructured surfaces, the direct culture method is used to determine the viability of bacteria indirectly and directly in contact with nanostructured surfaces, and the focused-contact exposure method is used to examine antimicrobial activity on a specific area of a nanostructured surface. We discuss key experimental variables to consider for in vitro study design when determining the antimicrobial properties of nanoparticles and nanostructured surfaces. All these methods are relatively low cost, employ techniques that are relatively easy to master and repeatable for consistency, and are applicable to a broad range of nanostructure types and microbial species.

Evaluation of Antimicrobial Activities of Nanoparticles and Nanostructured Surfaces In Vitro

We introduce four methods to evaluate the antimicrobial activities of nanoparticles and nanostructured surfaces using in vitro techniques. These methods can be adapted to study the interactions of different nanoparticles and nanostructured surfaces with a broad range of microbial species.

Valutazione delle attività antimicrobiche di nanoparticelle e superfici nanostrutturate in vitro

The antimicrobial activities of nanoparticles and nanostructured surfaces, such as silver, zinc oxide, titanium dioxide, and magnesium oxide, have been ...

Generation of Greater Bacterial Biofilm Biomass using PCR-Plate Deep Well Microplate Devices

Bacterial biofilms are difficult to eradicate from surfaces using conventional antimicrobial interventions. High-throughput 96-well microplate methods are frequently used to cultivate bacterial biofilms for rapid antimicrobial susceptibility testing to calculate minimal biofilm eradication concentration (MBEC) values. Standard biofilm devices consist of polystyrene pegged-lids fitted to 96-well microplates and are ideal for measuring biofilm biomass and MBEC values, but these devices are limited by available peg surface area for biomass accumulation and cost. Here, we outline a protocol to use self-assembled polypropylene 96-well deep well PCR-plate pegged-lid device to grow Escherichia coli BW25113 and Pseudomonas aeruginosa PAO1 biofilms. A comparison of 24-hour biofilms formed on standard and deep well devices by each species using crystal violet biomass staining and MBEC determination assays are described. The larger surface area of deep well devices expectedly increased overall biofilm formation by both species 2-4-fold. P. aeruginosa formed significantly greater biomass/mm2 on deep well pegs as compared to the standard device. E. coli had greater biomass/mm2 on standard polystyrene devices as compared the deep well device. Biofilm eradication assays with disinfectants such as sodium hypochlorite (bleach) or benzalkonium chloride (BZK) showed that both compounds could eliminate E. coli and P. aeruginosa biofilms from both devices but at different MBEC values. BZK biofilm eradication resulted in variable E. coli MBEC values between devices, however, bleach demonstrated reproducible MBEC values for both species and devices. This study provides a high throughput deep well method for growing larger quantities of biofilms on polypropylene devices for downstream studies requiring higher amounts of static biofilm.

This protocol presents methodology to perform biofilm growth and biomass measurements using self-assembled deep well PCR-plate devices for high-throughput 96-well pegged lid static biofilm screening.

Generazione di biomassa di biofilm batterico maggiore utilizzando dispositivi a micropiastra profonda a piastra PCR

Bacterial biofilms are difficult to eradicate from surfaces using conventional antimicrobial interventions. High-throughput 96-well microplate methods are ...

<meta charset="utf8"></head><body>Modello CF adattabile per test antimicrobici e analisi della dinamica microbica

Development of a Polymicrobial Colony Biofilm Model to Test Antimicrobials in Cystic Fibrosis

A range of bacteria biofilm models exist for the testing of antibiotics. However, many of these are limited to a single experimental output, such as colony-forming units or metabolic activity. Furthermore, many biofilm models do not reflect the biological and physiochemical properties of the human host environment. This is an important issue in many conditions, but most noticeably in cystic fibrosis (CF). A large proportion of people with CF suffer from both chronic and intermittent infections, and in vitro, antibiotic susceptibility testing poorly correlates with patient treatment outcomes. Some biofilm models incorporate CF lung-relevant media, including synthetic sputum mimics, but do not consider the polymicrobial nature of the environment, which alters biofilm architecture, physiology, and the way microbes respond to treatment. The solid-air interface colony biofilm model described here is highly adaptable and incorporates both CF-relevant media and a polymicrobial context. This model can also be used for mid-throughput screening of antimicrobials and to study their effect on polymicrobial dynamics. Output measurements from the model can be colony-forming units, metabolic activity, and confocal microscopy analysis. The model can easily be adapted to different microorganisms, media, temperatures, and variable oxygen conditions and can be used to test a wide range of chemical, biological, and physical treatments.

<meta charset="utf8"></head><body>Sviluppo di un modello di biofilm di colonia polimicrobica per testare gli antimicrobici nella fibrosi cistica

This methodology allows for the establishment of a polymicrobial biofilm model in cystic fibrosis for antimicrobial sensitivity testing in research and clinical laboratories. This model provides accurate and reliable results over a range of outputs.

Sviluppo di un modello di biofilm di colonia polimicrobica per testare gli antimicrobici nella fibrosi cistica

A range of bacteria biofilm models exist for the testing of antibiotics. However, many of these are limited to a single experimental output, such as ...

Stabilire la concentrazione battericida minima di un agente antimicrobico per cellule planctoniche (MBC-P) e cellule biofilm (MBC-B)

Riepilogo

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Uso di un terreno dell'espettorato artificiale per testare l'efficacia degli antibiotici contro

Turbativa Anti-virulento di patogeni biofilm utilizzando Engineered Quorum-tempra Lactonases

Targeting biofilm Associated

Metodologie per lo studio

Una piattaforma di test anti-biofilm Adatto per l'esplorazione del Biblioteche composto naturale

Profilazione metabolica per determinare gli effetti batterici o batteriosfondi dei nuovi prodotti naturali utilizzando la microcalorimetria isotermica

Valutazione delle attività antimicrobiche di nanoparticelle e superfici nanostrutturate in vitro

Generazione di biomassa di biofilm batterico maggiore utilizzando dispositivi a micropiastra profonda a piastra PCR

Sviluppo di un modello di biofilm di colonia polimicrobica per testare gli antimicrobici nella fibrosi cistica

Sviluppo di un modello di biofilm di colonia polimicrobica per testare gli antimicrobici nella fibrosi cistica