Gli autori desiderano ringraziare te Kim Yates, Eileen Franklin, e Rebecca Tjepkema (cura degli animali e servizi veterinari, Università di Ottawa) per l&#39;assistenza con interventi chirurgici su animali. Lee-Hwa Tai è supportato da un Fonds de recherche santé Quebec Fellowship. Questo lavoro è stato sostenuto da contributi in conto esercizio della Canadian Cancer Society Research Institute innovazione Grant, Ontario Ministero della Ricerca e Sviluppo Ricercatore Primo Premio, e Canadian Foundation for Innovation - Leader Opportunity di Grant a Rebecca Auer.

1. Mantenere 4T1 cellule tumorali in vitro <ol><li> Cultura modificate cellule tumorali 4T1 in DMEM completo (DMEM 10% FBS, 1x penicillina / streptomicina) in 10 centimetri di tessuto piastre di coltura. Incubare a 37 ° C, 5% CO 2 tessuto cultura incubatore. </li><li> Culture Split 2-3 volte / settimana. Per mantenere le cellule redditività ottimale non dovrebbe superare l&#39;80% di confluenza. Non utilizzare le cellule per l&#39;istituzione di tumori primari in vivo se culture sono state posto in vitro for&gt; 1 mese come questo riduce neoplasia e il potenziale metastatico delle cellule in precedenza diversi passaggi. </li></ol> 2. Raccolta 4T1 cellule tumorali per iniezione <ol><li> Aspirare il mezzo di coltura dalla piastra di coltura tissutale con una pipetta Pasteur. </li><li> Aggiungere 10 ml di 1x PBS sterile contenente 2 ml di EDTA. Sia la soluzione PBS incubare nella piastra a 37 ° C, 5% CO 2 incubatore per coltura tissutale 5-7 min. </li><li> Soluzione Harvest PBS dalla piastra, rinsing la piastra 2-3x con la soluzione, trasferire 15 ml tubo conico. </li><li> Cellule di centrifugazione per 5 min a 500 xg, a 4 ° C, in una centrifuga da banco. </li><li> Aspirare il surnatante e risospendere il pellet di cellule in DMEM privo di siero. </li><li> Determinare la concentrazione cellulare mediante un contatore di cella. </li><li> Diluire le cellule con terreno privo di siero di 1x10 6 cells/500 microlitri (1x10 5 cells/50 microlitri (per le celle di iniezione e posto sul ghiaccio. </li></ol> 3. Iniettare topi con 4T1 cellule tumorali Tutti gli studi effettuati sugli animali erano in conformità con le linee guida istituzionali a cura degli animali Servizi Veterinari dell &#39;Università di Ottawa raccomandazioni per tutti gli animali trattati con iniezioni ortotopici o impianti tumorali. <ol><li> Trattare topi per via sottocutanea con buprenorfina (0,05 mg / kg) 1 ora prima dell&#39;intervento chirurgico per la gestione del dolore. </li><li> Indurre e mantenere topo sotto anestesia con isoflurano 2,5% durante la durata della iniezionezione. Stringere la zampa del mouse per rilevare risposta riflessa. Se viene rilevata nessuna, livelli anestesia efficaci sono raggiunti. Sterile lubrificante occhio viene poi applicato per prevenire l&#39;essiccazione della cornea. </li><li> Caricare un 30 G ½ in siringa &quot;Ultra-fine&quot; proprio con 50 ml di cellule di sospensione. Assicurarsi che tutte le bolle d&#39;aria vengono rimosse dalla colonna siringa toccando il lato della siringa per rimuovere le bolle d&#39;aria. </li><li> Posizionare il mouse (sotto anestesia) ventrale verso l&#39;alto. </li><li> Pulire il sito di iniezione con il tampone con alcol e introdurre l&#39;ago orizzontalmente e direttamente nella 4a pad grasso mammario, lentamente dispensare il volume della siringa. </li><li> Usare un tampone di cotone per pulire eventuali perdite. </li><li> Consentire topi per recuperare da anestesia. </li><li> Mantenere buprenorfina (0,05 mg / kg) per la gestione del dolore sc somministrati ogni 8 ore per 2 giorni. </li></ol> 4. Amministrazione perioperatoria trattamento in 4T1 tumore Cuscinetto BALB / c Mice <ol><li> Con 13 giorni di iniezione cellula post-tumore, misurare il tumore primario utilizzando una pinza esterna. Misurare il diametro longitudinale (lunghezza) e la maggior diametro trasversale (larghezza) con la pinza. La formula ellissoidale modificata viene utilizzata per calcolare il volume del tumore (volume del tumore = 1/2 (lunghezza Ã larghezza 2) </li><li> A 13 giorni di iniezione cellula post-tumore, il tumore primario dovrebbe misurare circa 1 cm 3. Quando questa misura tumore è raggiunto, preparare perioperatoria reagente terapia. </li><li> Virus oncolitici è una terapia innovativa che si può gestire nel periodo perioperatorio. Preparare virus oncolitici (1x10 9 PFU / 1 ml) in 1x PBS sterile e posto sul ghiaccio prima dell&#39;iniezione. </li><li> Sicuro e posto del mousein restrainer per l&#39;iniezione coda vena endovenosa. </li><li> Riscaldare delicatamente coda di topo in acqua tiepida per visualizzare le vene coda laterali. </li><li> Caricare un 27 G ½ in &quot;Siringa&quot;, proprio con 100 ml di terapia virus oncolitici. Assicurarsi che tutte le bolle d&#39;aria vengono rimosse dalla colonna siringa. </li><li> Iniettare il mouse con 1x10 8 PFU/100 microlitri / mouse a una delle vene coda laterali. Se l&#39;ago è opportunamente inserito in una vena laterale, nessuna resistenza deve essere sentito quando si preme la siringa. </li></ol> 5. Resezione completa del tumore primario e addominale sinistra nefrectomia <ol><li> A 14 giorni di iniezione cellula post-tumorale, di avviare l&#39;assistenza perioperatoria di routine seguente Università di Ottawa cura degli animali e Servizio Veterinario protocolli approvati. Trattare topi per via sottocutanea con buprenorfina (0,05 mg / kg) 1 ora prima dell&#39;intervento chirurgico per la gestione del dolore. Indurre e mantenere l&#39;anestesia con isoflurano 2,5% durante l&#39;intervento chirurgico. Under condizioni e utilizzando gli strumenti chirurgici sterili sterilizzati, sito chirurgico è rasato e rimosso. Gli animali vengono somministrati liquidi per via sottocutanea e lubrificante occhio prima di un intervento chirurgico. </li><li> Fai una piccola incisione (1-2 cm di lunghezza) per rimuovere delicatamente e completamente il primario 4T1 tumore del cuscinetto adiposo mammario. </li><li> Chiudere l&#39;incisione con 2-3 9 millimetri graffette. </li><li> Esporre l&#39;addome tagliando attraverso la pelle e lo strato sottocutaneo lungo la linea mediana ventrale del mouse. </li><li> Effettuare una incisione alla linea alba (3-4 cm) per accedere topo peritoneo. </li><li> Esporre il lato interno sinistro dell&#39;addome muovendo le viscere sovrastanti a lato. Assicurarsi che gli intestini sono tenuto umido con una soluzione salina imbevuta garza sterile. </li><li> Usando un paio di pinze chirurgiche smussato, afferrare il rene sinistro delicatamente. </li><li> Utilizzando una sutura di seta intrecciata rivestita 3-0 cera legato in un ciclo, legare l&#39;ilo del rene sinistro e fissare con 3 nodi chirurgici. Rimuovere il rene sinistro con surgiforbici cal. </li><li> Controllare attentamente il legame sutura per garantire che un&#39;adeguata emostasi è raggiunto. </li><li> Chiudere lo strato sottocutaneo con una sutura ciclo continuo utilizzando 5-0 intrecciata assorbibile, strato di pelle allora fiocco con 9 millimetri graffette. I passaggi 5,2-5,10 dovrebbe richiedere 10 min / animale. </li><li> Mantenere buprenorfina (0,05 mg / kg) per la gestione del dolore sc somministrati ogni 8 ore per 2 giorni. </li></ol> 6. I topi eutanasia e Lavorazione e quantificazione dei polmoni Tumore Burden <ol><li> A 28 giorni post-4T1 iniezione di tumore, i topi eutanasia secondo il protocollo cura degli animali e servizi veterinari presso l&#39;Università di Ottawa. </li><li> Spray giù il mouse con il 70% di etanolo. </li><li> Fai incisione iniziale con le forbici appena sotto la gabbia toracica. </li><li> Esporre il torace tagliando attraverso la pelle e lo strato sottocutaneo lungo la linea mediana ventrale della cavità toracica del mouse. </li><li> Fai incisioni laterali attraverso la pelle e il tessuto su ogni lato fino alla neck del mouse. </li><li> Sezionare i polmoni afferrando delicatamente il polmone mentre tagliandole il tessuto connettivo sopra e sotto i polmoni. </li><li> Presoak estratto polmoni in PBS freddo per rimuovere i residui di sangue, quindi collocare nel 10% formalina tamponata. </li><li> Fotografare ogni polmone per la valutazione delle metastasi tumorali. Pesare i polmoni per carico tumorale quantificazione. </li></ol>

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H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perioperative+influenza+vaccination+reduces+post-operative+metastatic+disease+by+reversing+surgery-induced+dysfunction+in+natural+killer+cells.">Perioperative influenza vaccination reduces post-operative metastatic disease by reversing surgery-induced dysfunction in natural killer cells.</a> Clin Cancer Res. , (2013).</li></ol>

Gli autori dichiarano interessi finanziari concorrenti.

La resezione chirurgica è il cardine della terapia per i pazienti con tumori solidi localizzati. Anche con resezione completa, molti pazienti sviluppano una recidiva metastatica e, infine, muoiono della loro malattia. Postoperatorio fornisce un ambiente ideale per la formazione di metastasi tumorali, modulata, in gran parte, dalla soppressione postoperatoria cellule NK. Nonostante questo, rimane una finestra terapeutica che è largamente ignorato. Non ci sono terapie standard anti-cancro perioperatorie volti a prevenire le metastasi postoperatorie. La sfida attuale è quella di identificare terapie sicure e promettenti che si attiveranno le cellule NK nel periodo perioperatorio impedendo così la creazione di malattia micrometastatica. Queste terapie devono essere rigorosamente caratterizzati per la sicurezza e l&#39;efficacia in modelli animali preclinici e poi tradotti in studi clinici studiati. Il rapporto primarionale di sviluppare un modello di tumore murino di stress chirurgico è esplorare meccanismi di soppressione immunitaria e diffusione metastatica dopo intervento chirurgico e per valutare immunoterapie innovative con potenziale per un uso futuro nei pazienti oncologici sottoposti a chirurgia per rimuovere il tumore primario. Per raggiungere questo obiettivo, un modello murino 4T1 carcinoma mammario accoppiato con stress chirurgico è stato sviluppato. Mentre la linea cellulare 4T1 è un murino &quot;carcinoma mammario&quot;, la ragione per usare questa linea cellulare è la riproducibilità delle metastasi spontanee che ci permette di valutare gli effetti dello stress chirurgico in un modello di cancro realistica. In questo contesto, la vera origine del tumore maligno è meno importante del potenziale metastatico e biologia del tumore. Il secondo componente fondamentale del nostro modello è lo sviluppo di una procedura chirurgica animale per assomigliare chirurgia del cancro umano. In questo modello animale stress chirurgico, il primario 4T1 tumore al seno viene asportato dopo che raggiungerà 1 cm3. Perchéambulatori del cancro in pazienti umani comportano una significativa soppressione immunitaria, una nefrectomia aperto l&#39;addome in &quot;stress chirurgico&quot; gruppi di trattamento viene eseguito in aggiunta. Come si confronta con più resezione del tumore convenzionali negli esseri umani, la natura invasiva di una nefrectomia completamente a sinistra è molto paragonabile a numerosi tipi di trattamenti chirurgici per tumori solidi, compresa la chirurgia per cancro colorettale, cancro ovarico, tumore del rene, cancro del pancreas, del polmone e dell&#39;esofago cancro. Inoltre, vorremmo sostenere che i profondi cambiamenti fisiologici che si verificano nel periodo perioperatorio, a causa di laparotomia + nefrectomia, riproduce in modo adeguato i cambiamenti fisiologici travolgente che si verificano in seguito a chirurgia invasiva per la maggior parte dei tumori solidi. Per controllare i fattori perioperatorie che potrebbero portare ad un eccessivo stress chirurgico e la mortalità, la durata dell&#39;anestesia e della chirurgia e mantenere la temperatura corporea durante l&#39;intervento chirurgico è definito con precisione. Tutti questi parametri vengono eseguiti con precisione und definito nel nostro protocollo chirurgico per rispecchiare l&#39;assistenza perioperatoria di routine in pazienti con cancro umano. La tempistica dei trattamenti perioperatoria è un componente fondamentale aggiuntivo per il modello soccorso perioperatorio. Topi portatori di tumore 4T1 sono stati precedentemente trattati con 3 regimi di vaccino antinfluenzale: neoadiuvante (dato 5 giorni prima dell&#39;intervento), perioperatoria (data lo stesso giorno dell&#39;intervento) e perioperatoria + multidose (dato il giorno dell&#39;intervento, seguiti da 2 dosi aggiuntive dato 5 giorni di distanza). Sorprendentemente, tutte e 3 le modalità di trattamento vaccino sono diminuite significativamente metastasi polmonari 22. Tuttavia, vaccino antinfluenzale somministrato nel periodo perioperatorio in dose singola metastasi ridotte in modo più efficace. Collettivamente, questi esperimenti sottolineano l&#39;importanza del periodo perioperatorio immediato come una stretta finestra terapeutica per intervenire nel processo metastatico. Uso perioperatorio di immunoterapie innovative come oncolyvirus tic e vaccini sono stati esclusivamente limitati al nostro gruppo di ricerca. Abbiamo dimostrato per la prima volta che la somministrazione perioperatoria del romanzo ORF oncolytic e vaccinia virus in grado di invertire la soppressione delle cellule NK dopo intervento chirurgico in modelli animali 1. Ancora più importante, questo salvataggio della funzione immunitaria correla con una riduzione della formazione di metastasi postoperatorio. Negli studi sugli esseri umani, pazienti sottoposti a chirurgia del cancro postoperatorio avevano ridotto la citotossicità delle cellule NK e perioperatoria OV aumenta notevolmente l&#39;attività delle cellule NK nei pazienti oncologici 1. Utilizzando disponibili in commercio vaccini profilattici, abbiamo dimostrato che la somministrazione di vaccino antinfluenzale perioperatoria ha ridotto significativamente le metastasi tumorali e migliorato citotossicità delle cellule NK in modelli tumorali preclinici. Negli studi sugli esseri umani, il vaccino influenzale migliorato significativamente l&#39;attività delle cellule NK in donatori umani sani e pazienti della chirurgia del cancro 22. Molti approcci sono utilizzati per ridurre cancer la ricorrenza, tra cui la chemioterapia e le radiazioni, ma queste terapie sono di solito somministrati settimane a mesi prima (neoadiuvante) o dopo (adiuvante) Chirurgia. La ricerca in questo campo mostra che il periodo post-operatorio immediato è fondamentale nel determinare a lungo termine i tassi di recidiva del tumore. Pertanto, interventi clinici in forma di immunoterapie durante questo periodo critico possono avere benefici sostanziali a lungo termine. I nostri studi utilizzando un modello murino di metastasi polmonari spontanea e stress chirurgico offrono un&#39;opportunità unica di esplorare nuove terapie e determinare il loro potenziale per prevenire immunosoppressione perioperatoria in pazienti sottoposti a chirurgia del cancro e ridurre così anche il cancro tassi di recidiva.

La chirurgia è una componente fondamentale nel trattamento del cancro curativo dei tumori solidi, ma nonostante la resezione completa, molti pazienti sviluppano una recidiva metastatica e, infine, muoiono della loro malattia. Sempre più spesso, il periodo postoperatorio, a seguito della risposta allo stress fisiologico, chirurgia, compresa la coagulazione del sangue, il rilascio di fattori di crescita, e soppressione immunitaria, è riconosciuto come momento critico per lo sviluppo di metastasi. Il nostro gruppo 1,2 e altri 3-5 hanno dimostrato che postoperatorio è un momento unico suscettibile alla formazione di metastasi. Uno dei meccanismi principali responsabili degli effetti prometastatic della chirurgia è la disfunzione postoperatoria dei Natural Killer (NK) 1-3. Cellule NK sono linfociti citotossici del sistema immune innato coinvolto nel controllo della crescita tumorale e metastasi 6. Disfunzione delle cellule NK dopo intervento chirurgico è stato documentato in sia pazienti umani 1,7-9 e modelli animali 1,10,11. Soppressione delle cellule NK postoperatoria correla con un aumento metastasi in modelli animali di spontanei e impiantati metastasi 1,11-14, mentre negli studi umani, bassa attività NK durante il periodo perioperatorio è associata ad un più alto tasso di ricorrenza del cancro e della mortalità 15,16. Nonostante questo, attualmente non esistono terapie oncologiche affrontare specificamente le modifiche prometastatic che si verificano immediatamente dopo la chirurgia del cancro. Il periodo perioperatorio rappresenta una finestra di opportunità terapeutica in cui intervenire nel processo metastatico. Mentre terapie oncologiche tradizionali, come la chemioterapia citotossica, sono considerati troppo tossico per essere somministrato a pazienti sottoposti a interventi di chirurgia maggiore 17, terapie immunitarie sono candidati ideali per la somministrazione perioperatoria. Impiego perioperatorio dei ricombinante IL-2 e IFN-Î ³ sono stati esplorati in fase iniziale studi clinici che dimostrano il loro potenziale per impedire la soppressione post-operatorio delle cellule NK e migliorare la sopravvivenza libera da progressione 18-21. Purtroppo, l&#39;ulteriore sviluppo è stato ostacolato da tollerabilità di questa terapia con citochine aspecifica combinata con interventi di chirurgia maggiore 17. I virus sono potenti attivatori non specifici delle cellule NK. La nostra ricerca ha già dimostrato che la somministrazione preoperatoria di virus replicanti, come il romanzo anti-cancro Oncolytic virus (OV), e nonreplicating vaccini virali, come vaccino contro l&#39;influenza, può inibire la disfunzione delle cellule NK chirurgia indotta e attenuare la malattia metastatica 1,22. Il modello chirurgico descritto in questo documento ha facilitato la nostra comprensione dei meccanismi coinvolti nella diffusione e la crescita delle cellule tumorali dopo l&#39;intervento chirurgico e ci ha permesso di esplorare nuove terapie mirate che possono essere somministrati nel periodo perioperatorio. Per raggiungere questo obiettivo, un animalemodello di stress chirurgico e spontanea metastasi batuffolo sviluppato. Il modello fa uso di carcinoma del seno topo (BALB / c 4T1 -) che sono in grado di metastatizzare spontaneamente dalla ghiandola mammaria primario a più siti distanti in particolare i polmoni. Al giorno 0, le cellule di cancro al seno sono impiantati nel mouse pad grasso del seno. Al 14 ° giorno dopo l&#39;impianto del tumore, una resezione completa del tumore mammario primario viene eseguita in tutti gli animali. Un sottoinsieme di animali riceve stress chirurgico supplementare, sotto forma di una nefrectomia addominale. Al giorno 28, noduli tumorali del polmone in chirurgicamente stressati e senza topi di controllo chirurgia confronto sono isolati e quantificati. In questo modello animale di cancro e chirurgia, gli effetti della chirurgia sulle metastasi tumorali sono allo studio e l&#39;efficacia della somministrazione perioperatoria di immunoterapie innovative, tra cui la replica e nonreplicating immuno-stimolanti a base virale sono testati per la prima volta.

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	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td style="width:111px;">Corning Cell-Gro</td>
			<td style="width:153px;">10-013-CV</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Inactivated Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:111px;">HyClone</td>
			<td style="width:153px;">SH30396.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:111px;">Gibco</td>
			<td style="width:153px;">15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">1X sterile Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:111px;">Corning cell gro</td>
			<td style="width:153px;">21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Buprenorphine</td>
			<td style="width:111px;">Chiron, Guelph</td>
			<td style="width:153px;">RXN309968</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Isofluorane</td>
			<td style="width:111px;">Baxter Corp</td>
			<td>1001936040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1/2 ultra-fine syringe</td>
			<td style="width:111px;">Terumo</td>
			<td>30 Gauge, SS05M3009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">9mm staples</td>
			<td style="width:111px;">Braintree</td>
			<td style="width:153px;">ACS BX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">5-0 braided absorbable suture</td>
			<td style="width:111px;">Covidien</td>
			<td style="width:153px;">UL-202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">3-0 wax braided silk suture</td>
			<td style="width:111px;">Covidien</td>
			<td style="width:153px;">S-194</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Formalin</td>
			<td style="width:111px;">Fisher</td>
			<td style="width:153px;">SF100-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">4T1 tumor cells</td>
			<td style="width:111px;">ATCC</td>
			<td style="width:153px;">CRL-2539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">BALB/c</td>
			<td style="width:111px;">Charles Rivers Labs</td>
			<td style="width:153px;">Strain Code:028</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse tumor model of surgical stress to explore the mechanisms of postoperative immunosuppression and evaluate novel perioperative immunotherapies

La resezione chirurgica è un trattamento essenziale per molti pazienti, ma la chirurgia induce disfunzione del sistema immunitario e questo è stato collegato allo sviluppo della malattia metastatica in modelli animali e in pazienti affetti da cancro. Lavoro preclinico dal nostro gruppo e altri ha dimostrato una profonda soppressione della funzione immunitaria innata, in particolare le cellule NK nel periodo postoperatorio e questo gioca un ruolo importante nella maggiore sviluppo delle metastasi dopo l&#39;intervento. Relativamente pochi studi sugli animali e studi clinici si sono concentrati sulla caratterizzazione e invertire gli effetti negativi di chirurgia del cancro. Utilizzando un modello rigoroso di tumori spontaneamente metastatizzanti e stress chirurgico animale, il miglioramento della chirurgia del cancro sullo sviluppo delle metastasi polmonari è stata dimostrata. In questo modello, le cellule del cancro al seno 4T1 vengono impiantati nel topo cuscinetto adiposo mammario. Al 14 ° giorno dopo l&#39;impianto del tumore, una resezione completa del tumore mammario primario è esibirannod in tutti gli animali. Un sottoinsieme di animali riceve stress chirurgico supplementare, sotto forma di una nefrectomia addominale. Al giorno 28, noduli tumorali del polmone sono quantificati. Quando immunoterapia stato dato immediatamente preoperatoria, è stata rilevata una profonda attivazione delle cellule immunitarie che ha impedito lo sviluppo di metastasi dopo chirurgia. Mentre il modello chirurgia del tumore al seno 4T1 permette la simulazione degli effetti di stress chirurgico addominale sulle metastasi tumorali, la sua applicabilità ad altri tipi di tumore deve essere testato. La sfida attuale è quella di identificare immunoterapie sicure e promettenti in modelli preclinici mouse e di tradurle in terapia perioperatoria vitali da dare ai pazienti di chirurgia del cancro per prevenire la recidiva della malattia metastatica.

È stato sviluppato un modello riproducibile topo di stress chirurgico che nel drammatico aumento delle metastasi polmonari. Al giorno 28 dopo 4T1 inoculazione del tumore (e 14 giorni dopo resezione del tumore + / - nefrectomia addominale), i polmoni sono stati raccolti e visualizzati per le metastasi. Chirurgia chiaramente aumenta la quantità di metastasi polmonari rispetto ai topi non trattati come dimostrato dalle fotografie polmonari (Figura 1A), la conta di noduli polmonari (Figura 1B) e peso polmonare (Figura 1C). La somministrazione preoperatoria di replicare il virus oncolitici e del vaccino antinfluenzale inattivato salva significativamente gli effetti prometastatic di chirurgia del cancro (Figure 1A-C). Per determinare se le cellule NK svolgono un ruolo di mediazione nel prevenire metastasi trattamento post-vaccino, cellule NK sono stati esauriti farmacologicamente utilizzando anti-asialo-GM-1 nel modello di metastasi tumorale. In assenza di NKcellule, abbiamo osservato una abrogazione dell&#39;effetto terapeutico di immunoterapie perioperatori (Figure 2A e 2B). Questi dati suggeriscono che la rimozione metastasi tumorali nel nostro modello stress chirurgico è mediata principalmente attraverso virus e il vaccino oncolytic l&#39;attivazione delle cellule NK e conseguente lisi tumorale NK mediata. Per caratterizzare ulteriormente la funzione delle cellule NK in seguito alla somministrazione perioperatoria di virus oncolitici e vaccino contro l&#39;influenza, è stata valutata ex-vivo uccisione delle cellule NK. In breve, riunite e filtrate DX5 + cellule NK sono state isolate da splenociti di chirurgicamente stressati e topi di controllo. Sono stati co-coltivate per 4 ore con cromo marcato YAC-1 le cellule bersaglio, a diversi Effector a Target rapporti, seguita da misurazione del surnatante rilascio di cromo con un contatore gamma. Un significativo intervento chirurgico difetto indotto citotossicità delle cellule NK insieme ad un significativo recupero di NK uccisione a seguito della somministrazione perioperatoria di virus oncolitici e inflvaccino uenza rispetto alla sola chirurgia è stato osservato (Figure 2C e 2D). Presi insieme, questi risultati dimostrano che la soppressione delle cellule NK perioperatorio può essere trattata con successo e malattia metastatica ridotta con nuove terapie immunostimolanti. <img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51253/51253fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51253/51253fig1.jpg" /> Figura 1. Anti-cancro e virus influenzale vaccino oncolytic romanzo come terapia perioperatoria contro la chirurgia indotta valorizzazione delle metastasi polmonari. Valutazione di 4T1 metastasi del tumore al polmone al giorno 28 di gruppi di trattamento indicati da (A) fotografie di polmoni rappresentative, (B) enumerazione di tumore al polmone noduli e (C) pesi polmonari. I dati sono rappresentativi di 3 esperimenti simili con n = 5-10/group (*, p = 0.01; **, p &lt;0.0001;<html> ns, non significativo). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51253/51253fig1highres.jpg" target="_blank">cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51253/51253fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51253/51253fig2.jpg" /> Figura 2. Stress chirurgico aumenta polmone metastasi tumorali alterando cellule NK. (A, B) Quantificazione del polmone metastasi tumorali chirurgicamente sottolineato topi trattati con nuova terapia perioperatoria. (C, D) La capacità di DX5 purificato + cellule NK da chirurgicamente stressato e controlli non trattati per uccidere le cellule tumorali. I dati vengono visualizzati come la percentuale media (+ / - SD), del rilascio di cromo dai pozzi triplicato per l&#39;indicato E: T rapporti. I dati sono rappresentativi di 3 esperimenti simili dove n = 4-5/group (*, p = 0.01; **, p &lt;0,005, ns, non significativo)./ Www.jove.com/files/ftp_upload/51253/51253fig2highres.jpg &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.

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A Mouse Tumor Model of Surgical Stress to Explore the Mechanisms of Postoperative Immunosuppression and Evaluate Novel Perioperative Immunotherapies

Un modello di tumore di topo di stress chirurgico viene utilizzato per esplorare come postoperatorio soppressione immunitaria promuove la malattia metastatica e per valutare le terapie perioperatorie immunostimolante.

Un tumore modello murino di stress chirurgico per esplorare i meccanismi di immunosoppressione post-operatorio e valutare Novel perioperatoria Immunoterapie

Surgical resection is an essential treatment for most cancer patients, but surgery induces dysfunction in the immune system and this has been linked to ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

29.8K Views.  Ottawa Hospital Research Institute.  Un modello di tumore di topo di stress chirurgico viene utilizzato per esplorare come postoperatorio soppressione immunitaria promuove la malattia metastatica e per valutare le terapie perioperatorie immunostimolante. 

Video: A Mouse Tumor Model of Surgical Stress to Explore the Mechanisms of Postoperative Immunosuppression and Evaluate Novel Perioperative Immunotherapies

Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens

The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined by current drug efficacy tests and the efficacy on patients. Thus, novel and reliable methods for evaluating drug efficacy are warranted in pre-clinical phase. In vitro culture of tumor tissues, including cell lines, has substantial phenotypic, genetic, and epigenetic alterations of cancer cells caused by artificial environment of cell culture, which may not reflect the biology of original tumors in situ. Xenograft models with the immunodeficient mice also have limitations, i.e., the lack of immune system and interspecies genetic and epigenetic discrepancies in microenvironment. Here, we demonstrate a novel method using the surgical specimens of malignant glioma as undissociated tumor blocks to evaluate treatment effects. To validate this method, data with the current first-line chemotherapeutic agent, temozolomide (TMZ), are described.


We used the freshly-removed surgical specimen of malignant glioma for our experiments. We performed intratumoral injection of TMZ or other drug candidates, followed by incubation and analysis on surgical specimens. Here, we sought to establish a tumor tissue explant method as a platform to determine the efficacy of novel anti-cancer therapies so that we may be able to overcome, at least, some of the current limitations and fill the existing gap between the current experimental data and the efficacy on an actual patient's tumor. This method may have the potential to accelerate identifying novel chemotherapeutic agents for solid cancer treatment.

Here, we established a method for drug efficacy testing with surgical specimens of brain tumors, termed &#x201C;tumor explant method&#x201D;. With this method, we can evaluate drug efficacy without breaking the microenvironment of solid tumors. To validate reliability of this method, we describe representative data with our glioma specimen treated with the current first-line chemotherapeutic agent, temozolomide.

Metodo per Novel Anti-Cancer Drug Development utilizzando Espianti Tumore di campioni chirurgici


The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined ...

Ricerca

Medicina

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused by whole-body hypoperfusion.5,6 Successful reproduction of whole-body hypoperfusion in rodent models has been fraught with 
difficulty.7-9,9,10 Models which employ focal ischemia have repeatedly demonstrated results which do not translate to the clinical setting, and larger 
animal models which allow for whole body hypoperfusion lack access to the full toolset of genetic manipulation possible in the mouse.11,12 However, in recent 
years a mouse model of cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation has emerged which can be adapted to model AKI.13 This model reliably reproduces 
physiologic, functional, anatomic, and histologic outcomes seen in clinical AKI, is rapidly repeatable, and offers all of the significant advantages of a murine surgical 
model, including access to genetic manipulative techniques, low cost relative to large animals, and ease of use. Our group has developed extensive experience 
with use of this model to assess a number of organ-specific outcomes in AKI.14,15

A powerful model for perioperative and critical care related acute kidney injury is presented. Using whole body hypoperfusion induced by cardiac arrest it is possible to nearly replicate the histologic and functional changes of clinical AKI.

Normotermico arresto cardiaco e rianimazione cardiopolmonare: un modello murino di ischemia-riperfusione

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our understanding of the mechanisms underlying parkinsonian symptoms, since it recapitulates the changes in basal ganglia circuitry and pharmacology observed in parkinsonian patients1-4. However, the precise cellular and molecular changes occurring at cortico-striatal synapses of the output pathways within the striatum, which is the major input region of the basal ganglia remain elusive, and this is believed to be site where pathological abnormalities underlying parkinsonian symptoms arise3,5.
In PD, understanding the mechanisms underlying changes in basal ganglia circuitry following degeneration of the nigro-striatal pathway has been greatly advanced by the development of bacterial artificial chromosome (BAC) mice over-expressing green fluorescent proteins driven by promoters specific for the two striatal output pathways (direct pathway: eGFP-D1; indirect pathway: eGFP-D2 and eGFP-A2a)8, allowing them to be studied in isolation. For example, recent studies have suggested that there are pathological changes in synaptic plasticity in parkinsonian mice9,10. However, these studies utilised juvenile mice and acute models of parkinsonism. It is unclear whether the changes described in adult rats with stable 6-OHDA lesions also occur in these models. Other groups have attempted to generate a stable unilaterally-lesioned 6-OHDA adult mouse model of PD by lesioning the medial forebrain bundle (MFB), unfortunately, the mortality rate in this study was extremely high, with only 14% surviving the surgery for 21 days or longer11. More recent studies have generated intra-nigral lesions with both a low mortality rate &gt;80% loss of dopaminergic neurons, however expression of L-DOPA induced dyskinesia11,12,13,14 was variable in these studies. Another well established mouse model of PD is the MPTP-lesioned mouse15. Whilst this model has proven useful in the assessment of potential neuroprotective agents16, it is less suitable for understanding mechanisms underlying symptoms of PD, as this model often fails to induce motor deficits, and shows a wide variability in the extent of lesion17, 18.
Here we have developed a stable unilateral 6-OHDA-lesioned mouse model of PD by direct administration of 6-OHDA into the MFB, which consistently causes &gt;95% loss of striatal dopamine (as measured by HPLC), as well as producing the behavioural imbalances observed in the well characterised unilateral 6-OHDA-lesioned rat model of PD. This newly developed mouse model of PD will prove a valuable tool in understanding the mechanisms underlying generation of parkinsonian symptoms.

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson&#039;s Disease

A protocol for performing unilateral 6-OHDA lesions of the medial forebrain bundle in mice is described. This method has a low mortality rate (13.3 %) with 89% of the surviving animals showing &#62;95% loss of striatal dopamine and 90.63&#177;-4.02 % ipsiversive rotational bias towards the side of the lesion.

Sviluppo di un unilateralmente lesionata 6-OHDA modello murino della malattia di Parkinson

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our ...

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several techniques, including infusion of exogenous bacterial toxin (endotoxemia) or bacteria (bacteremia), as well as surgical perforation of the cecum by cecal ligation and puncture (CLP)1-3. CLP allows bacteria spillage and fecal contamination of the peritoneal cavity, mimicking the human clinical disease of perforated appendicitis or diverticulitis. The severity of sepsis, as reflected by the eventual mortality rates, can be controlled surgically by varying the size of the needle used for cecal puncture2. In animals, CLP induces similar, biphasic hemodynamic cardiovascular, metabolic, and immunological responses as observed during the clinical course of human sepsis3. Thus, the CLP model is considered as one of the most clinically relevant models for experimental sepsis1-3.
Various animal models have been used to elucidate the intricate mechanisms underlying the pathogenesis of experimental sepsis. The lethal consequence of sepsis is attributable partly to an excessive accumulation of early cytokines (such as TNF, IL-1 and IFN-&gamma;)4-6 and late proinflammatory mediators (e.g., HMGB1)7. Compared with early proinflammatory cytokines, late-acting mediators have a wider therapeutic window for clinical applications. For instance, delayed administration of HMGB1-neutralizing antibodies beginning 24 hours after CLP, still rescued mice from lethality8,9, establishing HMGB1 as a late mediator of lethal sepsis. The discovery of HMGB1 as a late-acting mediator has initiated a new field of investigation for the development of sepsis therapies using Traditional Chinese Herbal Medicine. In this paper, we describe a procedure of CLP-induced sepsis, and its usage in screening herbal medicine for HMGB1-targeting therapies.

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection, and can be simulated by a surgical technique termed cecal ligation and puncture (CLP). Here we describe a method to use CLP-induced animal model to screen medicinal herbs for therapeutic agents.

Uso di un modello animale di sepsi per valutare nuove terapie a base di erbe

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and acquired diseases. Apart from congenital or inherited abnormalities with the requirement for long-term expression of the delivered gene, several non-inherited perinatal conditions, where short-term gene expression or pharmacological intervention is sufficient to achieve therapeutic effects, are considered as potential future indications for this kind of approach. Candidate diseases for the application of short-term prenatal therapy could be the transient neonatal deficiency of surfactant protein B causing neonatal respiratory distress syndrome1,2 or hyperoxic injuries of the neonatal lung3. Candidate diseases for permanent therapeutic correction are Cystic Fibrosis (CF)4, genetic variants of surfactant deficiencies5 and &alpha;1-antitrypsin deficiency6.
Generally, an important advantage of prenatal gene therapy is the ability to start therapeutic intervention early in development, at or even prior to clinical manifestations in the patient, thus preventing irreparable damage to the individual. In addition, fetal organs have an increased cell proliferation rate as compared to adult organs, which could allow a more efficient gene or stem cell transfer into the fetus. Furthermore, in utero gene delivery is performed when the individual's immune system is not completely mature. Therefore, transplantation of heterologous cells or supplementation of a non-functional or absent protein with a correct version should not cause immune sensitization to the cell, vector or transgene product, which has recently been proven to be the case with both cellular and genetic therapies7.
In the present study, we investigated the potential to directly target the fetal trachea in a mouse model. This procedure is in use in larger animal models such as rabbits and sheep8, and even in a clinical setting9, but has to date not been performed before in a mouse model. When studying the potential of fetal gene therapy for genetic diseases such as CF, the mouse model is very useful as a first proof-of-concept because of the wide availability of different transgenic mouse strains, the well documented embryogenesis and fetal development, less stringent ethical regulations, short gestation and the large litter size.
Different access routes have been described to target the fetal rodent lung, including intra-amniotic injection10-12, (ultrasound-guided) intrapulmonary injection13,14 and intravenous administration into the yolk sac vessels15,16 or umbilical vein17. Our novel surgical procedure enables researchers to inject the agent of choice directly into the fetal mouse trachea which allows for a more efficient delivery to the airways than existing techniques18.

We developed a novel surgical approach for intratracheal administration of bioactive agents into the mouse fetus. The delivery route is more efficient in targeting the fetal mouse lungs than the commonly used intra-amniotic injection. This procedure has to date not been described in a mouse model.

Un nuovo approccio chirurgico per somministrazione endotracheale di agenti bioattivi in ​​un modello murino fetale

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a novel platform that allows for direct long-term visualization of tissue structure changes intracranially. Imaging at a single cell resolution in a real-time fashion provides supplementary dynamic information beyond that provided by standard end-point histological analysis, which looks solely at 'snap-shot' cross sections of tissue.
Establishing this intravital imaging technique in fluorescent chimeric mice, we are able to image four fluorescent channels simultaneously. By incorporating fluorescently labeled cells, such as GFP+ bone marrow, it is possible to track the fate of these cells studying their long-term migration, integration and differentiation within tissue. Further integration of a secondary reporter cell, such as an mCherry glioma tumor line, allows for characterization of cell:cell interactions. Structural changes in the tissue microenvironment can be highlighted through the addition of intra-vital dyes and antibodies, for example CD31 tagged antibodies and Dextran molecules.
Moreover, we describe the combination of our ICW imaging model with a small animal micro-irradiator that provides stereotactic irradiation, creating a platform through which the dynamic tissue changes that occur following the administration of ionizing irradiation can be assessed.
Current limitations of our model include penetrance of the microscope, which is limited to a depth of up to 900 &mu;m from the sub cortical surface, limiting imaging to the dorsal axis of the brain. The presence of the skull bone makes the ICW a more challenging technical procedure, compared to the more established and utilized chamber models currently used to study mammary tissue and fat pads 5-7. In addition, the ICW provides many challenges when optimizing the imaging.

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We describe a novel in vivo imaging technique that couples fluorescent chimeric mice with intracranial windows and high-resolution 2-photon microscopy. This imaging platform aids studies of dynamic changes in brain tissue and microvasculature, at a single-cell level, following pathological insults and is adaptable to assess intracranial drug delivery and distribution.

Un romanzo ad alta risoluzione<em&gt; In vivo</em&gt; Tecnica di imaging per studiare la risposta dinamica di strutture intracraniche alla crescita del tumore e Terapeutica

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Initiation of Metastatic Breast Carcinoma by Targeting of the Ductal Epithelium with Adenovirus-Cre: A Novel Transgenic Mouse Model of Breast Cancer

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in exponential tumor growth and metastasis to distal tissues and the collapse of anti-tumor immunity. Many useful animal models exist to study breast cancer, but none completely recapitulate the disease progression that occurs in humans. In order to gain a better understanding of the cellular interactions that result in the formation of latent metastasis and decreased survival, we have generated an inducible transgenic mouse model of YFP-expressing ductal carcinoma that develops after sexual maturity in immune-competent mice and is driven by consistent, endocrine-independent oncogene expression. Activation of YFP, ablation of p53, and expression of an oncogenic form of K-ras was achieved by the delivery of an adenovirus expressing Cre-recombinase into the mammary duct of sexually mature, virgin female mice. Tumors begin to appear 6 weeks after the initiation of oncogenic events. After tumors become apparent, they progress slowly for approximately two weeks before they begin to grow exponentially. After 7-8 weeks post-adenovirus injection, vasculature is observed connecting the tumor mass to distal lymph nodes, with eventual lymphovascular invasion of YFP+ tumor cells to the distal axillary lymph nodes. Infiltrating leukocyte populations are similar to those found in human breast carcinomas, including the presence of &#945;&#946; and &#947;&#948; T cells, macrophages and MDSCs. This unique model will facilitate the study of cellular and immunological mechanisms involved in latent metastasis and dormancy in addition to being useful for designing novel immunotherapeutic interventions to treat invasive breast cancer.

Activation of latent mutations with adenovirus-Cre into the mammary ductal system results in a clinically relevant metastatic breast cancer. Incorporation of a YFP promoter allows tracking of distal metastatic tumor cells. This model is useful to study latent metastasis, anti-tumor immunity, and for designing novel immunotherapies to treat breast cancer.

Avvio del carcinoma metastatico della mammella dalla Targeting del duttale con Adenovirus-Cre: A Novel modello di topo transgenico di cancro al seno

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in ...

Isolation and Propagation of Circulating Tumor Cells from a Mouse Cancer Model

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer metastasis. Indeed, the number of CTCs correlates with tumor size. Here, a detailed description is provided of a methodology for isolation and propagation of CTCs from a syngeneic mouse model of hepatocellular carcinoma (HCC) which allows for downstream analysis of potentially important molecular mechanisms of solid organ tumor metastasis. This method is efficient and reproducible. It is a non-invasive technique and, therefore, has potential to replace the invasive biopsy of tissues from humans which may be associated with complications. Therefore, the method discussed here allows for the isolation and propagation of CTCs from whole blood samples such that they can be examined and characterized. This has potential for future adaptation for clinical applications such as diagnosis, and personalized targeted therapy.

Circulating tumor cells (CTCs) have been shown to play an important role in tumor metastasis. Here, a method for the isolation and propagation of CTCs from the whole blood of a syngeneic mouse tumor model of hepatocellular carcinoma (HCC) metastasis is described.

Isolamento e propagazione di cellule tumorali circolanti da un mouse cancro modello

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer ...

A Novel Murine Model of Arteriovenous Fistula Failure: The Surgical Procedure in Detail

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the exact pathophysiology remains unknown. In order to unravel the pathophysiology a murine model of AVF-failure was developed in which the configuration of the anastomosis resembles the preferred situation in the clinical setting. A model was described in which an AVF is created by connecting the venous end of the branch of the external jugular vein to the side of the common carotid artery using interrupted sutures. At a histological level, we observed progressive stenotic intimal lesions in the venous outflow tract that is also seen in failed human AVFs. Although this procedure can be technically challenging due to the small dimensions of the animal, we were able to achieve a surgical success rate of 97% after sufficient training. The key advantage of a murine model is the availability of transgenic animals. In view of the different proposed mechanisms that are responsible for AVF failure, disabling genes that might play a role in vascular remodeling can help us to unravel the complex pathophysiology of AVF failure.

Here we present a murine model of arteriovenous fistula (AVF) failure in which a clinically relevant anastomotic configuration is incorporated. This model can be used to study the pathophysiology and to test possible therapeutic interventions.

A Novel Modello murino di fistola artero-venosa Fallimento: la procedura chirurgica in dettaglio

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the ...

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Conventional imaging techniques can provide detailed information about cellular processes. However, this information is based on static images in an otherwise dynamic system, and successive phases are easily overlooked or misinterpreted. Live-cell imaging and time-lapse microscopy, in which living cells can be followed for hours or even days in a more or less continuous fashion, are therefore very informative. The protocol described here allows for the investigation of the fate of chemotherapeutic nanoparticles after the delivery of doxorubicin (dox) in living cells. Dox is an intercalating agent that must be released from its nanocarrier to become biologically active. In spite of its clinical registration for more than two decades, its uptake, breakdown, and drug release are still not fully understood. This article explores the hypothesis that lipid-based nanoparticles are taken up by the tumor cells and are slowly degraded. Released dox is then translocated to the nucleus. To prevent fixation artifacts, live-cell imaging and time-lapse microscopy, described in this experimental procedure, can be applied.

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Live-cell imaging is a powerful tool to visualize dynamic processes. The examination of fixed cells provides only static pictures, which can lead to misinterpretation and confusion about the process. This work presents a method to study uptake, drug release, and intracellular localization of liposomal nanoparticles in living cells.

Utilizzo In Vitro cellule vive di Imaging per esplorare chemioterapici consegnato da nanoparticelle di basata sui lipidi

Conventional imaging techniques can provide detailed information about cellular processes. However, this information is based on static images in an ...