Questo studio è stato sostenuto da NIH R37 e R01 DK54824 DK57284 sovvenzioni a LB.

Tutte le procedure descritte qui sono approvati dal comitato IACUC presso l&#39;Università di Pittsburgh. 1. Solutions <ol><li> Preparare la soluzione Krebs secondo la ricetta. Composizione in mM: NaCl 118, 4.7 KCl, CaCl 2 1.9, MgSO4 1.2, NaHCO3 24.9, KH 2 PO 4 1.2, destrosio 11.7. </li><li> Aerare Krebs con il 95% O 2, 5% di CO 2 e collocarlo in un bagno di 37 ° C acqua da utilizzare tutto l&#39;esperimento. Inserire parte ~ 200 ml di soluzione di Krebs aerato a temperatura ambiente da utilizzare per dissezione tissutale. </li><li> Misurare il pH (~ 7.4) e osmolarità (~ 300 mOsm) del aerato Krebs. </li></ol> 2 set-up sperimentale (Schema Figura 1A) <ol><li> Riempire aerato (95% O 2, 5% di CO 2) camere con 10 ml di Krebs. </li><li> Avviare la pompa di circolazione per riscaldare le camere a 37 ° C; accendere l&#39;attrezzatura necessaria: amplificatore (s), stimolatore (s) e la registrazione del software. </li><li> Calibrare trasduttori con un peso di 1 g. </li></ol> 3 Tissue (Figura 1B) Rimuovere la vescica da un adulto di sesso femminile ingenuo Sprague Dawley di ratto (200-250 g; ~ 10-12 settimane di età) seguendo questi passi: <ol><li> Preparare zona dissezione e strumenti necessari: rasoi elettrici, pinze con denti, lama di bisturi, forbici dissezione, microscissors, due dissettore (autori preferiscono Dumont pinza 3 #), clip di tessuto (o sutura di seta), un piatto dissezione Sylgard rivestita di Krebs e perni dissezione dei tessuti. </li><li> Anestetizzare l&#39;animale con inalazione isoflurano (4% in O 2) nella camera di induzione. Usare pomata veterinaria sugli occhi per prevenire la secchezza mentre sotto anestesia. Monitorare costantemente il livello di anestesia osservando il tasso di respirazione, risposta a stimoli esterni, e la perdita di un arto posteriore ritirare reflex. </li><li> Quando l&#39;animale è anestetizzato rasatura minore un addominalerea. Esporre gli organi pelvici attraverso una incisione addominale mediana. Identificare la vescica e l&#39;uretra. Rimuovere la vescica tagliando a livello del collo vescicale vicino alla uretra prossimale. Mettere immediatamente il tessuto nel piatto rivestito Sylgard riempito con soluzione di Krebs aerato. </li><li> Se necessario, rimuovere il tessuto supplementare in questo momento: uretra, pezzi di gastrointestinale (GI) e / o della prostata, ecc </li><li> Sacrifica l&#39;animale con metodi approvati IACUC (ad esempio, overdose di anestetico o di CO 2 asfissia seguita da un metodo secondario). </li><li> Inserire i perni dissezione dei tessuti attraverso la cupola della vescica, collo e ureteri, per stabilizzare il tessuto per un&#39;ulteriore dissezione. Non tendere il tessuto. Togliere il grasso, tessuto connettivo, uretra prossimale, e ureteri se presenti. </li><li> Aprire la vescica dalla base alla cupola per creare un foglio piatto, sierosa lato lungo / lato luminale (Figura 1B). Posizionare i perni dissezione su ogni angolo del tessuto. Rimuovere vescica domposta e dei tessuti del collo. </li><li> Se lo scopo di questo esperimento è quello di determinare il contributo della mucosa (urotelio e lamina propria - vedi figura Figura 1C) per la contrazione della muscolatura liscia, confrontare le proprietà di strisce detrusore con e senza la mucosa aderente. Per questo, prima di tagliare il tessuto in strisce, rimuovere con attenzione lo strato mucoso con iris primavera forbici e una pinza sottile sotto un microscopio da dissezione. Alla fine dell&#39;esperimento, fissare le strisce di colorazione H &amp; E per confermare la rimozione completa della mucosa. Si noti che questa procedura è più facile nel topo che nel ratto vescica vescica. </li><li> Tagliare il tessuto della lunghezza dalla base alla cupola in strisce di ~ 2 x 8 mm (Figura 1B). Legare o allegare un clip di tessuto a entrambe le estremità di ogni striscia. NOTA: Un ratto vescica di solito può essere tagliato in 4 strisce, ma il numero di strisce può aumentare o diminuire a seconda delle dimensioni degli animali / vescica. </li><li> Trasferire le strisce al espericamere imental. Attaccare un&#39;estremità di ogni striscia di un trasduttore di forza, che misura la contrazione del tessuto, e l&#39;altra di una bacchetta di vetro / metallo fisso. NOTA: camere di tessuto di dimensioni variabili (da 0,2 ml a 20 ml o più). Camere tipiche per vesciche roditori sono 5-20 ml, che forniscono l&#39;altezza sufficiente per le strisce siano completamente sommersi in soluzione. Alcune camere sono con built-in elettrodi di stimolazione, altri no. Si deve prestare attenzione per assicurare che tutti i collegamenti degli elettrodi sono in buone condizioni, altrimenti la stimolazione di campo elettrico non è affidabile. </li><li> Applicare una quantità definita di forza per ogni striscia di stretching delicatamente il tessuto fino a quando la tensione della linea di base raggiunge 1 g (~ 10 mN). Inizialmente il tessuto tende a rilassarsi che viene registrata come una diminuzione della tensione di riferimento. Tessuto Wash circa ogni 15 minuti con il caldo aerato Krebs e regolare la tensione della linea di base di 1 g dopo ogni lavaggio. Lasciare che il tessuto si stabilizzi per ~ 1-2 ore o fino a quando la tensione della linea di base è stabile (cioè nessuna ulteriore rilassamento dei tessuti). </li><li> Test di vitalità del tessuto con l&#39;aggiunta di KCl (80 mM) direttamente al bagno per ~ 5 minuti, o fino a quando la risposta plateau viene raggiunto. Risposte ad alte concentrazioni di KCl possono essere ripetute durante l&#39;esperimento o alla fine dell&#39;esperimento e utilizzati per normalizzare le risposte ad altri farmaci o tra le strisce (vedi normalizzazione nella sezione di analisi dei dati). </li><li> Tessuto Lavare più volte (3-5x) con il caldo aerato Krebs per consentire al tessuto per tornare alle condizioni pre-trattamento. </li></ol> 4. Stimolazione Protocolli <ol><li> Per studiare gli effetti della patologia sull&#39;attività miogena spontanea o il tono della muscolatura liscia, utilizzare le strisce muscolari lisce di diversi modelli animali, quali SIC, BOO, o neonati. Figura 2 illustra l&#39;uso di questo metodo per studiare i cambiamenti nella vescica attività spontanea durante lo sviluppo e dopo SCI. Inoltre, gli agenti farmacologici possono essere utilizzati per modulare spontaneous attività. figura 3 illustra l&#39;effetto dei modulatori di canale KCNQ, flupirtine e XE991, sulle attività spontanea e il tono della muscolatura liscia. </li><li> Per farmacologiche lisce stimolazione muscolare costruire curve concentrazione-risposta con l&#39;aggiunta di composti di soluzioni madre concentrate direttamente al bagno ad intervalli di tempo definiti. Il consumo di droga e dei veicoli in strisce parallele per tenere conto di veicoli e di tempo gli effetti. <ol><li> Fate soluzioni stock di composti di prova desiderati al 1000x la concentrazione di lavoro finale. Per carbachol (CCh), un agonista del recettore muscarinico, preparare seguenti stock: 10 -5 M, 3 x 10 -5 M, 10 -4 M, 3 x 10 -4 M, 10 -3 M, 3 x 10 -3 M , 10 -2 M. Le concentrazioni finali nella vasca è di 10 -8 M a 10 -5 M (Figure 4C, D). Per neuromedin B (NMB), un recettore bombesin sottotipo 1 agonista, preparare seguenti stock: 10 -8 M, 10 -7M, 10 -6 M, 10 -5 M, 10 -4 M, 10 -3 M e concentrazioni finali in bagno sono 10 -11 M a 10 -6 M. Sia CCh e NMB dovrebbero aumentare la contrattilità del tessuto. </li><li> Per un bagno tessuto 10 ml, aggiungere 10 ml di ciascuna soluzione madre CCh appena la risposta raggiunge un plateau (Figura 4C, D). Nel strisce parallele aggiungere pari quantità di veicolo (acqua). Allo stesso modo, aggiungere 10 ml di ciascuna soluzione neuromedin B ~ azione ogni 5 min. NOTA: Osservare l&#39;effetto eccitatorio della NMB e CCh sul tono della muscolatura liscia in strisce da diverse specie in Figura 4. </li><li> Indagare le proprietà di rilassamento dei muscoli lisci nel tessuto pre-contratto con un agente eccitatorio, di solito CCh o KCl. </li><li> Per bloccare una risposta agonista, pretrattare il tessuto per 10-20 min con l&#39;antagonista per consentire la penetrazione del tessuto, prima di agonista stimolazione. </li></ol></li><li> Per stim neuralilamento della muscolatura liscia, chiamata anche la stimolazione del campo elettrico (EFS) Seguire i punti 1-3,13 e continuare come descritto di seguito. EFS è destinato ad attivare selettivamente i nervi contro muscolatura liscia. I parametri per la stimolazione devono essere scelti con attenzione per evitare la stimolazione della muscolatura liscia diretta. <ol><li> Stabilire parametri di stimolazione: tipo di stimolo (impulsi singoli o treni), la durata (durata dell&#39;impulso e durata treno), frequenza e intensità, come descritto nella procedura riportata di seguito e illustrato nelle figure 5A, B. <ol><li> Per singolo impulso di stimolazione, durata dell&#39;impulso set, intervallo inter-stimolo e il numero di stimoli desiderati. Parametri di durata stimolazione usuali sono singoli impulsi di 0,05-0,3 durata msec consegnati a intervalli desiderati (Figura 5A). Seguire passo 4.3.1.4 per l&#39;intensità dello stimolo. </li><li> Per la stimolazione treno, impostare la durata treno e l&#39;intervallo treno interregionale. Valori tipici per i tessuti della vescica sono 3-10 sec consegnati almeno 1 mnella parte (Figura 5B). In caso di affaticamento del tessuto (cioè EFS contrazioni diminuiscono durante il periodo di controllo), aumentare l&#39;intervallo treno interregionale. </li><li> Stabilire la frequenza degli stimoli del treno (numero di impulsi in un treno - Figura 5B). Eseguire una curva di risposta in frequenza che vanno 0,5-50 Hz. Frequenze tipiche della vescica sono 10-20 Hz, che danno contrazioni riproducibili e stabili mediati da ATP e ACh. Osservare le risposte in frequenza dipendenti alla stimolazione EFS in nastri topo vescica in Figura 5 che dimostrano come questo metodo può essere utilizzato per valutare il contributo di colinergica e meccanismi purinergici di neurotrasmissione. </li><li> Stabilire intensità dello stimolo: aumentare sistematicamente l&#39;intensità (tensione) dello stimolo finché l&#39;ampiezza della contrazione raggiunge un plateau (se utilizzando treni mantengono costante la frequenza). </li><li> Impostare l&#39;intensità dello stimolo seconda delscopo dell&#39;esperimento. Se l&#39;obiettivo è quello di aumentare le contrazioni neuromediata evocata, quindi utilizzare intensità submassimale tale che l&#39;ampiezza della contrazione è ~ 50% della contrazione massima. Se l&#39;obiettivo è quello di diminuire le contrazioni neuro-evocato, quindi impostare l&#39;intensità al ~ 80% di ampiezza massima per evitare l&#39;affaticamento del tessuto. </li></ol></li><li> Una volta che i parametri di stimolazione (durata, frequenza e intensità) sono stabilite, consentire ~ 20-30 min per EFS- evocato contrazioni di stabilizzazione prima di test anti-droga. NOTA: Per verificare la selettività di EFS per la trasmissione neurale, blocco di trasmissione neurale con il bloccante dei canali del Na +, tetrodotossina (TTX; 0.5-1 mM). Eseguire questo passaggio all&#39;inizio dell&#39;esperimento, come TTX lava via relativamente facile. Inoltre, eseguire questo alla fine dell&#39;esperimento (vedere fase 4.3.5. Sotto). </li><li> Preparare le soluzioni madre a 1,000x le concentrazioni di lavoro finali per: alfa, beta-metilene ATP (ABMA, un attivatore del recettore purinergicoe desensibilizzante) 10 -2 M, atropina (un antagonista del recettore muscarinico) 10 -3 M (Figura 5C). Osservare altri esempi in Figura 6. L&#39;agonista del recettore 5HT4, cisapride (3 x 10 -6 M, 10 -6 M, 3 x 10 -5 M, 10 -5 M, 3 x 10 -4 M, 10 -4 M, 3 x 10 -3 M, 10 -3 M), aumenta la contrattilità dei tessuti e SB-203186 (3 x 10 -3 M), un antagonista del recettore 5HT4, inverte gli effetti di cisapride. </li><li> Per testare gli effetti di ABMA e atropina su EFS (Figura 5C), effettuare due curve di risposta in frequenza di controllo. Aggiungere 10 ml di 10 -2 M ABMA al bagno per una concentrazione finale di 10 mM. Questo si contrarrà il tessuto dovuto alla stimolazione diretta dei recettori purinergici nel muscolo liscio. Dopo la risposta ritorna al basale, ripetere le curve di risposta in frequenza. Aggiungere 10 ml di 10 -3 M atropina per un Concentrat finaleione di 1 micron. Dopo circa 10 minuti (necessario per la atropina per bloccare i recettori muscarinici), ripetere le curve di risposta in frequenza. Nel strisce parallele aggiungere 10 ml di veicolo, acqua, ad ogni passo. NOTA: Per altri esempi in Figura 6, aggiungere 10 ml di ciascuna soluzione cisapride magazzino ad intervalli di tempo definiti (~ ogni 15 min; vedi discussione), seguita da 10 ml di SB-203186 soluzione madre direttamente al bagno e monitorare il loro effetto sulla contrazione EFS-indotta. Nel strisce parallele aggiungere 10 ml di veicolo, DMSO. Osservare gli effetti di cisapride, un agonista del recettore 5HT4, su contrazioni EFS evocati in vescica e ileo tessuti umani in Figura 6. Inoltre, osservare l&#39;effetto del DMSO, il veicolo per cisapride, su EFS-evocate contrazioni della vescica e tessuti umani ileo . </li><li> Alla fine del protocollo EFS verificare la selettività di EFS bloccando la trasmissione neurale con il bloccante dei canali Na +, tetrodotossina (TTX; 0,5-1 &amp;# 181, M). Se le contrazioni TTX resistenti sono ancora presenti, si raccomanda di regolare la durata e l&#39;intensità dello stimolo in esperimenti successivi. </li></ol></li><li> Per determinare gli effetti dei farmaci su siti pre o post-sinaptica (Figura 7A) seguire i passi da 1 a 4.3.2. Stabilire risposte riproducibili a carbacolo e EFS, quindi aggiungere X. droga </li><li> Alla fine dell&#39;esperimento, sganciare o sciogliere le strisce, asciugare delicatamente su un pezzo di carta velina per eliminare liquidi in eccesso e misurare il peso di ogni striscia utilizzando una bilancia. Anche misurare la lunghezza del tessuto utilizzando un calibro per determinare area della sezione trasversale. Queste informazioni vengono utilizzate per la normalizzazione dei dati (vedere la sezione 5.4). </li></ol> Analisi dei dati 5. Analizzare i dati utilizzando un software adeguato (ad esempio, Windaq, LabChart). <ol><li> Per attività spontanea, selezionare una finestra di almeno 30 secondi prima e al picco della risposta indotta dal farmaco e miasure ampiezza e frequenza dell&#39;attività miogenico (Figura 3). <ol><li> Utilizzare veloce analisi di trasformazione di Fourier per determinare lo spettro di frequenze che contribuiscono alla contrattili risposte e se ci sono differenze tra le diverse parti della vescica (ad esempio, la cupola vs collo) o con lo sviluppo, la patologia e la droga 8. </li></ol></li><li> Per gli effetti sul tono della muscolatura liscia selezionare una finestra di almeno 10-30 secondi prima e al picco della risposta indotta dal farmaco e misurare l&#39;ampiezza di contrazione. </li><li> Per gli effetti sulle contrazioni neuro-evocati misurare l&#39;ampiezza, la durata e l&#39;area sotto la curva delle contrazioni (almeno 3) prima e al picco della risposta farmaco-indotta. NOTA: E &#39;necessario misurare sia l&#39;ampiezza e l&#39;area sotto la curva delle contrazioni EFS-indotte perché i componenti purinergici e colinergici hanno diverse cinetiche. La componente purinergico è veloce e transitoria (ATP attiva purinergic canali ionotropici come P2X1 che permettono rapido afflusso di calcio, poi desensibilizzare), contribuendo così più della risposta di picco di ampiezza e meno per l&#39;area sotto la curva. La componente colinergica è più lenta e sostenuta (ACh attiva i recettori muscarinici metabotropici, che richiedono più tempo per attivare meccanismi intracellulari che alla fine attivano i canali ionici che depolarizzano la muscolatura liscia di indurre una contrazione). Pertanto, il componente muscarinico viene catturata meglio misurando l&#39;area sotto la curva. </li><li> Normalizzare i dati per poter confrontare i risultati tra strisce e trattamenti farmacologici. Il parametro scelto per la normalizzazione non dovrebbe essere influenzata dai composti in esame, condizione patologica studiato o disegno sperimentale. Tra questi parametri, peso uso strip, sezione trasversale, risposte KCl (Figura 4B),% della risposta massima (Figura 7B) o% della massima risposta ad un altro agente contrattile(Ad esempio, CCH) o agenti rilassanti (ad esempio, papaverina). </li></ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.

In questo lavoro abbiamo descritto un semplice metodo in vitro liscio contrattilità muscolare che può essere utilizzato per affrontare una serie di importanti questioni scientifiche relative alla fisiologia della vescica e della patologia, oltre a favorire la scoperta di nuovi farmaci per il trattamento di disfunzioni della vescica. Abbiamo illustrato l&#39;utilizzo di questo metodo per valutare le proprietà di sviluppo, patologiche e farmacologiche di contrattilità della vescica muscolo liscio (fig...

La muscolatura liscia della vescica si rilassa per permettere il riempimento di urina, e contratti di suscitare l&#39;eliminazione delle urine. Il relax è mediata da proprietà intrinseche della muscolatura liscia e tonica rilascio di noradrenalina (NE) dai nervi simpatici, che attiva i recettori adrenergici beta (β 3 AR in umana) nel detrusore. Svuotamento si ottiene inibendo l&#39;ingresso simpatico e l&#39;attivazione dei nervi parasimpatici che rilasciano ACh / ATP di contrarre la vescica muscolo liscio 1. Numerose condizioni patologiche, tra cui il cervello e / o lesioni del midollo spinale, malattie neurodegenerative, diabete, ostruzione dello sbocco vescicale o cistite interstiziale, possono alterare profondamente la funzione della vescica, con grave impatto sulla qualità di vita del paziente 2. Queste condizioni alterano la contrattilità del muscolo liscio influendo uno o più componenti della vescica: il muscolo liscio, afferenti o nervi efferenti e / o lamucosa. Diversi in vivo e metodi in vitro per studiare la funzione della vescica sono stati sviluppati. In vivo, cistometria è la misura primaria di funzione della vescica. Anche se questo è un preparato intatto che permette la raccolta di informazioni in condizioni prossime a quelle fisiologiche, ci sono una serie di circostanze in cui è preferibile l&#39;utilizzo di strisce muscolari lisce. Questi includono situazioni quando chirurgica e / o manipolazioni farmacologiche possano pregiudicare la sopravvivenza e la stabilità della preparazione in vivo, o quando gli studi richiedono l&#39;uso del tessuto umano o chimici costosi. Questo metodo facilita anche un esame degli effetti dei farmaci, età e patologia su ogni componente della vescica, cioè la muscolatura liscia, mucosa, afferenti ed efferenti nervi. Strisce della vescica sono stati impiegati nel corso degli anni da molti gruppi per rispondere a una serie di questioni scientifiche. Essi sono stati usati per evacambiamenti luate in attività spontanea miogenico indotto dalla patologia. Questa attività è creduto di contribuire ai frequenza ed urgenza i sintomi della vescica iperattiva (OAB), ed è quindi un bersaglio per i farmaci in fase di sviluppo per OAB 3-9. Strisce della vescica sono stati utilizzati anche per studiare i fattori miogenici e neuronali che modulano il tono della muscolatura liscia con l&#39;obiettivo di scoprire canali ionici e / o recettori e / o le vie intracellulari che potrebbero essere mirati per indurre il rilassamento sia o contrazione della muscolatura liscia 3,10- 13. Altri studi si sono concentrati sulla natura della neurotrasmissione, compresi trasmettitori e recettori coinvolti e variazioni indotte dalla patologia 14,15. Inoltre, il metodo è stato utilizzato per il confronto di tessuti da 18 a 16 specie diverse, tra organi 19-21, e la valutazione delle relazioni struttura-attività farmaco 22-24. Un&#39;estensione di questo metodo è stato utilizzato per MEASURvia e l&#39;effetto dei farmaci sul rilascio del trasmettitore da nervi efferenti 25. Inoltre, una varietà di tessuti (vescica, uretra, tratto gastrointestinale, GI) raccolti da animali o esseri umani (da interventi chirurgici o tessuti donatore di organi riconosciuti per la ricerca) e da una varietà di modelli animali tra cui lesioni del midollo spinale (SCI), della vescica presa di ostruzione (BOO), o cistite interstiziale (IC) possono essere studiate usando questa tecnica. In questo articolo illustriamo l&#39;uso di questo metodo insieme a necessari protocolli sperimentali, per risolvere diverse questioni scientifiche di cui sopra.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="658">
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:123px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:180px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Equipment</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Tissue Bath System with Reservoir</td>
			<td>Radnoti, LLC</td>
			<td style="width:119px;">159920</td>
			<td style="width:180px;">isolated tissue baths</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Warm water recirculator pump</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">TPZ-749</td>
			<td style="width:180px;">to keep tissue baths to 37 C</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Computer</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Data Acquisiton System</td>
			<td style="width:123px;">DataQ Instruments</td>
			<td style="width:119px;">DI-710-UH</td>
			<td style="width:180px;">To view, record and analyze data</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Transbridge Transducer Amplifier</td>
			<td style="width:123px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">SYS-TBM4M</td>
			<td style="width:180px;">Transducer amplifier</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Grass stimulator</td>
			<td style="width:123px;">Grass Technologies</td>
			<td>Model S88</td>
			<td style="width:180px;">Stimulator</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Anesthesia System</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td>ACV-1205S</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:237px;"><a name="RANGE!A10">Anesthetizing Box</a></td>
			<td style="width:123px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">500116</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Anesthesia Masks</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">AC-09508</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Materials and surgical instruments</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">sylgard</td>
			<td>Dow Corning Corp</td>
			<td>184 SIL ELAST KIT</td>
			<td style="width:180px;">To pin, dissect &#38; cut tissue</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Petri Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3160-152</td>
			<td style="width:180px;">To dissect/cut tissue</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:237px;">Insect Pins</td>
			<td style="width:123px;">ENTOMORAVIA Austerlitz Insect Pins</td>
			<td style="width:119px;">Size 5</td>
			<td style="width:180px;">To pin tissue</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Bench Pad</td>
			<td style="width:123px;">VWR International</td>
			<td style="width:119px;">56617-014</td>
			<td style="width:180px;">Absorbent bench underpads</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Rat surgical Kit</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INSRATKIT</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">2 Dumont #3 Forceps</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500064</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Tissue Forceps</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500092</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Scalpel</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500236</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Scalpel blade</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500239</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Professional Clipper&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">CLP-223&#160;45</td>
			<td style="width:180px;">To remove fur</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Suture Thread</td>
			<td style="width:123px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">18020-50</td>
			<td style="width:180px;">Tie tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Tissue Clips</td>
			<td>Radnoti, LLC</td>
			<td style="width:119px;">158802</td>
			<td style="width:180px;">Attach tissue to rod/transducer</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">1g weight</td>
			<td style="width:123px;">&#160;Mettler Toledo</td>
			<td>11119525</td>
			<td style="width:180px;">For transducer calibration</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Chemicals</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="170">
			<td height="170" style="height:170px;width:237px;">Krebs Solution:&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Sodium Chloride 
			Potassium Chloride 
			Monobasic Potassium Phosphate 
			Magnesium Sulfate 
			Dextrose 
			Sodium Bicarbonate 
			Calcium Chloride 
			Magnesium Chloride</td>
			<td style="width:123px;">Sigma&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 
			Fisher 
			Fisher 
			Fisher 
			Fisher 
			Sigma 
			EMD 
			Baker</td>
			<td style="width:119px;">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; S7653 
			P217-500 
			P285-3 
			M65-500 
			D16-500 
			S5761 
			CX0130-2 
			2444</td>
			<td style="width:180px;">To prepare Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:123px;">Henry Schein</td>
			<td style="width:119px;">029405</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">&#160;Oxygen tank</td>
			<td style="width:123px;">Matheson Tri Gas</td>
			<td style="width:119px;">ox251</td>
			<td style="width:180px;">To use with anesthesia system</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Carbogen Tank (95% Oxygen; 5% Carbon Dioxide)&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Matheson Tri Gas</td>
			<td style="width:119px;">Moxn00hn36D</td>
			<td style="width:180px;">To aerate Krebs solutions</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bladder smooth muscle strip contractility as a method to evaluate lower urinary tract pharmacology

Descriviamo un metodo in vitro per misurare vescica contrattilità della muscolatura liscia, e il suo uso per indagare le proprietà fisiologiche e farmacologiche della muscolatura liscia così come i cambiamenti indotti dalla patologia. Questo metodo fornisce informazioni fondamentali per comprendere la funzione della vescica, mentre superando notevoli difficoltà metodologiche incontrate in vivo, come ad esempio le manipolazioni chirurgiche e farmacologiche che influenzano la stabilità e la sopravvivenza dei preparativi, l&#39;uso di tessuti umani, e / o l&#39;uso di prodotti chimici costosi. Esso fornisce anche un modo per indagare le proprietà di ogni componente della vescica (cioè muscolatura liscia, mucosa, nervi) in condizioni sane e patologiche. La vescica urinaria è rimosso da un animale anestetizzato, posto in soluzione di Krebs e tagliato a listarelle. Le strisce sono posti in una camera riempita con soluzione calda di Krebs. Una estremità è collegata ad un tensioattivo isometrican trasduttore per misurare la forza di contrazione, l&#39;altra estremità è collegata ad una canna fissa. Tissue è stimolata da aggiungere direttamente composti al bagno o da elettrodi di stimolazione di campo elettrico che attivano i nervi, simile a innescare le contrazioni della vescica in vivo. Dimostriamo l&#39;uso di questo metodo per valutare la contrattilità della muscolatura liscia spontanea durante lo sviluppo e dopo una lesione del midollo spinale sperimentale, la natura della neurotrasmissione (trasmettitori e recettori coinvolti), fattori coinvolti nella modulazione dell&#39;attività della muscolatura liscia, il ruolo dei componenti della vescica individuali, e le specie e le differenze di organi in risposta ad agenti farmacologici. Inoltre, potrebbe essere utilizzata per indagare meccanismi intracellulari coinvolti nella contrazione e / o rilassamento della muscolatura liscia, droga relazioni struttura-attività e la valutazione di rilascio del trasmettitore. Il metodo di contrattilità della muscolatura liscia in vitro è stato ampiamente utilizzato for più di 50 anni, e ha fornito dati che hanno contribuito in modo significativo alla nostra comprensione della funzione della vescica, nonché allo sviluppo farmaceutico di composti attualmente utilizzati clinicamente per la gestione della vescica.

Spontanea Attività Miogenica Attività miogena spontanea è una caratteristica importante della muscolatura liscia che subisce cambiamenti con lo sviluppo postnatale 6-9 e patologia (ad esempio, SCI, BOO) 3-5. Poiché questa attività è creduto di contribuire ai sintomi della vescica iperattiva (OAB) 2, una valutazione di recettori, vie intracellulari e agenti farmacologici che modulano essa, è di grande interesse per lo sviluppo ...

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Bladder Smooth Muscle Strip Contractility as a Method to Evaluate Lower Urinary Tract Pharmacology

Questo manoscritto presenta una semplice, ma potente, metodo in vitro per valutare la contrattilità della muscolatura liscia in risposta ad agenti farmacologici o la stimolazione del nervo. Le applicazioni principali sono lo screening di stupefacenti e la fisiologia dei tessuti comprensione, farmacologia e patologia.

Vescica muscolo liscio Striscia contrattilità come un metodo per valutare Lower Urinary Tract Farmacologia

We describe an in vitro method to measure bladder smooth muscle contractility, and its use for investigating physiological and pharmacological properties ...

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26.1K Views.  University of Pittsburgh School of Medicine.  Questo manoscritto presenta una semplice, ma potente, metodo in vitro per valutare la contrattilità della muscolatura liscia in risposta ad agenti farmacologici o la stimolazione del nervo. Le applicazioni principali sono lo screening di stupefacenti e la fisiologia dei tessuti comprensione, farmacologia e patologia. 

Video: Bladder Smooth Muscle Strip Contractility as a Method to Evaluate Lower Urinary Tract Pharmacology

Manual Muscle Testing:  A Method of Measuring Extremity Muscle Strength Applied to Critically Ill Patients

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, and persistent nerve and muscle impairments after hospital discharge.1-6 Using an explicit protocol with a structured approach to training and quality assurance of research staff, manual muscle testing (MMT) is a highly reliable method for assessing strength, using a standardized clinical examination, for patients following ARDS, and can be completed with mechanically ventilated patients who can tolerate sitting upright in bed and are able to follow two-step commands. 7, 8 
This video demonstrates a protocol for MMT, which has been taught to &ge;43 research staff who have performed &gt;800 assessments on &gt;280 ARDS survivors. Modifications for the bedridden patient are included. Each muscle is tested with specific techniques for positioning, stabilization, resistance, and palpation for each score of the 6-point ordinal Medical Research Council scale.7,9-11 Three upper and three lower extremity muscles are graded in this protocol: shoulder abduction, elbow flexion, wrist extension, hip flexion, knee extension, and ankle dorsiflexion. These muscles were chosen based on the standard approach for evaluating patients for ICU-acquired weakness used in prior publications. 1,2.

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and critical illness frequently develop long-lasting muscle weakness. Manual muscle testing (MMT) is a standardized clinical examination commonly used to measure strength of peripheral skeletal muscle groups. This video demonstrates MMT using the 6-point Medical Research Council scale.

Test muscolare manuale: un metodo di misurazione muscolare forza degli arti applicate a pazienti critici

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, ...

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Probe-based Confocal Laser Endomicroscopy of the Urinary Tract: The Technique

Probe-based confocal laser endomicroscopy (CLE) is an emerging optical imaging technology that enables real-time in vivo microscopy of mucosal surfaces during standard endoscopy. With applications currently in the respiratory1 and gastrointestinal tracts,2-6 CLE has also been explored in the urinary tract for bladder cancer diagnosis.7-10 Cellular morphology and tissue microarchitecture can be resolved with micron scale resolution in real time, in addition to dynamic imaging of the normal and pathological vasculature.7
The probe-based CLE system (Cellvizio, Mauna Kea Technologies, France) consists of a reusable fiberoptic imaging probe coupled to a 488 nm laser scanning unit. The imaging probe is inserted in the working channels of standard flexible and rigid endoscopes. An endoscope-based CLE system (Optiscan, Australia), in which the confocal endomicroscopy functionality is integrated onto the endoscope, is also used in the gastrointestinal tract. Given the larger scope diameter, however, application in the urinary tract is currently limited to ex vivo use.11 Confocal image acquisition is done through direct contact of the imaging probe with the target tissue and recorded as video sequences. As in the gastrointestinal tract, endomicroscopy of the urinary tract requires an exogenenous contrast agent&mdash;most commonly fluorescein, which can be administered intravenously or intravesically. Intravesical administration is a well-established method to introduce pharmacological agents locally with minimal systemic toxicity that is unique to the urinary tract. Fluorescein rapidly stains the extracellular matrix and has an established safety profile.12 Imaging probes of various diameters enable compatibility with different caliber endoscopes. To date, 1.4 and 2.6 mm probes have been evaluated with flexible and rigid cystoscopy.10 Recent availability of a &lt; 1 mm imaging probe13 opens up the possibility of CLE in the upper urinary tract during ureteroscopy. Fluorescence cystoscopy (i.e. photodynamic diagnosis) and narrow band imaging are additional endoscope-based optical imaging modalities14 that can be combined with CLE to achieve multimodal imaging of the urinary tract. In the future, CLE may be coupled with molecular contrast agents such as fluorescently labeled peptides15 and antibodies for endoscopic imaging of disease processes with molecular specificity.

Probe-based confocal laser endomicroscopy enables real-time microscopy of the human urinary tract during cystoscopy, providing dynamic, intravital imaging of pathological states such as bladder cancer with cellular resolution. Endomicroscopy may augment the diagnostic accuracy of standard white light endoscopy and provide intraoperative image guidance to improve surgical resection.

Probe-based Endomicroscopy laser confocale del tratto urinario: La Tecnica

Probe-based  confocal laser endomicroscopy (CLE) is an emerging optical imaging technology  that enables real-time in vivo microscopy of mucosal surfaces ...

A Modified Precipitation Method to Isolate Urinary Exosomes

Identification of biomarkers that allow early detection of kidney diseases in urine and plasma has been an area of active interest for several years. Urinary exosome vesicles, 40-100 nm in size, are released into the urine under normal conditions by cells from all nephron segments and may contain protein, mRNA and microRNA representative of their cell type of origin. Under conditions of renal dysfunction or injury, exosomes may contain altered proportions of these components, which may serve as biomarkers for disease. There are currently several methods available for isolation of urinary exosomes, and we have previously conducted an experimental comparison of each of these approaches, including three based on ultracentrifugation, one using a nanomembrane ultrafiltration concentrator, one using a commercial precipitation reagent and one using a modification of the precipitation technique using ExoQuick reagent that we developed in our laboratory. We found the modified precipitation method produced the highest yield of exosome particles, miRNA, and mRNA, making this approach suitable for the isolation of exosomes for subsequent RNA profiling. We conclude that the modified exosome precipitation method offers a quick, scalable, and effective alternative for the isolation of exosomes from urine. In this report, we describe our modified precipitation technique using ExoQuick reagent for isolating exosomes from human urine.

This manuscript describes a protocol for isolating exosomes from human urine using a modified precipitation technique.

Un metodo di precipitazione modificata per isolare urinaria Esosomi

Identification of biomarkers that allow early detection of kidney diseases in urine and plasma has been an area of active interest for several years. ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized by increased urgency and frequency of urination, as well as nocturia and general pelvic pain, especially upon bladder filling or voiding. Despite years of research, the cause of IC/BPS remains elusive and treatment strategies are unable to provide complete relief to patients. In order to study nervous system contributions to the condition, many animal models have been developed to mimic the pain and symptoms associated with IC/BPS. One such murine model is urinary bladder distension (UBD). In this model, compressed air of a specific pressure is delivered to the bladder of a lightly anesthetized animal over a set period of time. Throughout the procedure, wires in the superior oblique abdominal muscles record electrical activity from the muscle. This activity is known as the visceromotor response (VMR) and is a reliable and reproducible measure of nociception. Here, we describe the steps necessary to perform this technique in mice including surgical manipulations, physiological recording, and data analysis. With the use of this model, the coordination between primary sensory neurons, spinal cord secondary afferents, and higher central nervous system areas involved in bladder pain can be unraveled. This basic science knowledge can then be clinically translated to treat patients suffering from IC/BPS.

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized in part by pelvic pain. In order to study nervous system contributions to the condition, a physiological model of urinary bladder pain is used in mice and rats.

Vescica urinaria Distensione Evocati visceromotoria Risposte come un modello per il dolore della vescica nei topi

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Calcification of Vascular Smooth Muscle Cells and Imaging of Aortic Calcification and Inflammation

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world. Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and calcification, develop in the coronary arteries, aortic valve, aorta, and peripheral conduit arteries and are the hallmark of cardiovascular disease. In humans, imaging with computed tomography allows for the quantification of vascular calcification; the presence of vascular calcification is a strong predictor of future cardiovascular events. Development of novel therapies in cardiovascular disease relies critically on improving our understanding of the underlying molecular mechanisms of atherosclerosis. Advancing our knowledge of atherosclerotic mechanisms relies on murine and cell-based models. Here, a method for imaging aortic calcification and macrophage infiltration using two spectrally distinct near-infrared fluorescent imaging probes is detailed. Near-infrared fluorescent imaging allows for the ex vivo quantification of calcification and macrophage accumulation in the entire aorta and can be used to further our understanding of the mechanistic relationship between inflammation and calcification in atherosclerosis. Additionally, a method for isolating and culturing animal aortic vascular smooth muscle cells and a protocol for inducing calcification in cultured smooth muscle cells from either murine aortas or from human coronary arteries is described. This in vitro method of modeling vascular calcification can be used to identify and characterize the signaling pathways likely important for the development of vascular disease, in the hopes of discovering novel targets for therapy.

Vascular calcification is an important predictor of and contributor to human cardiovascular disease. This protocol describes methods for inducing calcification of cultured primary vascular smooth muscle cells and for quantifying calcification and macrophage burden in animal aortas using near-infrared fluorescence imaging.

Calcificazione vascolare cellule muscolari lisce e imaging di aortica calcificazioni e infiammazione

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world.  Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and ...

Contractility Measurements of Human Uterine Smooth Muscle to Aid Drug Development

Discovery and characterization of novel pharmaceutical compounds or biochemical probes rely on robust and physiologically relevant assay systems. We describe methods to measure ex vivo myometrium contractility. This assay can be used to investigate factors and molecules involved in the modulation of myometrial contraction and to determine their excitatory or inhibitory actions, and hence their therapeutic potential in vivo. Biopsies are obtained from women undergoing cesarean section delivery with informed consent. Fine strips of myometrium are dissected, clipped and attached to a force transducer within 1 mL organ baths superfused with physiological saline solution at 37 &#176;C. Strips develop spontaneous contractions within 2&#8211;3 h under set tension and remain stable for many hours (&#62;6 h). Strips can also be stimulated to contract such as by the endogenous hormones, oxytocin and vasopressin, which cause concentration-dependent modulation of contraction frequency, force and duration, to more closely resemble contractions in labor. Hence, the effect of known and novel drug leads can be tested on spontaneous and agonist-induced contractions.
This protocol specifically details how this assay can be used to determine the potency of known and novel agents by measuring their effects on various parameters of human myometrial contraction. We use the oxytocin- and V1a receptor antagonists, atosiban and SR49059 as examples of known compounds which inhibit oxytocin- and vasopressin-induced contractions, and demonstrate how this method can be used to complement and validate pharmacological data obtained from cell-based assays to aid drug development. The effects of novel agonists in comparison to oxytocin and vasopressin can also be characterized. Whilst we use the example of the oxytocin/ vasopressin system, this method can also be used to study other receptors and ion channels that play a role in uterine contraction and relaxation to advance the understanding of human uterine physiology and pathophysiology.

This article describes experimental protocols to study ex vivo contractions of human myometrium and their application in drug discovery. This technique is used to improve the understanding of myometrial physiology and pathophysiology as well as to validate pharmacological data from novel research probes or drug leads.

Misurazioni di contrattilità della muscolatura liscia uterina umana per lo sviluppo di farmaci di aiuto

Discovery and characterization of novel pharmaceutical compounds or biochemical probes rely on robust and physiologically relevant assay systems. We ...

Microelectrode Impalement Method to Record Membrane Potential from a Cannulated Middle Cerebral Artery

Membrane potential (Vm) of vascular smooth muscle cells determines vessel tone and thus blood flow to an organ. Changes in the expression and function of ion channels and electrogenic pumps that regulate Vm in disease conditions could potentially alter Vm, vascular tone, and blood flow. Thus, a basic understanding of electrophysiology and the methods necessary to accurately record Vm in healthy and diseased states are essential. This method will allow modulating Vm using different pharmacological agents to restore Vm. Although there are several methods, each with its advantages and disadvantages, this article provides protocols to record Vm from cannulated resistance vessels such as the middle cerebral artery using the microelectrode impalement method. Middle cerebral arteries are allowed to gain myogenic tone in a myograph chamber, and the vessel wall is impaled using high resistance microelectrodes. The Vm signal is collected through an electrometer, digitized, and analyzed. This method provides an accurate reading of the Vm of a vessel wall without damaging the cells and without changing the membrane resistance.

The primary goal of this article is to provide details of how to record membrane potential (Vm) from the middle cerebral artery using the microelectrode impalement method. The cannulated middle cerebral artery is equilibrated to gain myogenic tone, and the vessel wall is impaled using high resistance microelectrodes.

Metodo di impalamento dei microelettrodi per registrare il potenziale della membrana da un'arteria cerebrale media cannulata

Membrane potential (Vm) of vascular smooth muscle cells determines vessel tone and thus blood flow to an organ. Changes in the expression and function of ...

Quantitative Analysis of Cellular Composition in Advanced Atherosclerotic Lesions of Smooth Muscle Cell Lineage-Tracing Mice

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel interventions have remained elusive. This is likely due, in part, to a reliance on preclinical prevention models investigating the effects of genetic manipulations or pharmacological treatments on atherosclerosis development rather than the established disease. Also, results of these studies are often confounding because of the use of superficial lesion analyses and a lack of characterization of lesion cell populations. To help overcome these translational hurdles, we propose an increased reliance on intervention models that employ investigation of changes in cellular composition at a single cell level by immunofluorescent staining and confocal microscopy. To this end, we describe a protocol for testing a putative therapeutic agent in a murine intervention model including a systematic approach for animal dissection, embedding, sectioning, staining, and quantification of brachiocephalic artery lesions. In addition, due to the phenotypic diversity of cells within late-stage atherosclerotic lesions, we describe the importance of using cell-specific, inducible lineage tracing mouse systems and how this can be leveraged for unbiased characterization of atherosclerotic lesion cell populations. Together, these strategies may assist vascular biologists to more accurately model therapeutic interventions and analyze atherosclerotic disease and will hopefully translate into a higher rate of success in clinical trials.

We propose a standardized protocol to characterize the cellular composition of late-stage murine atherosclerotic lesions including systematic methods of animal dissection, tissue embedding, sectioning, staining, and analysis of brachiocephalic arteries from atheroprone smooth muscle cell lineage tracing mice.

Analisi quantitativa della composizione cellulare nelle lesioni aterosclerotiche avanzate del muscolo liscio delle cellule Lineage-Tracing topi

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel ...

Ultrasonography of the Adult Male Urinary Tract for Urinary Functional Testing

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting in a significant economic and quality of life burden. Transgenic and other mouse models have been developed to recreate various aspects of this multifactorial disease; however, methods to accurately quantitate urinary dysfunction and the effectiveness of new therapeutic options are lacking. Here, we describe a method that can be used to measure bladder volume and detrusor wall thickness, urinary velocity, void volume and void duration, and urethral diameter. This would allow for the evaluation of disease progression and treatment efficacy over time. Mice were anesthetized with isoflurane, and the bladder was visualized by ultrasound. For non-contrast imaging, a 3D image was taken of the bladder to calculate volume and evaluate shape; the bladder wall thickness was measured from this image. For contrast-enhanced imaging, a catheter was placed through the dome of the bladder using a 27-gauge needle connected to a syringe by PE50 tubing. A bolus of 0.5 mL of contrast was infused into the bladder until a urination event occurred. Urethral diameter was determined at the point of the Doppler velocity sample window during the first voiding event. Velocity was measured for each subsequent event yielding a flow rate. In conclusion, high frequency ultrasound proved to be an effective method for assessing bladder and urethral measurements during urinary function in mice. This technique may be useful in the assessment of novel therapies for BPH/LUTS in an experimental setting.

We describe the use of high frequency ultrasound with contrast imaging as a method to measure bladder volume, bladder wall thickness, urine velocity, void volume, void duration, and urethral diameter. This strategy can be used to assess voiding dysfunction and treatment efficacy in various mouse models of lower urinary tract dysfunction (LUTD).

Ultrasonografia del tratto urinario maschile adulto per test funzionali urinari

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting ...

Palatable Western-style Cafeteria Diet as a Reliable Method for Modeling Diet-induced Obesity in Rodents

Obesity is rapidly increasing in incidence in developed and developing countries and is known to induce or exacerbate many diseases.&#160;The health burden of obesity and its comorbid conditions highlight the need for better understanding of its pathogenesis, yet ethical constraints limit studies in humans. To this end externally valid models of obesity in laboratory animals are essential for the understanding of being overweight and obesity.&#160;While many species have been used to model the range of changes that accompany obesity in humans, rodents are most commonly used. Our laboratory has developed a western-style cafeteria diet that consistently leads to considerable weight gain and markers of metabolic disease in rodents. The diet exposes rodents to a variety of highly palatable foods to induce hyperphagia, modeling the modern western food environment. This diet rapidly induces weight gain and body fat accumulation in rats allowing for the study of effects of overeating and obesity. While the cafeteria diet may not provide the same control over macronutrient and micronutrient profile as purified high-fat or high-fat, high-sugar diets, the cafeteria diet typically induces a more severe metabolic phenotype than that observed with purified diets and is more in line with metabolic disturbances observed in the overweight and obese human population.

This protocol describes the use of a highly palatable, western-style cafeteria diet to model overeating and obesity in rodents. Here, we provide a detailed outline of food selection, preparation and measurement, and explain methodological factors that assist in generating a robust and reproducible phenotype.

Palatable Western-stile caffetteria dieta come un metodo affidabile per la modellazione dell'obesità indotta da dieta nei roditori

Obesity is rapidly increasing in incidence in developed and developing countries and is known to induce or exacerbate many diseases.&#160;The health ...