The author is grateful for the assistance of Mrs. Sharon Spana (University of Sydney) in rodent monitoring, handling and experimentation. The authorwould like to thank Prof. Jonathan Stone and Dr. Dan Johnstone for the assistance in the preparation of this manuscript. PhD funding support has been provided by University of Sydney and Australian Center for Excellence in Vision.

Affermazione Etica: Il protocollo segue le linee guida per la cura degli animali dell&#39;Università di Sydney, AEC # 5657. Anestesia è stato approvato dal comitato etico degli animali (Università di Sydney, AEC # 5657). 1. apparecchiature Preparazione <ol><li> Utilizzare in tempo reale il monitoraggio della temperatura della pelle. Accendere computer e hardware di acquisizione dati. </li><li> Software di registrazione della temperatura aperta e regolare impostazione temperatura tra 30-35 ° C e la frequenza di campionamento per ogni 100 msec. </li><li> Opzionale: Inserire termometro rettale per garantire la temperatura interna rimane stabile a 37,5 ° C. </li></ol> 2. Taratura del sfigmomanometro manuale <ol><li> Collegare neonatale bracciale a sphygmomanometer.Use un bracciale formato 2 per un 250-550 g topo. Un adattatore può essere necessario collegare il tubo del manicotto al sfigmomanometro. </li><li> Sgonfiare la cuffia da una allentando la valvola di sfiato o scollegare il tubo del bracciale dal adattarsio. Assicurarsi nessuna pressione rimane nel tubo e l&#39;ago del manometro poggia a zero all&#39;interno dell&#39;ovale / rettangolo. </li><li> Controllare la pressione tra tubi, manometro e bracciale. Gonfiare la cuffia con pompe dolci del bulbo inflazione fino a quando si legge 100 mmHg sul manometro. Assicurarsi che la pressione rimane costante. Sgonfiare il bracciale aprendo lentamente il valore di cessione d&#39;aria. </li></ol> 3. Preparazione degli animali Nota: Gli animali che devono subire lesioni luce richiede adattamento scuro la sera prima dell&#39;ischemia a distanza. Animali sottoposti a danno luce richiedono allevamento (luce 12 ore: Ciclo scuro (5 lux)) scuro <ol><li> Eseguire ischemia a distanza sia in roditori svegli o anestetizzati. Assicurarsi che gli animali hanno un tono muscolare sano. Garantire questo pizzicando dell&#39;arto posteriore superiore per confermare che vi sia adeguata presente muscolare. Protezione RIP indotto da lesioni luce è stato testato nei ratti sedentari fino a 6 mesi di età. </li><li> Preparazione anestetizzati per RIP <ol><li> Iniettare ratti con una iniezione intraperitoneale di 60 mg / kg di ketamina e 5 mg / kg xilazina. Controllare la profondità dell&#39;anestesia estendendo la gamba e pizzicando la pelle sulla parte inferiore del piede. L&#39;animale non ha riflesso se è profondamente anestetizzati. Applicare lacrime artificiali per evitare secchezza della cornea mentre sotto anestesia. </li><li> Posizionare ratti sia su un pad di calore o tubi di riscaldamento acqua circolante per mantenere una temperatura costante di 37,5 ° C corpo. Posizionare il topo in posizione prona con rilievi del piede degli arti inferiori verso l&#39;alto. Sia a destra oa sinistra arto possono essere sottoposti a ischemia a distanza. </li></ol></li><li> Preparazione Awake per RIP Nota: Awake sperimentazione animale sono necessarie due persone. Una persona trattiene l&#39;animale e la seconda persona gestisce il sfigmomanometro manuale. Gli sperimentatori devono essere sicuri per eseguire la procedura di ritenuta aumenta il rischio di lesioni per i gestori. I ratti sottoposti a ischemia a distanza devono essere condizionati to moderazione manuale. A seconda delle indicazioni intuitive moderazione manuale dovrebbe essere progresso da 30 secondi a un massimo di 5 minuti per un certo numero di settimane. Animali timidi che non riescono ad acclimatarsi a moderazione manuale dovrebbero essere esclusi dalla sperimentazione sveglio. Infine, moderazione manuale può causare lo stress (e potenzialmente introdurre confonde allo studio) per gli animali e una coorte finzione (il posizionamento del bracciale senza infiammazione) deve essere utilizzato per interpretare con precisione i risultati dello studio RIP. <ol><li> Tagliare un asciugamano in 15 cm x 30-50 cm pezzo e posizionare il bordo corto perpendicolarmente alla colonna vertebrale del ratto, che copre la testa verso l&#39;alto degli arti posteriori. </li><li> Tuck il lato corto sotto il torso del ratto strettamente e cominciare ad avvolgere il topo con il lato lungo rimanente asciugamano. Fissare l&#39;animale avvolto sotto il braccio in posizione supina. Se il ratto si svolge sotto il braccio sinistro, liberare arto destro del ratto dal telo. </li></ol></li></ol> 4. Applicazione of Sonda temperatura cutanea <ol><li> Estendere la gamba del ratto che deve subire ischemia e posizionare la sonda pelle sulla zampa. Posizionare la sonda pelle a massimizzare il contatto tra la sonda di temperatura e la pelle. Spingere la sonda nel zampa e apporre la sonda con nastro di carta. </li><li> Controllare la posizione della sonda pelle con il tracciamento della temperatura sul software di registrazione della temperatura. Assicurarsi che la temperatura della pelle è tra i 30-34 ° C e rimane stabile. Traccia la temperatura della pelle per 1-2 min. Regolare la sonda pelle se la temperatura è instabile o inferiore a 30 ° C. </li></ol> 5. Ischemia Remote <ol><li> Sgonfiare il bracciale e garantire la valvola dell&#39;aria viene chiusa. Estendere la gamba e vagamente circondare il bracciale sul arto posteriore superiore. Utilizzare l&#39;indice e pollice per estendere la gamba e le cifre inferiori per mantenere il bracciale in posizione allentata. </li><li> Aumentare pressione della cuffia dell&#39;animale anestetizzati a 160 mmHg, e in animali svegli increase la pressione del bracciale a 180 mmHg. Nota: La pressione sanguigna dei ratti anestetizzati varia 120-140 mmHg e sale a 160 mmHg se cosciente. Iniziare le registrazioni con il timer e temperatura del piede una volta raggiunta la pressione corretta. Nota: La temperatura piede dovrebbe cadere da 2 ° C dopo 5 min di pressione costante. </li><li> Mantenere la posizione del bracciale sopra &quot;ginocchio&quot; dell&#39;animale tutto il ischemia. La pressione del bracciale inizierà a cadere dopo pochi minuti, o se l&#39;arto del ratto è in movimento. </li><li> Pompare ripetutamente il bulbo di inflazione in brevi raffiche di mantenere la pressione del bracciale desiderata breve scoppio ripetuto di pompaggio </li><li> Ischemia remota può essere consegnato in continuo tra il 5 e 15 min. Il protocollo ischemia riperfusione comprende 2 periodi di 5 minuti ischemia con un intervento 5 min di riperfusione. </li><li> Sgonfiare la pressione del bracciale svitando la valvola dell&#39;aria. Controllare la variazione di temperatura nel corso della pro ischemiaprotocollo. Rilasciare il bracciale. </li><li> Continuare con la ferita sperimentazione. Animali sotto l&#39;effetto dell&#39;anestesia dovrà essere collocato su un pad termico. Continuare a monitorare gli animali fino ambulatoriale. Gli animali non possono essere restituiti alla casa fino a quando si cammina. </li></ol> 6. Luce Pregiudizio - Retina Degenerazione Modello <ol><li> Scuro adattare gli animali durante la notte (12-15 h). Subito dopo ischemia condizionata a distanza o ischemia remota sham (moderazione animale) posto animali in perspex alloggiamento con cibo e acqua. </li><li> Accendere lampade fluorescenti (1.000 lux) situato sopra Perspex abitazioni alle 9 del mattino per 24 ore. Dopo l&#39;esposizione alla luce, rispedire gli animali dim illuminazione ciclica per 7 giorni. </li></ol> Procedure Ischemia 7. Post-remote <ol><li> Valutazione Vision con Elettroretinogramma (ERG): Nota: Il ERG set-up e il protocollo del flash seguiti Brandli e Stone 26. <ol><li> Scuro adattare gli animali durante la notte (12-15 ore). Sottodim illuminazione rossa anestetizzare gli animali mediante iniezione intraperitoneale di ketamina e xilazina (60 mg / kg e 5 mg / kg, rispettivamente). Midriatico (solfato di atropina 1,0%), anestesia corneale (proximetacaina 0,5%). </li><li> Applicare l&#39;idratazione corneale (Carbomero polimero) collirio subito alla cornea. Applicare gel oftalmico ad intervalli di 20 min per mantenere l&#39;idratazione corneale. </li><li> Disegnare un filo vagamente legato intorno al bulbo oculare per aiutare le registrazioni stabili ERG. Temperature Monitor utilizzando una sonda rettale e mantenere la temperatura corporea dell&#39;animale a 37-37,5 ° C. </li><li> Posizionare la testa all&#39;interno di una sfera di integrazione Ganzfeld. Nota: Il Ganzfeld è uno stimolo leggero completamente programmabile che fornisce uniformi briciolo lampi da LED per l&#39;occhio. </li><li> Registrare il elettroretinogramma utilizzando 4 mm platino elettrodo positivo misura sfiorando cornea e un diametro Ag / AgCl elettrodo pellet 2 millimetri inserito in bocca. Riferimento entrambi gli elettrodi ad ago in acciaio inossidabileinserito per via sottocutanea in groppa. </li><li> Segnali di registrazione con gli impostazione passa-banda di 0.3-1,000 Hz (-3 dB), con un tasso di acquisizione 2 kHz (strumenti ad). Dopo una registrazione stabile ERG è stabilito soggetto l&#39;animale a un 10 minuti adattamento al buio prima di iniziare le registrazioni. </li><li> Seguire il protocollo flash come precedentemente descritto da Brandli e Stone 26. <ol><li> Programmare la durata del flash (abbiamo usato lampeggia 1-2 msec in durata), e impostare l&#39;intensità di -4.4 a 2.0 log scotto cd.sm -2. Utilizzare lampi (log 2.0 scotto cd.sm -2, 1 ms) per misurare la funzione retinica. In questo studio è il confronto tra il controllo, infortunio leggero e lesioni leggero con RIP. </li></ol></li></ol></li></ol> 8. TUNEL Assay <ol><li> Eutanasia animali mediante iniezione intraperitoneale di sovradosaggio fenobarbital (100 mg / kg). Enucleare gli occhi e fissare nel 4% paraformaldeide. </li><li> Lavare gli occhi in PBS prima cyroprotectingocchi notte in saccarosio al 30% (w / v). Incorpora gli occhi in OCT e tagliare in 20 sezioni micron sagittali con un criostato. </li><li> Eseguire il test TUNEL su sezioni retiniche con colorazione DAPI seguendo il protocollo di Maslim et al. 27 </li><li> Utilizzare la microscopia a fluorescenza per TUNEL conteggi della retina. Cellule TUNEL sono stati registrati dallo strato nucleare esterno (ONL); lo strato più esterno della retina, che contiene nuclei fotorecettori. In questo studio, i conteggi TUNEL stati effettuati in triplicato per ogni occhio, con 5 occhi per ciascun gruppo di trattamento. </li><li> Utilizzare ANOVA per gruppo statistico confrontare gli strumenti di controllo, lesioni luce, e del pregiudizio + RIP luce ratti. </li></ol>

The author has nothing to disclose.

Roditore ischemia degli arti posteriori è stata indotta con successo con uno sfigmomanometro manuale e cuff fornire neuroprotezione ai fotorecettori della retina. Un risultato in linea con ischemico condizionata indotto la protezione dei fotorecettori da un infortunio leggero 9,28. In sostanza, l&#39;ischemia a distanza provoca breve ossigeno privazione ai tessuti. Quindi, a distanza precondizionamento ischemico ha molte somiglianze con condizionata ischemica o tolleranza ischemi...

La sopravvivenza di più, forse tutti, i tessuti a fronte di stress metabolico può essere migliorata prima condizionata con un periodo di ischemia subletale 1,2. Precondizionamento ischemico (IP) in termini pratici è l&#39;esposizione del tessuto di ischemia subletali, prima che le esperienze tessuto stressanti più gravi, ad esempio un successivo insulto ischemico. In modelli animali, IP fornisce una protezione notevole al cervello, retina, cuore e polmoni 3-6. Di conseguenza, le osservazioni in pazienti colpiti da ictus hanno mostrato un legame tra precedenti attacchi ischemici transitori e migliori risultati clinici 7,8. IP protegge anche fotorecettori retinici di infortuni non ischemiche 9. L&#39;efficacia di IP in diversi tessuti e lesioni suggerisce che sta attivando un meccanismo innato della sopravvivenza cellulare presente in tutti i tessuti. Precondizionamento ischemica del miocardio è stato suggerito di avere effetti protettivi attraverso upregulationdell&#39;ipossia fattore inducibile (HIF), noto per regolare molte vie metaboliche attraverso il rilascio di adenosina o attraverso l&#39;apertura di canali del potassio ATP mitocondriale 10,11. Canali di rilascio di adenosina e ATP potassio sono implicati in ischemia cerebrale ma, le indagini sui meccanismi neuroprotettivi di condizionamento ischemico fino ad oggi si sono concentrati su modifiche anti-eccitotossicità, anti-apoptotici e anti-infiammatori percorsi 12,13. Nel complesso, la comprensione del processo molecolare di condizionamento ischemico per proteggere i neuroni è limitata. Remote tentativi ischemici precondizionamento per condizionare organi lontani criticamente importanti (cuore, cervello, polmoni) generando ischemia nei tessuti meno critiche. Precondizionamento ischemico remoto (RIP) utilizzando l&#39;arto posteriore è stato dimostrato di essere neuroprotettivi in modelli di roditori di ictus 14-17. Il metodo descritto da noi fornisce un prot semplice, affidabile e non invasivaocol per indurre RIP. La stragrande maggioranza dei protocolli RIP comporta dell&#39;arto posteriore, presumibilmente perché l&#39;arteria femorale trova nella arto posteriore superiore può essere facilmente individuabile ed accessibile per il bloccaggio chirurgici e applicazione del laccio. In arto invasiva studi ischemici per lo studio di cervello e protezione della pelle, ischemia viene indotta separando l&#39;arteria femorale dai legamenti all&#39;inguine e bloccaggio dell&#39;arteria femorale 2,15,18. L&#39;ischemia derivante sia cuffing arto o femorale serraggio è stata confermata dai cambiamenti al lembo compresa una perdita di impulso, diminuzione della ossigenazione e un calo della temperatura cutanea. Ischemia remota può essere confermata dalla perdita del polso utilizzando laser Doppler o ultrasuoni Doppler 17-19. La temperatura cutanea può essere utilizzata come alternativa al Doppler sebbene la relazione non è lineare 20,21. Registrazioni accurate di temperatura sono comuni in laboratori e lattinaessere facilmente incorporato in studi ischemiche remoti. Un&#39;alternativa alla femorale serraggio chirurgia è l&#39;induzione di ischemia utilizzando un laccio emostatico. Applicazione Tourniquet produce ischemia paragonabile a quella ottenuta con vaso di bloccaggio; Kutchner et al. rispetto invasiva arteria femorale di bloccaggio ad un laccio emostatico non invasiva e trovarono entrambi i metodi fermarono il flusso di sangue all&#39;arto e danni alla pelle ridotta in un modello di chirurgia plastica del lembo cutaneo ischemia 18. Ammanettamento o la gamba o il braccio e di aumentare la pressione del bracciale sopra la pressione sistolica è stato trovato per essere protettivo contro il danno ischemico nei suini e nell&#39;uomo 17,19,22. Diverso laccio emostatico approcci per indurre a distanza ischemico include l&#39;uso di un bracciale per la pressione arteriosa o una fascia elastica 17,22,23. Tuttavia, l&#39;uso di un elastico per indurre ischemia è un metodo sicuro, potenzialmente dando luogo a un importo non regolata di pressione nelarto, con aumenti pressione superiori a 500 mmHg in fase di registrazione negli esseri umani 24. Inoltre, ischemia utilizzando un elastico porta a danno muscolare nei ratti dopo la rimozione del gruppo 23, come valutato da Evans Blu Dye, un marcatore in vivo delle miofibre permeabilità 25. Al contrario, la consegna di una pressione controllata per il laccio può essere raggiunto utilizzando una pressione sanguigna bracciale collegato ad un 17,19,22,26 sfigmomanometro. In questo studio, un modello di lesione luce fotorecettori degenerazione è stato utilizzato per dimostrare l&#39;efficacia neuroprotettiva di distanza precondizionamento ischemico. Ischemia a distanza è stato indotto subito prima infortunio leggero, e ha impedito la successiva degenerazione dei fotorecettori, come confermato da test di funzionalità della retina. Il video che accompagna dimostrerà l&#39;applicazione di ischemia a distanza non invasivo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Gold series DuraShock Hand Aneroid Sphygmomanometer</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>DS56</td>
			<td>Manual Sphygmomanometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neonate [size 2] 1 Tube, 10 Pack</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>5082-102-1&#160;</td>
			<td>Limb blood pressure cuff</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer lock adaptor</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>5082-178</td>
			<td>Adaptor for neonatal cuff</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermistor pod</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>ML 309</td>
			<td>skin tempertature unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin temperture probe</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>MLT 422/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powerlab, 4 channel acquistion hardware</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>PL 35044</td>
			<td>Skin temperature recorder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homeothermic blanket system with flexible probe</td>
			<td>Harvard Appartus</td>
			<td>507222F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Towel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>optional: awake remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflo - 100% Isoflurane -250 ml</td>
			<td>Abbot Animal Health</td>
			<td>05260-05</td>
			<td>optional: inhaltion anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamil - ketamine 100 mg/ml - 50 ml</td>
			<td>Troy Laboratories Pty Ltd</td>
			<td></td>
			<td>optional: injectable anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylium - Xylazine 100 mg/ml - 50 ml</td>
			<td>Troy Laboratories Pty Ltd</td>
			<td></td>
			<td>optional: injectable anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

remote limb ischemic preconditioning:  a neuroprotective technique in rodents

Ischemia subletali protegge i tessuti contro successiva, ischemia più gravi attraverso la aumenta i meccanismi endogeni nel tessuto colpito. Ischemia subletali è stato anche dimostrato di upregulate meccanismi protettivi nei tessuti remoti. Un breve periodo di ischemia (5-10 minuti) nella arto posteriore dei mammiferi induce risposte auto-protettivo nel cervello, polmoni, cuore e retina. L&#39;effetto è noto come precondizionamento ischemico remota (RIP). E &#39;un modo terapeutico promettente per proteggere organi vitali, ed è già in fase di sperimentazione clinica per il cuore e il cervello lesioni. Questa pubblicazione illustra un metodo minimamente invasivo controllato di fare un arto - specificamente dell&#39;arto posteriore di un ratto - ischemico. Un sfigmomanometro sviluppato per l&#39;uso nei neonati umani è collegato ad un misuratore di pressione manuale e utilizzato per applicare pressione 160 mmHg attorno alla parte superiore degli arti posteriori. Una sonda progettato per rilevare la temperatura della pelle è utilizzato per verificare l&#39;ischemia, registrando il calo della temperatura della pelle causata da occlusione indotta pressione delle arterie delle gambe, e l&#39;aumento della temperatura che segue rilascio del bracciale. Questo metodo di RIP offre protezione alla retina topo contro i danni indotti luce brillante e degenerazione.

Un bracciale di pressione sanguigna elevata sopra 160 mmHg blocca il flusso di sangue al arto posteriore come si vede chiaramente nella figura 1B. La mancanza di ossigenazione dei tessuti determinato una riduzione temperatura del piede dell&#39;animale per un protocollo ischemia-riperfusione (Figura 2). La temperatura del piede (33 ° C) è stata inferiore a quella temperatura interna ed affidabile ridotta durante l&#39;elevazione pressione della cuffia (31 ° C), che sorge quando il br...

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Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

Precondizionamento ischemico remoto (RIP) è un metodo di tessuti condizionamento contro lo stress dannoso. Abbiamo stabilito un metodo di ischemia telecomando verso l&#39;arto posteriore, gonfiando un bracciale sfigmomanometro per 5-10 min. Le capacità neuroprotettive del RIP sono stati dimostrati in un modello di degenerazione retinica nei roditori.

Arto Remote ischemica precondizionamento: una tecnica neuroprotettivo nei roditori

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

10.9K Views.  University of Sydney.  Precondizionamento ischemico remoto (RIP) è un metodo di tessuti condizionamento contro lo stress dannoso. Abbiamo stabilito un metodo di ischemia telecomando verso l'arto posteriore, gonfiando un bracciale sfigmomanometro per 5-10 min. Le capacità neuroprotettive del RIP sono stati dimostrati in un modello di degenerazione retinica nei roditori. 

Video: Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine their efficacy and safety.
Gene therapy using viral vectors is one of the most promising approaches for treating cardiac diseases. Viral delivery of various different genes by changing the carrier gene has immeasurable therapeutic potential.
In this video, the full process of an animal model of heart failure creation followed by gene transfer is presented using a swine model. First, myocardial infarction is created by occluding the proximal left anterior descending coronary artery. Heart remodeling results in chronic heart failure. Unique to our model is a fairly large scar which truly reflects patients with severe heart failure who require aggressive therapy for positive outcomes. After myocardial infarct creation and development of scar tissue, an intracoronary injection of virus is demonstrated with simultaneous nitroglycerine infusion. Our injection method provides simple and efficient gene transfer with enhanced gene expression. This combination of a myocardial infarct swine model with intracoronary virus delivery has proven to be a consistent and reproducible methodology, which helps not only to test the effect of individual gene, but also compare the efficacy of many genes as therapeutic candidates.

A method of gene transfer for the treatment of ischemic heart failure is described using a swine model of myocardial infarction. Our simple and reproducible method enables us to readily evaluate the efficacy of various gene transfers with a very simple and reproducible way.

Trasferimento Genico per insufficienza cardiaca ischemica in un modello preclinico

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

Ricerca

Medicina

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work well in non-ischemic wounds may not work in human diabetic wounds because vasculopathy is one major factor that hinders healing of these wounds. We published an article in 2007 describing a rabbit ear ischemic wound model created by a minimally invasive surgical technique. Since then, we have further simplified the procedure for easier operation. On one ear, three small skin incisions were made on the vascular pedicles, 1-2 cm from the ear base. The central artery was ligated and cut along with the nerve. The whole cranial bundle was cut and ligated, leaving only the caudal branch intact. A circumferential subcutaneous tunnel was made through the incisions, to cut subcutaneous tissues, muscles, nerves, and small vessels. The other ear was used as a non-ischemic control. Four wounds were made on the ventral side of each ear. This technique produces 4 ischemic wounds and 4 non-ischemic wounds in one animal for paired comparisons. After surgery, the ischemic ear was cool and cyanotic, and showed reduced movement and a lack of pulse in the ear artery. Skin temperature of the ischemic ear was 1-10 &deg;C lower than that on the normal ear and this difference was maintained for more than one month. Ear tissue high-energy phosphate contents were lower in the ischemic ear than the control ear. Wound healing times were longer in the ischemic ear than in the non-ischemic ear when the same treatment was used. The technique has now been used on more than 80 rabbits in which 23 were diabetic (diabetes time ranging from 2 weeks to 2 years). No single rabbit has developed any surgical complications such as bleeding, infection, or rupture in the skin incisions. The model has many advantages, such as little skin disruption, longer ischemic time, and higher success rate, when compared to many other models. It can be safely used in animals with reduced resistance, and can also be modified to meet different testing requirements.

We have developed a minimally invasive technique to create a rabbit ischemic ear wound model by dividing the central artery and nerve and the cranial neurovascular bundle. A subcutaneous tunnel then cuts all subcutaneous tissues. This procedure causes minimal skin disruption and can be safely used in diabetic animals.

Una tecnica semplificata per produrre un modello di lesione ischemica

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Remote Magnetic Navigation for Accurate, Real-time Catheter Positioning and Ablation in Cardiac Electrophysiology Procedures

New remote navigation systems have been developed to improve current limitations of conventional manually guided catheter ablation in complex cardiac substrates such as left atrial flutter. This protocol describes all the clinical and invasive interventional steps performed during a human electrophysiological study and ablation to assess the accuracy, safety and real-time navigation of the Catheter Guidance, Control and Imaging (CGCI) system. Patients who underwent ablation of a right or left atrium flutter substrate were included. Specifically, data from three left atrial flutter and two counterclockwise right atrial flutter procedures are shown in this report. One representative left atrial flutter procedure is shown in the movie. This system is based on eight coil-core electromagnets, which generate a dynamic magnetic field focused on the heart. Remote navigation by rapid changes (msec) in the magnetic field magnitude and a very flexible magnetized catheter allow real-time closed-loop integration and accurate, stable positioning and ablation of the arrhythmogenic substrate.

This report provides a detailed description of a new remote navigation system based on magnetic driven forces, which has been recently introduced as a new robotic tool for human cardiac electrophysiology procedures.

Navigazione magnetica a distanza per Preciso, posizionamento del catetere in tempo reale e ablazione in Elettrofisiologia Cardiaca Procedure

New remote navigation systems have been developed to improve current limitations of conventional manually guided catheter ablation in complex cardiac ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

The lower urinary tract (LUT) functions as a dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a convenient time. While storing urine, however, the bladder is exposed for prolonged periods to waste products. By acting as a tight barrier, the epithelial lining of the LUT, the urothelium, avoids re-absorption of harmful substances. Moreover, noxious chemicals stimulate the bladder's nociceptive innervation and initiate voiding contractions that expel the bladder's contents. Interestingly, the bladder's sensitivity to noxious chemicals has been used successfully in clinical practice, by intravesically infusing the TRPV1 agonist capsaicin to treat neurogenic bladder overactivity1. This underscores the advantage of viewing the bladder as a chemosensory organ and prompts for further clinical research. However, ethical issues severely limit the possibilities to perform, in human subjects, the invasive measurements that are necessary to unravel the molecular bases of LUT clinical pharmacology. A way to overcome this limitation is the use of several animal models2. Here we describe the implementation of cystometry in mice and rats, a technique that allows measuring the intravesical pressure in conditions of controlled bladder perfusion.
	After laparotomy, a catheter is implanted in the bladder dome and tunneled subcutaneously to the interscapular region. Then the bladder can be filled at a controlled rate, while the urethra is left free for micturition. During the repetitive cycles of filling and voiding, intravesical pressure can be measured via the implanted catheter. As such, the pressure changes can be quantified and analyzed. Moreover, simultaneous measurement of the voided volume allows distinguishing voiding contractions from non-voiding contractions3.
	Importantly, due to the differences in micturition control between rodents and humans, cystometric measurements in these animals have only limited translational value4. Nevertheless, they are quite instrumental in the study of bladder pathophysiology and pharmacology in experimental pre-clinical settings. Recent research using this technique has revealed the key role of novel molecular players in the mechano- and chemo-sensory properties of the bladder.

Cystometry is an efficient technique to measure bladder function of small animals in vivo. The bladder is continuously infused at rates controlled through an intravesical catheter, whereas the urethra is left free for micturition. This allows for repetitive filling and emptying of the bladder, while intravesical pressure and voided volume are recorded.

L&#39;uso di cistometria in piccoli roditori: A Study of Chemosensation vescica

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

Bilaterale occlusione comune Arteria carotide come uno stimolo precondizionamento in grado di indurre tolleranza ischemica precoce di focale Ischemia Cerebrale

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

The adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that responds to a need for enhanced lung perfusion and shows robust neovascularization. Pulmonary vascular ischemia induced by pulmonary artery obstruction has been shown to result in rapid systemic arterial angiogenesis in man as well as in several animal models. Although the histologic assessment of the time course of bronchial artery proliferation in rats was carefully described by Weibel 1, mechanisms responsible for this organized growth of new vessels are not clear. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia in the rat that leads to bronchial neovascularization. Quantification of the extent of angiogenesis presents an additional challenge due to the presence of the two vascular beds within the lung. Methods to determine functional angiogenesis based on labeled microsphere injections are provided.

The lung is perfused by both the systemic bronchial artery and pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that shows robust neovascularization. Cessation of pulmonary blood flow promotes brisk bronchial angiogenesis. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia that promotes bronchial neovascularization.

L&#39;angiogenesi nel polmone del ratto ischemica

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment epithelium (RPE) cells. RPE provide critical support for photoreceptors and death or dysfunction of RPE cells is characteristic of age-related macular degeneration (AMD), the leading cause of permanent vision loss in people age 55 and older. While no cure for AMD has been identified, implantation of healthy RPE in diseased eyes may prove to be an effective treatment, and large numbers of RPE cells can be readily generated from pluripotent stem cells. Several interesting questions regarding the safety and efficacy of RPE cell delivery can still be examined in animal models, and well-accepted protocols used to inject RPE have been developed. The technique described here has been used by multiple groups in various studies and involves first creating a hole in the eye with a sharp needle. Then a syringe with a blunt needle loaded with cells is inserted through the hole and passed through the vitreous until it gently touches the RPE. Using this injection method, which is relatively simple and requires minimal equipment, we achieve consistent and efficient integration of stem cell-derived RPE cells in between the host RPE that prevents significant amount of photoreceptor degeneration in animal models. While not part of the actual protocol, we also describe how to determine the extent of the trauma induced by the injection, and how to verify that the cells were injected into the subretinal space using in vivo imaging modalities. Finally, the use of this protocol is not limited to RPE cells; it may be used to inject any compound or cell into the subretinal space.

Here we present a community accepted protocol in multimedia format for subretinally injecting a bolus of RPE cells in rats and mice. This approach can be used for determining rescue potentials, safety profiles, and survival capacities of grafted RPE cells upon implantation in animal models of retinal degeneration.

Esecuzione sottoretinico Iniezioni in roditori di agire cellule retiniche epitelio pigmentato in sospensione

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the world&#8217;s 2.9 million neonatal deaths. Animal models of HIE have contributed to the understanding of the pathophysiology in HIE, and have highlighted the dynamic process that occur in brain injury due to perinatal asphyxia. Thus, animal studies have suggested a time-window for post-insult treatment strategies. Hypothermia has been tested as a treatment for HIE in pdiglet models and subsequently proven effective in clinical trials. Variations of the model have been applied in the study of adjunctive neuroprotective methods and piglet studies of xenon and melatonin have led to clinical phase I and II trials1,2. The piglet HIE model is further used for neonatal resuscitation- and hemodynamic studies as well as in investigations of cerebral hypoxia on a cellular level. However, it is a technically challenging model and variations in the protocol may result in either too mild or too severe brain injury. In this article, we demonstrate the technical procedures necessary for establishing a stable piglet model of neonatal HIE. First, the newborn piglet (&#60; 24 hr old, median weight 1500 g) is anesthetized, intubated, and monitored in a setup comparable to that found in a neonatal intensive care unit. Global hypoxia-ischemia is induced by lowering the inspiratory oxygen fraction to achieve global hypoxia, ischemia through hypotension and a flat trace amplitude integrated EEG (aEEG) indicative of cerebral hypoxia. Survival is promoted by adjusting oxygenation according to the aEEG response and blood pressure. Brain injury is quantified by histopathology and magnetic resonance imaging after 72 hr.

Hypoxic-ischemic encephalopathy following perinatal asphyxia can be studied using animal models. We demonstrate the procedures necessary for establishing a piglet model of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy.

Un modello di Piglet neonatale Hypoxic-ischemica Encefalopatia

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. It has become important to measure a person's activities in daily life, and not just measure their capacity for activity in the structured environment of a clinic or laboratory. A wearable sensor that is now enabling measurement of daily movement is the accelerometer. Accelerometers are commercially-available devices resembling large wrist watches that can be worn throughout the day. Data from accelerometers can quantify how the limbs are engaged to perform activities in peoples' homes and communities. This report describes a methodology to collect accelerometry data and turn it into clinically-relevant information. First, data are collected by having the participant wear two accelerometers (one on each wrist) for 24 h or longer. The accelerometry data are then downloaded and processed to produce four different variables that describe key aspects of upper limb activity in daily life: hours of use, use ratio, magnitude ratio, and the bilateral magnitude. Density plots can be constructed that visually represent the data from the 24 h wearing period. The variables and their resultant density plots are highly consistent in neurologically-intact, community-dwelling adults. This striking consistency makes them a useful tool for determining if upper limb daily performance is different from normal. This methodology is appropriate for research studies investigating upper limb dysfunction and interventions designed to improve upper limb performance in daily life in people with stroke and other patient populations. Because of its relative simplicity, it may not be long before it is also incorporated in clinical neurorehabilitation practice.

This protocol describes a method to quantify upper limb performance in daily life using wrist-worn accelerometers.

Un metodo per la quantificazione degli arti superiori performance nella vita quotidiana che utilizzano accelerometri

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Remote Laboratory Management: Respiratory Virus Diagnostics

An uptick in recent pandemics (Ebola, Zika, MERS, influenza, etc.) underlines the need for a more 'nimble,' coordinated response that addresses a multitude of issues ranging from transportation, access, facilities, equipment, and communication to provider training. To address this need, we have developed an innovative, scalable, logistics-enhanced, mobile, laboratory facility for emergencies and epidemics in resource-constrained global settings. Utilizing a background in clinical operations as an academic medical center, we designed a rapidly-deployable, modular BSL-2 and BSL-3 facility with user-friendly software for tracking and management of drugs and supplies in remote regions during epidemics and outbreaks. Here, we present our intermodal, mobile, expandable shipping-container laboratory units. The design of the laboratory facilitates off-grid usage by minimizing power consumption and allowing alternate water sources. The unit's information communication technology (ICT) platform provides (i) user-friendly tablet-based documentation, (ii) enhanced tracking of patients and supplies, and (iii) integrated communication onsite with built-in telehealth capabilities. To ensure quality in remote environments, we have developed a checklist for a basic laboratory workflow and a protocol for respiratory viral diagnosis using reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). As described, this innovative and comprehensive approach allows for the provision of laboratory capability in resource-limited global environments.

A rapidly-deployable, off-grid laboratory has been designed and built for remote, resource-constrained global settings. The features and critical aspects of the logistically-enhanced, expandable, multifunctional laboratory modules are explored. A checklist for a basic laboratory workflow and a protocol for a respiratory viral diagnostic test are developed and presented.