Name: surgical techniques for catheter placement and 5/6 nephrectomy in murine models of peritoneal dialysis
Uploaded: 2018-07-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 11 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Surgical Techniques for Catheter Placement and 5/6 Nephrectomy in Murine Models of Peritoneal Dialysis at JoVE.com

Autori ringraziano Ferrantelli E. e G. Liappas per il loro supporto impostazione del protocollo di 5/6 di nefrectomia, R. Sánchez-Díaz e P. Martín per l'assistenza con valutazioni di azoto ureico e Hevia E. e F. Núñez per l'assistenza con cura di topi. Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni SAF2016-80648R dal "Ministerio de Economía y Competitividad" / Fondo Europeo de Desarrollo Regional (MINECO/FEDER) di Manuel López-Cabrera e PI 15/00598 da Fondo de Investigaciones Sanitarias (FIS)-fondi FEDER, a Abelardo Aguilera.

Tutti i metodi descritti qui sono stati approvati dal comitato di uso di biologia molecolare centro Severo Ochoa (Madrid, Spagna) e istituzionali Animal Care.
Nota: Sono stati utilizzati topi femminili C57BL/6J 12 a 14 settimane di età e peso di circa 20 grammi all'inizio dello studio. Tutti gli animali sono stati alloggiati in condizioni standard e ci hanno dato acqua e cibo ad libitum. Condizioni di salute sono state controllate tutti i giorni. Il materiale necessario, come guanti, drappeggio, catetere, sutura e aghi deve essere sterile.
1. Posizionare il catetere
Nota: Se i reni non vengono rimossi, essi rimangono completamente funzionale, quindi non considera l'effetto dell'uremia, permettendo così lo studio dell'esposizione PDF in isolamento. L'intervento consiste in introducendo solo all'estremo distale del catetere nella cavità peritoneale e posizionando la porta di accesso sul retro dell'animale, fornendo accesso ad esso. La procedura per inserire il catetere è come segue:
<ol><li>Posizionare il mouse in un'aula di induzione e fornire l'anestesia usando 4% isoflurane e ossigeno con una portata di 0,4 L/min fino alla perdita del riflesso di raddrizzamento.<ol>
<li>Mantenere l'animale con isoflurano 2% in ossigeno 100% con un flusso di 0,3 L/min per mezzo di un tubo di musetto collegato all'apparato di anestesia. Confermare la corretta amputate valutando il tono muscolare e la risposta alla stimolazione.</li>
		<li>Controllare la velocità e la profondità di respirazione durante tutto il processo. Usare pomata veterinario sugli occhi per prevenire la secchezza mentre sotto anestesia. È preferibile se le procedure sono eseguite in un flusso di gabinetto per garantire il mantenimento di condizioni di sterilità durante interventi chirurgici.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Radere il fianco destro e la parte posteriore degli animali al fine di eseguire l'intervento chirurgico e successivamente iniettare il fluido alla porta di accesso in una zona pulita. Metti l'animale in posizione laterale che riposa sul fianco sinistro della tabella chirurgica, con un impianto termico per garantire che la sua temperatura non cadrà.</li>
	<li>Disinfettare la zona con una soluzione di 1% clorexidina gluconato. Fare un piccolo taglio (0,5 cm) con le forbici smussate della pelle sul fianco destro del corpo e separare attentamente con l'aiuto delle forbici dallo strato di muscolo adiacente, così che tutta la zona della parte posteriore dell'animale è ben separata per poi essere in grado di introdurre la porta di accesso con facilità. Si prega fare riferimento Figura 1 per visualizzare i materiali necessari per seguire la procedura.</li>
	<li>Praticare una piccola incisione di circa 1 mm di diametro attraverso lo strato muscolare e inserire la punta del catetere e il primo anello di plastica. I danni peritoneali sono minimo.</li>
	<li>Suturare la parete peritoneale strettamente intorno al catetere, con una sutura non assorbibile 5.0 o 6.0. Un anello di plastica quindi si trova all'interno della cavità peritoneale e l'altra tra il muscolo e la pelle. Il catetere è quindi fissato per impedire la colatura nello spazio sottocutaneo di fluido.</li>
	<li>Inserire la porta di accesso nello spazio sottocutaneo verso la coda del mouse, senza fissandola ad una posizione di correzione per la pelle, come potrebbe prudere e gli animali e si possono graffiare la pelle un po'.</li>
	<li>Chiudere la ferita della pelle con una sutura non assorbibile 5.0 o 6.0. Rimuovere l'anestesia per inalazione e permettere all'animale di recuperare la coscienza. Non lasciare incustodito il mouse fino a quando ha riacquistato coscienza sufficiente per mantenere decubito sternale. Quando completamente recuperato, mouse possa essere restituito alla compagnia di altri animali. Nota: Gli esperimenti possono iniziare dopo 4-7 giorni di recupero postoperatorio.</li>
	<li>Fornire l'analgesia sciogliendo 3ml di ibuprofene (20 mg/mL) in 250 mL di acqua potabile per il giorno dell'intervento chirurgico.</li>
	<li>Durante il periodo post-chirurgico, controllare lo stato di salute dell'animale al giorno, controllando che non esistono aree arrossata sulla pelle, capelli ispidi o ferite.</li>
	<li>Iniettare il fluido tenendo l'animale (senza anestetizzante esso) per la coda e afferrando la porta di accesso con una sola mano e l'ago con l'altro. Disinfettare la zona con soluzione di 1% clorexidina gluconato prima dell'iniezione. È interessante utilizzare aghi speciali (aghi di Huber), che sono smussati per parte invece di pierce il setto in silicone della porta di accesso (Figura 1A). Due iniezioni al giorno durante i 40 giorni sono sufficienti per osservare alterazioni peritoneale (Figura 3).</li>
	<li>Al termine dell'esperimento, eutanasia il mouse di anidride carbonica asfissia o dislocazione cervicale.</li>
</ol>2. esecuzione di un 5/6 di nefrectomia e posizionando il catetere
Nota: È possibile eseguire un 5/6 di nefrectomia, consentendo solo una funzione renale residua per assomigliare meglio la situazione nei pazienti del Palladio. In questo caso, i campioni di siero dovrebbero adottare per analizzare urea livelli estraendo 250 μL di sangue tramite vena facciale puntura, almeno un giorno prima di iniziare gli interventi chirurgici, al centro del trattamento e quando sacrificare gli animali. È preferibile se le procedure sono eseguite in un flusso di gabinetto per garantire il mantenimento di condizioni di sterilità durante interventi chirurgici.
<ol><li>Anestetizzare i topi utilizzando isoflurano come nel passaggio 1.1.</li>
	<li>Fornire l'analgesia con 0,1 mg/kg di buprenorfina, iniettato per via sottocutanea al collo dell'animale e sciogliendo 3ml di ibuprofene (20mg/ml) in 250 ml di acqua potabile per il giorno prima e il giorno dell'intervento chirurgico.</li>
	<li>Radere i laterali e la parte posteriore degli animali al fine di eseguire gli interventi chirurgici e poi iniettare il fluido alla porta di accesso in una zona pulita.</li>
	<li>Eseguire un'incisione di circa 0,5 cm nella pelle, sul lato sinistro, vicino le costole, di avere accesso diretto al rene di sinistra.</li>
	<li>Aprire una piccola incisione nel muscolo di prendere il rene di sinistra fuori il peritoneo, rimuovendo la capsula e la ghiandola surrenale. Per rimuovere la capsula è necessario tenere meglio il rene di fuori della cavità peritoneale.</li>
	<li>Masterizzare e tagliare gli estremi del rene con un cauterizzatore (vedere la Figura 1 per i materiali necessari).</li>
	<li>Reintrodurre il rene nella cavità peritoneale e suturare le ferite presso il muscolo e la pelle con sutura insolubile 5.0 o 6.0.</li>
	<li>Il giorno dopo, completamente rimuovere il rene di destra e inserire il catetere utilizzando la stessa incisione per rimuovere il rene. Ancora una volta, anestetizzare il mouse con isoflurano e iniettare per via sottocutanea 0,1 mg/kg di buprenorfina appena prima della procedura chirurgica. Anche sciogliere 3 ml di ibuprofene (20mg/ml) in 250 ml di acqua potabile il giorno prima e il giorno dell'intervento chirurgico.</li>
	<li>Fare un'incisione nella pelle di circa 0,5 cm e, con l'aiuto delle forbici, separare la pelle nella parte posteriore dell'animale dal muscolo di aprire lo spazio dove sarà situata la porta di accesso.</li>
	<li>Eseguire un taglio nel muscolo (circa 0.3-0.4 cm) di prendere il rene di destra fuori della cavità peritoneale.</li>
	<li>Rimuovere la capsula e la ghiandola surrenale per avere un migliore accesso al rene. Legare della vena renale, arteria e uretere con sutura non assorbibile 5.0 o 6.0 e rimuovere completamente il rene.</li>
	<li>Suturare la ferita al muscolo peritoneale, introdurre l'estremità del catetere in modo che il muscolo deve rimanere tra i due anelli di plastica, come spiegato in precedenza (punto 1.5).</li>
	<li>Introdurre la porta di accesso nello spazio sottocutaneo e suturare la pelle come spiegato nella procedura 1.6 e 1.7. Nota: Topi devono riposare per almeno 10 giorni da questi interventi affinché le ferite al muscolo peritoneale sono completamente guarite e non ci sarà nessuna perdita nello spazio sottocutaneo durante l'iniezione del liquido. Iniettare il fluido come al punto 1.10.</li>
	<li>Al termine dell'esperimento, eutanasia degli animali di anidride carbonica asfissia o dislocazione cervicale.</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

I primi dati pubblicati analizzando le alterazioni PD utilizzando una tecnica di "chiudere il sistema" è stati effettuati nel 200929 . Questo sistema vicino significa che l'intero dispositivo è situato all'interno del corpo e liquido viene iniettato con un ago attraverso una porta di accesso. Il problema tecnico più importante nei modelli animali a lungo termine dell'infusione di fluidi attraverso un catetere è l'avvenimento dell'ostruzione. Le opzioni disponibili sono per eseguire omentectomi...

Funzione del rene e malattie renali
I reni sono organi essenziali coinvolti nell'omeostasi, filtrazione del sangue e la produzione dell'ormone. Ci sono diverse condizioni che portano ad insufficienza renale e alla successiva comparsa dell'uremia, che è stato definito come il gruppo di sintomi sistemici dovuti all'accumulo di rifiuti prodotti nel sangue conservato a causa di disordini del rene funzione1. Inoltre, poiché la capacità omeostatica viene influenzata anche quando c'è un'insufficienza renale, ipertensione a causa di sovraccarico di volume può verificarsi, che è anche pericoloso in quanto può portare a insufficienza cardiaca1. Quando la capacità funzionale dei reni è meno di 10% - 15%, il paziente deve sottoporsi ad una delle seguenti opzioni terapeutiche: emodialisi, dialisi peritoneale (PD) o trapianto renale.
PD è un'opzione interessante che permette ai pazienti di continuare il trattamento dalla comodità della propria casa o praticamente ovunque, evitando così la necessità per l'ospedale frequenti visite e soggiorni. La tecnica di PD Elimina piccole molecole tossiche e l'acqua in eccesso generato dal corpo2 attraverso l'instillazione di un liquido osmotico (dialisi peritoneale liquido, PDF) nella cavità peritoneale. Questo instillazione genera il gradiente osmotico necessario per lo scambio di soluti e acqua fra il capillare peritoneale e PDF, un processo noto come ultrafiltrazione (UF).
Peritoneale lesione indotta da dialisi peritoneale
La cavità peritoneale è coperto da una membrana (PM) composta da un monostrato di cellule mesoteliali che riposa su una matrice, che ospita anche alcuni vasi sanguigni, fibroblasti, macrofagi e altre popolazioni cellulari. Purtroppo, la membrana peritoneale soffre sempre alcune alterazioni durante il trattamento di PD, quali apoptosi e perdita di cellule mesoteliali, transizione mesenchimale di mesothelial (MMT) e cellule endoteliali (fine-MT), reclutamento di cellule infiammatorie e fibrociti, alterazioni vascolari, angiogenesi, linfoangiogenesi e/o fibrosi3,4,5,6,7,8,9. Queste alterazioni sono responsabili dello sviluppo di un UF capacità guasto10, che preclude il proseguimento della terapia, che richiedono che il paziente deve ricevere un trattamento alternativo per sopravvivere (emodialisi o trapianto renale) . Pertanto, per questi pazienti, è essenziale per ritardare o controllare lo sviluppo di queste alterazioni peritoneale.
È stato ipotizzato che uremia da solo può causare infiammazione11, ma il fattore più importante locale è bioincompatibility PDF. Maggior parte dei file PDF utilizzare il glucosio come l'agente osmotico, che provoca l'infiammazione. A causa di tempi di conservazione PDF e sterilizzazione, glucosio subisce un processo di degradazione, e appaiono nuovi prodotti da questa reazione, generando più infiammazione, MMT e apoptosi12,13. Inoltre, c'è anche la possibilità di danni meccanici a causa del metodo di instillazione. Tutti questi fattori, che agiscono continuamente, possono generare uno stato infiammatorio persistente e ricorrente, che conducono all'infiammazione cronica, che spinge a deterioramento della membrana e, conclusivamente, UF fallimento. Come potrebbe essere ridotto o evitato questo danno è ancora una questione di studio.
Analizzando lo sviluppo delle lesioni: dai campioni umani ai modelli animali
Lavorare con biopsie umane è un fattore limitante per la difficoltà di ottenere campioni di tessuto. Questi esempi possono essere ottenuti soltanto da interventi chirurgici eseguiti a causa di malfunzionamento del catetere o trapianto, di solito dopo anni di trattamento di PD. Questo approccio è utile per l'analisi delle mutazioni patologiche ha sofferto da una membrana peritoneale esposta in PDF, ma non è sufficiente per studiare lo sviluppo del processo. Un'altra possibilità è quella di analizzare cellule drenate da un effluente di dialisi, ma questo ancora non riesce a fornire uno scenario completo. L'Unione di entrambe le tecniche è possibile solo con modelli animali. La struttura peritoneale è simile tra i mammiferi, e quindi ci sono modelli con diverse specie animali. Ci sono pochi studi basati sulle pecore (Rodela et al. 14 e Barrell et al. 15) e coniglio16,17 modelli; Tuttavia, gli animali più piccoli sono preferibili in quanto essi sono più facili da casa e mantenere e sono anche più economici. L'uso di ratti18,19,20,21,22,23,24 offre un tempo più breve di trattamento necessario per osservare alterazioni morfo-funzionali. Ha rappresentato un modello molto utile per esplorare diverse questioni quali l'effetto delle droghe anti-fibrotici come ad esempio BMP-7 (osso morfogenetico protein-7)25 e RAS (sistema renina-angiotensina) targeting26,27 , 28.
Tuttavia, il modello murino è emerso come un modello ideale con molti vantaggi rispetto ad altri. Il vantaggio più interessante è la possibilità di utilizzare geneticamente modificati topi per studiare le basi molecolari e cellulari di danno peritoneale. Infatti, i topi sono spesso impiegati per l'analisi di numerose malattie, come ci sono molti diversi ceppi con vari ambiti di provenienza genetici ben noti. Altri vantaggi includono lo spazio ridotto necessario per alloggiamento, ridotto costo di esperimenti (a causa di dimensioni ridotte degli animali), la maneggevolezza, la disponibilità dei reagenti e la crescente quantità di informazioni disponibili su diversi ceppi di topi dal momento che sono stati gli animali più comunemente usati nella ricerca.
Un modello basato su topi che impiegano un dispositivo impiantato è stato il modello più recente affermato per PD29,30ed è stato indicato per imitare peritoneale deterioramento ha sofferto dai pazienti del Palladio a causa dell'esposizione ai file PDF. Questo modello ha collaborato per comprendere che i processi patologici implicati31,32,33. Inoltre, è stato utilizzato per convalidare potenziali vari trattamenti per il miglioramento di questo deterioramento utilizzando modulatori immuni e farmaci anti-infiammatori e altri anti-fibrotico e agenti anti-angiogenici, quali gli inibitori di COX-2 (ciclo-ossigenasi-2) 34, di agonisti PPAR-γ (peroxisome proliferator-attivato del ricevitore-γ)35, Tamoxifen36, Paricalcitol (un attivatore di recettore della vitamina D che modula la reazione immunitaria)37, rapamicina38 e Nebivolol 39.
Sviluppo del modello di Mouse con un catetere impiantato
L'obiettivo di questo modello è simile, per quanto possibile, la tecnica utilizzata nei pazienti affetti da PD, permettendo di eseguire trattamenti estesi di PD nei piccoli animali. Finora, sono state testate tre tecniche per instillazione di liquido di dialisi nel peritoneo nei topi. Quello primo, cieco puntura della parte anteriore della parete addominale, è controverso a causa dei rischi più che possono incorrere, quali danni peritoneali, sanguinamento e, come è puntura ciecamente svolte, viscerale. La seconda tecnica è il cosiddetto "open permanente system", in cui il dispositivo per l'iniezione di fluido è posizionato all'esterno del corpo. Questa procedura è più simile a quello effettuato in esseri umani. Tuttavia, esso non consente lo sviluppo di esperimenti a lungo termine, come si possono aumentare le probabilità di infezione e generalmente richiede l'uso di anestesia per instillare PDF, che possono interferire con i risultati. La terza tecnica è il "sistema chiuso". Con questo approccio, l'intero dispositivo utilizzato per instillazione fluido si trova all'interno del corpo dell'animale. Liquido viene iniettato con un ago attraverso una porta di accesso, che viene inserito per via sottocutanea. Questa procedura riduce il rischio di infezione peritoneale e sanguinamento, nonché la necessità di anestesia.
Per studiare l'effetto dell'uremia in PD, è stato anche un recente modello murino stituito40 sulla base del modello di infusione di PDF con catetere. Questo modello porta a una nuova tecnica per eseguire una nefrectomia nei topi, riducendo così la funzione renale. Nel presente articolo, è stata sviluppata una modifica del protocollo impiegato da Ferrantelli et nel 201540 . Questo nuovo protocollo permette l'impianto di catetere durante la nefrectomia, riduce la lunghezza della ferita inflitta durante la chirurgia e facilita l'accesso ai reni.

<table><tbody><tr><td>Minute Mouse Port 4French with retention beads and cross holes</td><td>Access technologies</td><td>MMP-4S-061108A</td><td></td></tr><tr><td>Posi-Grip Huber point needles 25 ga. X 1/2&amp;acute;&amp;acute;&amp;nbsp;</td><td>Access technologies</td><td>PG25-500</td><td></td></tr><tr><td>High Temperature Cautery Kit</td><td>Bovie</td><td>18010-00</td><td></td></tr><tr><td>Forane</td><td>abbVie</td><td>880393.4 HO</td><td></td></tr><tr><td>non absorbable suture 6/0</td><td>Laboratorio Agar&amp;oacute;</td><td>6121</td><td></td></tr><tr><td>Scissors&amp;nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td>forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>clamp</td><td>Fine Science Tools</td><td>13002-10</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine 0,3 mg/ml</td><td></td><td></td><td>pharmaceutical product</td></tr><tr><td>cotton swabs</td><td></td><td></td><td>pharmaceutical product</td></tr><tr><td>Dalsy (Ibuprofen) 20mg/mL oral suspension</td><td>AbbVie&amp;nbsp;S.R.L.&amp;nbsp;</td><td></td><td>pharmaceutical product</td></tr></tbody></table>

surgical techniques for catheter placement and 5/6 nephrectomy in murine models of peritoneal dialysis

La dialisi peritoneale (PD) è una terapia di sostituzione renale coerenza sulla gestione e recupero posteriore di un fluido iperosmotico nella cavità peritoneale per drenare acqua e tossici dei metaboliti che funzionalmente insufficienti reni non sono in grado di eliminare. Purtroppo, questa procedura si deteriora il peritoneo. Danno tissutale innesca l'inizio di infiammazione per guarire la ferita. Se la lesione persiste e l'infiammazione diventa cronica, può portare alla fibrosi, che è un evento comune in molte malattie. Nel PD, infiammazione cronica e fibrosi, insieme ad altri processi specifici relazionati a queste ultime, provocare un deterioramento capacità di ultrafiltrazione, che significa il fallimento e la conseguente cessazione della tecnica. Lavorare con campioni umani fornisce informazioni su questo deterioramento ma presenta limiti tecnici ed etici per ottenere biopsie. Modelli animali sono essenziali per studiare questo deterioramento in quanto essi superare queste carenze.
Un modello di infusione cronica del mouse è stato sviluppato nel 2008, che beneficia della vasta gamma di topi geneticamente modificati, aprendo la possibilità di studiare i meccanismi coinvolti. Questo modello si avvale di un dispositivo su misura progettato per topi, che consiste di un catetere collegato a una porta di accesso che viene inserita per via sottocutanea nella parte posteriore dell'animale. Questa procedura evita il continua puntura del peritoneum durante gli esperimenti a lungo termine, riducendo le infezioni e l'infiammazione a causa di iniezioni. Grazie a questo modello, il danno peritoneale indotto tramite l'esposizione cronica di fluido del PD è stato caratterizzato e modulato. Questa tecnica permette l'infusione di grandi volumi di fluidi e poteva essere utilizzata per lo studio di altre malattie in cui è necessario l'inoculazione di farmaci o altre sostanze per lunghi periodi di tempo.
Questo articolo viene illustrato il metodo per l'inserimento chirurgico del catetere in topi. Inoltre, spiega la procedura per 5/6 di nefrectomia simulare lo stato di insufficienza renale presente nei pazienti del Palladio.

La figura 1 Mostra tutti i materiali necessari per seguire le procedure descritte nella sezione protocollo. In questo esempio, topi sottoposti o non a nefrectomia (8 animali per gruppo) (Figura 2) sono stati esposti durante 40 giorni (due iniezioni al giorno, in attesa di almeno 2 ore tra i due) ad una miscela di due diversi file PDF, comunemente usati nella pratica clinica: Extraneal (PDF basati su icodestrina) e Dianeal (PDF ba...

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Surgical Techniques for Catheter Placement and 5/6 Nephrectomy in Murine Models of Peritoneal Dialysis

Tecniche chirurgiche per la disposizione del catetere e 5/6 di nefrectomia nei modelli murini di dialisi peritoneale

Questo articolo viene illustrato il metodo per l'inserimento chirurgico in topi di un catetere intraperitoneale collegata a una porta di accesso che è posizionata nella parte posteriore dell'animale. Inoltre, spiega la procedura per 5/6 di nefrectomia assomigliare lo stato uremico di pazienti del Palladio.

Peritoneal dialysis (PD) is a renal replacement therapy consistent on the administration and posterior recovery of a hyperosmotic fluid in the peritoneal ...

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Research

JoVE Journal

Engineering

15.1K Views.  Spanish National Research Council. Questo articolo viene illustrato il metodo per l'inserimento chirurgico in topi di un catetere intraperitoneale collegata a una porta di accesso che è posizionata nella parte posteriore dell'animale. Inoltre, spiega la procedura per 5/6 di nefrectomia assomigliare lo stato uremico di pazienti del Palladio.

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Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and podocytes with their slit diaphragms. The delicate structure of the glomerular filter, especially the slit diaphragm, relies on the interplay of diverse cell surface proteins. Studying these cell surface proteins has so far been limited to in vitro studies or histologic analysis. Here, we present a murine in vivo biotinylation labeling method, which enables the study of glomerular cell surface proteins under physiologic and pathophysiologic conditions. This protocol contains information on how to perfuse mouse kidneys, isolate glomeruli, and perform endogenous immunoprecipitation of a protein of interest. Semi-quantitation of glomerular cell surface abundance is readily available with this novel method, and all proteins accessible to biotin perfusion and immunoprecipitation can be studied. In addition, isolation of glomeruli with or without biotinylation enables further analysis of glomerular RNA and protein as well as primary glomerular cell culture (i.e., primary podocyte cell culture).

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Here we present a protocol for murine in vivo labeling of glomerular cell surface proteins with biotin. This protocol contains information on how to perfuse mouse kidneys, isolate glomeruli, and perform endogenous immunoprecipitation of the protein of interest.

Isolamento dei Glomeruli e In Vivo di etichettatura delle proteine di superficie delle cellule glomerulari

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A Murine Model of Hemodialysis Access-Related Hand Dysfunction

Chronic kidney disease is a major public health problem, and the prevalence of end-stage renal disease (ESRD) requiring chronic renal replacement therapies such as hemodialysis continues to increase. Autogenous arteriovenous fistula (AVF) placement remains a primary vascular access option for ESRD patients. Unfortunately, approximately half of the hemodialysis patients experience dialysis access-related hand dysfunction (ARHD), ranging from subtle paresthesia to digital gangrene. Notably, the underlying biologic drivers responsible for ARHD are poorly understood, and no adequate animal model exists to elucidate the mechanisms and/or develop novel therapeutics for the prevention/treatment of ARHD. Herein, we describe a new mouse model in which an AVF is created between the left common iliac artery and vein, thereby facilitating the assessment of limb pathophysiology. The microsurgery includes vessel isolation, longitudinal venotomy, creation of arteriovenous anastomosis, and venous reconstruction. Sham surgeries include all the critical steps except for AVF creation. Iliac AVF placement results in clinically relevant alterations in central hemodynamics, peripheral ischemia, and impairments in hindlimb neuromotor performance. This novel preclinical AVF model provides a useful platform that recapitulates common neuromotor perturbations reported by hemodialysis patients, allowing researchers to investigate the mechanisms of ARHD pathophysiology and test potential therapeutics.

This protocol details the surgical steps of murine common iliac arteriovenous fistula creation. We developed this model to study hemodialysis access-related limb pathophysiology.

Un modello murino di disfunzione della mano correlata all'accesso all'emodialisi

Chronic kidney disease is a major public health problem, and the prevalence of end-stage renal disease (ESRD) requiring chronic renal replacement ...

A Mouse 5/6th Nephrectomy Model That Induces Experimental Uremic Cardiomyopathy

Chronic kidney disease (CKD) is a great risk factor for cardiovascular disease events and mortality, and progressively develops to the clinical phenotype called "uremic cardiomyopathy". We describe here an experimental CKD mouse model, named 5/6th partial nephrectomy (PNx) with pole ligation, which developed uremic cardiomyopathy at four weeks post-surgery. This PNx model was performed by a two-step surgery. In step-one surgery, both poles of the left kidney were ligated. In step-two surgery, which was performed 7 days after the step-one surgery, the right kidney was removed. For the sham surgery, the same surgery procedures were performed but without pole ligation of the left kidney or removal of the right kidney. The surgical procedures are easier and less time-consuming, compared to other methods. However, the remnant functional renal mass is not as easily controlled as the renal artery ligation. Four weeks after surgery, in comparison with the sham-operated mice, the PNx mice developed impaired renal function, anemia, cardiac hypertrophy, cardiac fibrosis, and decreased heart systolic and diastolic function.

A Mouse 5/6th Nephrectomy Model That Induces Experimental Uremic Cardiomyopathy

This manuscript provides a detailed two-step surgical procedure to perform mouse 5/6th partial nephrectomy (PNx) with pole ligation. Four weeks after surgery, in comparison with sham-operated mice, the PNx mice developed impaired renal function, anemia, cardiac hypertrophy, cardiac fibrosis, and decreased heart systolic and diastolic function.

Un Mouse 5/6th Nephrectomy modello che induce cardiomiopatia uremica sperimentale

Chronic kidney disease (CKD) is a great risk factor for cardiovascular disease events and mortality, and progressively develops to the clinical phenotype ...

Biologia

<meta charset="utf8"></head><body>Nefrectomia standardizzata 5/6 nei ratti per insufficienza renale e malperfusione

5/6 Nephrectomy Using Sharp Bipolectomy Via Midline Laparotomy in Rats

Chronic kidney disease (CKD) affects over 10% of the global population, amounting to more than 800 million individuals worldwide. The advances in the treatment of CKD have had a significant impact on patient outcomes. While in the past, CKD was often considered a death sentence, with many patients succumbing to the complications of end-stage renal disease, it is now increasingly being managed as a chronic condition with the availability of dialysis and kidney transplantation, as well as new pharmaceutical developments such as SGLT2 inhibitors or nonsteroidal mineralocorticoid receptor antagonists. 
Yet, there continues to be a growing demand for further exploration into the pathophysiological processes and potential therapeutic interventions. Reliable biological models play a crucial role in facilitating this research. Given the multifaceted nature of renal disease, which encompasses not only cell biology but also vascular microanatomy and endocrine signaling, an appropriate model must possess a level of biological complexity that only an animal model can offer, rendering rodents an obvious choice.
This manuscript, therefore, provides an intricate, systematic protocol for surgically reducing renal parenchyma through midline laparotomy and combined total and partial nephrectomy in rats for survival as well as non-survival applications. It emphasizes the critical role of precise surgical techniques in ensuring consistent and reliable outcomes. Prime examples of potential applications for this model include biomolecular and pharmaceutical studies as well as the development of innovative intraoperative imaging modalities, such as hyperspectral imaging, to objectively visualize and differentiate renal malperfusion.

<meta charset="utf8"></head><body>Nefrectomia 5/6 con bipolectomia acuta tramite laparotomia della linea mediana nei ratti

This manuscript introduces a standardized protocol for a 5/6 nephrectomy by sharp bipolectomy via midline laparotomy in a rat model, aiming to induce a state of renal insufficiency via renal parenchyma reduction with a great degree of methodical precision and low risk of technical error.

Nefrectomia 5/6 con bipolectomia acuta tramite laparotomia della linea mediana nei ratti

Chronic kidney disease (CKD) affects over 10% of the global population, amounting to more than 800 million individuals worldwide. The advances in the ...

Tecniche chirurgiche per la disposizione del catetere e 5/6 di nefrectomia nei modelli murini di dialisi peritoneale

Riepilogo

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Capitoli in questo video

Isolamento dei Glomeruli e In Vivo di etichettatura delle proteine di superficie delle cellule glomerulari

Modellazione di Carcinoma renale metastatico spontanea (MRCC) in topi dopo nefrectomia

Rene Murine Tecnica trapianto

Microdissection di segmenti di tessuto renale primario e incorporazione con tecnologia romanzo costrutto senza impalcatura

Una tecnica chirurgica modificata per il trapianto di rene nei topi

Un approccio di impianto retrogrado per il posizionamento del catetere di dialisi peritoneale nei topi

Un modello murino di disfunzione della mano correlata all'accesso all'emodialisi

Un Mouse 5/6^th Nephrectomy modello che induce cardiomiopatia uremica sperimentale

Nefrectomia 5/6 con bipolectomia acuta tramite laparotomia della linea mediana nei ratti

Nefrectomia 5/6 con bipolectomia acuta tramite laparotomia della linea mediana nei ratti