Il trapianto di rene nei topi è essenziale per lo studio dei meccanismi di rigetto acuto e cronico dell'allotrapianto. Qui introduciamo una nuova tecnica chirurgica per l'anastomosi vascolare e l'impianto ureterale nel modello di trapianto di rene addominale nei topi. Nei modelli tradizionali di trapianto di rene di topo, la parte superiore dell'aorta è legata approssimativamente alle arterie renali.
La vena renale sinistra del donatore viene transettata nella vena cava e l'aorta del donatore è divisa equamente al di sotto dell'arteria renale per essere successivamente anastomosi all'aorta addominale del ricevente. In questa tecnica modificata del trapianto di rene di topo, la vena renale sinistra del donatore viene anche transettata alla vena cava, ma l'aorta del donatore viene tagliata sopra la prole dell'arteria renale e la sua anastomosi all'aorta addominale ricevente. Mentre l'estremità donatrice dell'aorta è legata, l'arteria ureterale viene deliberatamente preservata.
Ora iniziamo la dimostrazione della procedura chirurgica. Per l'anestesia, posizionare il mouse nella scatola per inalazione di isoflurano circa 40-60 secondi al fine di indurre perdita di coscienza. Una volta che il mouse è anestetizzato, pesare il mouse.
Secondo il peso del topo, l'iniezione intraperitoneale di ketamina, xilazina, acepromazina viene somministrata al topo anestetizzato. Quando l'anestesia ha avuto effetto, tagliare la pelliccia addominale. Quindi, fissare e disinfettare il mouse sul tavolo operatorio.
Tagliare la pelle usando l'incisione addominale incrociata. Tagliare i muscoli della parete addominale. Quindi, coprire con cautela allontanare i visceri con una garza salina assorbita.
Esporre il rene sinistro, l'aorta e la vena cava inferiore. Cauterizzare attentamente le vene lombari sinistre, compresi i rami sottostanti e altri piccoli vasi, incluso il vaso surrenale sinistro. Mobilitare la regione aortica tra le arterie renali sinistra e destra di circa due millimetri di lunghezza.
Separare la vena cava inferiore infrarenale e l'aorta. E passa una pinza curva sotto l'aorta per posizionare una cravatta sciolta di sutura 7.06 attorno a questa nave. Cross clamp l'area dell'aorta sotto l'arteria renale destra e la vena cava inferiore utilizzando due morsetti microvascolari da cinque millimetri.
Trasmettere la vena renale sinistra dalla vena cava. Lavare l'aorta con un millilitro di soluzione di eparina. Stringere la legatura e tagliare l'aorta sotto la legatura e sotto il morsetto prossimale.
Preparare con cura, in modo che la delicata arteria ureterale sia completamente conservata. liberare completamente il rene sinistro e i vasi associati cauterizzando con cautela tutti i vasi che circondano il tessuto. Rimuovere il rene e conservarlo in soluzione di linea cellulare a quattro gradi.
Le fasi iniziali dell'operazione sono simili a quelle precedentemente mostrate per il topo donatore, tra cui anestesia e disinfezione. Aprire l'addome tramite incisione mediana, quindi coprire gli organi addominali con una garza bagnata usando una soluzione salina. Conservare con cura l'aorta infrarenale e assicurarsi che ogni ramo di vaso di grandi dimensioni sia cauterizzato.
Utilizzare la cauterizzazione elettrica per sezionare attentamente l'uretere sinistro in una posizione prossimale al bacino renale. Quindi, rimuovere il rene sinistro. Esporre la vena cava inferiore e l'aorta addominale e staccarle dal tessuto adiposo circostante di circa quattro millimetri di lunghezza.
Quindi cross clamp ciascuno con due morsetti microvascolari approssimativamente e distalmente di loro. Utilizzare un supporto per micro ago per guidare un ago di sutura monofilamento 10/0, che viene posizionato attraverso la parete dell'aorta dal modo prossimale a quello distale. Un'arteriotomia ellittica di circa un millimetro si ottiene con una leggera trazione verso l'alto della sutura, mentre si taglia direttamente sotto la faccia inferiore dell'ago con forbici sottili e curve.
Eseguire l'anastomosi dell'aorta donatore-ricevente in modo end-to-side. Cucire le estremità prossimali e distali dell'anastomosi. Ultimo punto utilizzando due suture 10.0 separate.
Dopo aver legato, lasciare le due lunghe suture, compreso l'ago, in posizione. Cucire continuamente il lato sinistro della parete aortale dell'anastomosi con due punti uniformemente distanziati in direzione distale-prossimale. Dopo l'ultimo punto, guidare la sutura attraverso uno spessore parziale della parete del vaso sopra la cravatta di sutura del fodero superiore e contemporaneamente esercitare una leggera trazione fino all'estremità corta della cravatta di sutura inferiore.
Nota, in questa nuova tecnica senza nodi, l'ultimo punto non è legato all'estremità corta della cravatta superiore. Capovolgere il rene trapiantato nella sua posizione normale. Ora cuci continuamente la parete destra dell'anastomosi aortale in modo prossimale a distale usando tre punti in modo prossimale a distale.
Nota, rispetto alla tecnica chirurgica convenzionale, l'ultima sutura viene fusa con la cravatta distale nelle vicinanze. Non legarlo all'estremità della sutura inferiore, tagliarlo per lasciare una lunghezza libera di circa due o tre millimetri. Tagliare la vena cava inferiore longitudinale con una lunghezza sufficiente di circa 1,5 millimetri.
Posizionare questa incisione leggermente al di sotto della sua controparte aortica. Eseguire l'anastomosi venosa utilizzando la stessa procedura di sutura precedentemente descritta con la differenza che sono necessari da quattro a cinque punti per ciascun lato dell'anastomosi. Il punto finale viene lasciato come un'estremità libera di lunghezza simile all'anastomosi aortale sopra descritta.
E la nuova tecnica dell'anastomosi senza nodi, l'ultimo punto non è legato ma lasciato libero. Ciò riduce i tempi dell'operazione e consente al chirurgo di aumentare o diminuire le dimensioni dell'anastomosi. Questo miglioramento riduce la difficoltà e le complicanze post-operatorie dell'anastomosi vascolare.
Dopo aver completato entrambe le anastomosi, utilizzare un tampone asciutto per esercitare una leggera pressione verso l'area suturata per circa 10-20 secondi. Successivamente, entrambi i morsetti possono essere rimossi. Penetrare attraverso la vescica urinaria del ricevente usando un ago dritto con sutura 10.0 e inserirlo in un lume dell'ago da 21 G per la guida.
Ora guida l'ago da 21 G per cucire un foro nel punto della precedente applicazione dell'ago ed estrarre l'ago. Cucire l'estremità dell'uretere tagliata e perforare nuovamente la vescica con questa sutura 10.0 nel punto di ingresso. Trainare il filamento 10.0 e l'uretere nella vescica urinaria attraverso il foro costruito.
Anastomosi dell'uretere del donatore nella vescica urinaria del ricevente. Qui, collegare la membrana esterna dell'uretere alla membrana esterna della parete della vescica ed eseguire suture intermittenti con tre o quattro punti. Estrarre la sutura di trazione.
Riposizionare l'intestino nella cavità addominale. Eseguire suture a due strati, prima i muscoli addominali seguiti dalla pelle per chiudere la ferita addominale. Posizionare i topi trapiantati in una camera a ossigeno e temperatura controllata per il recupero dopo l'intervento chirurgico.
Somministrare un'adeguata analgesia postoperatoria quattro giorni consecutivi dopo l'operazione. Eseguire la nefrectomia controlaterale del topo ricevente cinque giorni dopo l'anestesia del trapianto. Aumentare e registrare lo stato del mouse.
Abbiamo confrontato le tecniche di trapianto convenzionali e modificate valutando i cambiamenti istologici dei reni isotrapiantati trapiantati rispetto ai reni controlaterali del ricevente nativo. Sia il grado del trofeo dei tubuli renali che la fibrosi interstiziale renale non sono risultati significativamente diversi rispettivamente quattro e 12 settimane dopo il trapianto. In precedenza abbiamo studiato l'esito di questa nuova tecnica senza nodi e l'abbiamo confrontata con l'approccio classico in termini di aspetti tecnici della procedura interoperatoria e complicanze post-operatorie.
La tecnica modificata che viene mostrata qui è stata associata a una minore incidenza di eventi trombotici venosi arteriosi intrainnesto. Il tempo per eseguire la stenosi era significativamente inferiore e si è raggiunto un eccellente isotrapianto renale, sopravvivenza a lungo termine. Il trapianto di rene nei topi è una procedura complicata e all'avanguardia.
Questa è una nuova tecnica chirurgica per un'anastomosi vascolare e l'impianto renale impegnata a migliorare il tasso di successo complessivo, rendendolo uno strumento affidabile per studiare la risposta autoimmune dopo il trapianto di rene.
