Questo modello di interfaccia sangue-cervello umano è utile per studiare il trasferimento di molecole nel sistema neurologico. Così come per lo studio dei microbi raggiungere un tumore al dolore cerebrale infetto. L'aggiunta del mini cervello a questa barriera ematica o modello BBB consente lo studio dei nostri agenti patogeni e molecole che causano il comportamento della BBB nel cervello.
A demostrare la procedura sarà Florian Bakao, dottorando del mio laboratorio. Per impostare un mini dispositivo di inserimento della membrana in poliestere cerebrale BBB, diluire le cellule a un mezzo cellulare endoteliale incompleto di concentrazione cinque volte 10 alla quarta e aggiungere il volume appropriato di cellule a ciascuna coltura di membrana poliestere in una piastra di 12 pozzo. Quindi, posizionare gli inserti e l'incubatore di coltura cellulare fino a quando le celle non raggiungono il 100% di confluenza.
Tenere una piastra di 12 pozzetti con un millilitro di poli-D-llysina bene per quattro ore a temperatura ambiente. Seguito da un millilitro di laminina per pozzo durante la notte. Sostituire la laminina con un millilitro di mezzo cellulare endoteliale integrato con siero bovino fetale al 5% o FBS.
Posizionare il posto in un'incubatrice per un'ora. Per preparare il mini grano tripinare delicatamente gli astrociti dei neuroni umani nel chme clonare cinque cellule. Associare i pellet cellulari al mezzo cellulare endoteliale completo.
Dopo aver contato a 3,6 per 10 al quinto neurone e astrociti a 0,4 per 10 al quinto clone CHME cinque cellule per pozzo hanno una piastra di pozzo 12. E semina il piatto di 12 pozzi. Per costruire il mini cervello BBB 24 ore dopo la semina sostituire il mezzo usato con un nuovo mezzo cellulare endoteliale completo e trasferire la coltura di membrana in poliestere rivestita di cellule endoteliali micro vascolari cerebrali inserti sulle mini cellule cerebrali.
Quindi, posizionare la BBB molti dispositivi cerebrali nell'incubatore. Per convalidare la mini permeabilità endoteliale cerebrale BBB aggiungere 1,5 millilitri di tampone di trasporto per pozzo a una nuova piastra da 12 pozza. E capovolgere ogni filtro per rimuovere con cura il mezzo senza influire sulla barriera cellulare endoteliale.
Posizionare ogni filtro in un pozzo della piastra riempita del tampone di trasporto e aggiungere 0,5 millilitri di giallo Lucifero in ogni pozzo. Quindi posizionare la piastra nell'incubatore per 10 minuti prima di trasferire i filtri in un nuovo tampone di trasporto riempito con 12 piastre di pozzo. Dopo aver istituito un BBB molti dispositivi cerebrali come dimostrato, aggiungere 3500 unità platform del ceppo di virus neurotrofico francese del virus della febbre gialla diluito e 50 microlitri del mezzo cellulare endoteliale 2%FPS, con molta attenzione, sopra il compartimento luminale.
Inoculare il mini cervello BBB di controllo con 50 microlitri di mezzo cellulare endoteliale FBS al 2% senza virus. Quindi posizionare il virus esporre BBB molti dispositivi cerebrali nell'incubatrice per 24 ore. Il giorno successivo, rimuovere gli inserti per determinare la permeabilità della cellula endoteliale e un compagno, così come dimostrato.
Salvare un millilitro di campione da ogni pozzo per determinare il formicolio del virus nel compartimento centrale. Sotto l'inserto delicatamente per evitare perdite del compartimento luminale nei compartimenti abluminali. Per studiare il trasporto di un neurone che mira biomolecolare attraverso la barriera eculare, aggiungere la bio molecola di interesse agli inserti e riportare la piastra all'incubatore di coltura cellulare.
Dopo 24 ore da remoto si inserisce e determina la permeabilità endoteliale. Quindi macchiare le molte cellule cerebrali con l'anticorpo appropriato per rilevare la presenza della bio molecola di interesse all'interno del mini cervello. Le cellule endoteliali micro vascolari cerebrali umane esprimono tutti i sottoinsiemi di rececptor, trasportatori Efflux o trasportatori che sono proteine rilevanti chiave per le loro funzioni biologiche.
Alcuni ceppo di virus neurotropicali francesi del virus della febbre gialla possono attraversare la barriera eencefalica a 24 ore. I virus si amplificano quindi per i prossimi due giorni moltiplicando il virus all'interno delle cellule cerebrali. Inoltre, l'espressione di specifici biomarcatori virali viene stimolata quando questa popolazione virale neuronvasiva viene serialmente travasata sulle mini cellule cerebrali e strettamente correlata alla carica virale.
Dopo essere stato aggiunto al limite della molecola penetrante delle cellule compartimentali Neuro-Tag Neurovita attraversa la barriera eencefalica ed è in grado di colpire i neuroni umani. Molecola penetrante cellulare neuro tag Delta neurovita attraversa la barriera cellulare endoteliale, ma prende di mira in modo meno efficiente i neuroni umani. Dopo essere stato aggiunto al piccolo compartimento centrale, la molecola penetrante cellulare Neuro-Tag Neurovita attraversa la barriera eencefalica ed è in grado di rigenerare gli assoni dei neuroni umani, dopo il mento.
In contrasto con la molecola penetrante cellulare Neuro-Tag Neurovita Delta, la forma inattiva di Neurovita. Se applicato dopo che la cellula graffiante dell'assone penetrante Molecola Neuro-Tag Neurovita innesca la neuroprotezione dei neuroni feriti e la rigenerazione zonale x. Rigorosamente per il bene delle pratiche.
non usare es oltre i passaggi a I-cell. Cerca di mantenere una parvenza di medie e regioni e controlla l'assenza di micoplasma. Le interazioni tra il mini cervello e i farmaci sono microbi di interesse possono essere ulteriormente studiate per trascrizione che chimichezzano questa o biologia classica chiamata tecniche.
