Dimostriamo come utilizzare il nostro software di nuova sviluppo, Auto-CHO, per la sintesi gerarchica e programmabile di oligosaccaridi one-pot. Auto-CHO include algoritmi su blocchi predefiniti espansi, con valori di reattività relativi previsti attraverso l'apprendimento automatico. Il software Auto-CHO fornisce una preziosa linea guida per la selezione dei blocchi di costruzione e un progetto gerarchico per la sintesi multipla di un vaso di glicani più complessi attraverso la composizione dei frammenti.
Le implicazioni di questa tecnica si estendono verso la terapia di tumori o malattie infettive da parte di terapie a base di carboidrati. Prima di usare Auto-CHO, assicurati che Java Runtime Environment sia stato installato in un PC o mac. La dimostrazione visiva della manipolazione del software Auto-CHO e il relativo esperimento di determinazione del valore di reattività aiuteranno i chimici a seguire il protocollo e a procedere rapidamente con l'esperimento.
Per eseguire l'inizializzazione software di Java Runtime Environment, visitare il sito Web Auto-CHO e scaricare il software in base al sistema operativo. Attualmente, Auto-CHO supporta Windows, macOS e Ubuntu. L'ultima guida per l'utente PDF è disponibile sul sito Web Auto-CHO.
Per gli utenti Windows, decomprimere il Windows Auto-CHO. zip e fare doppio clic su Auto-CHO. nella cartella Auto-CHO di Windows per avviare il programma.
Inserire la struttura glica desiderata. Scegliere di disegnare una struttura glica o leggere un file di struttura esistente. Per inserire disegnando, fare clic su modifica glica di GlycanBuilder, o l'area di clic qui per modificare la destinazione sintetica per disegnare e modificare la struttura di query di GlycanBuilder.
Le informazioni sul collegamento e sulla chiralità non devono essere ignorate. Fare clic sui pulsanti Globo-H, SSEA-4 o OligoLacNAc per visualizzare gli esempi. Chiudere il dialogo GlycanBuilder per completare la modifica.
Definire i parametri di ricerca nella scheda impostazioni parametro per ottenere risultati di ricerca ragionevoli. Clicca sul pulsante ok per abilitare nuove impostazioni. L'impostazione predefinita è solo per la ricerca nella libreria sperimentale.
Se si desidera eseguire ricerche sia nelle librerie sperimentali che virtuali, selezionare la scheda libreria di blocchi edifici virtuali. Selezionare Usa librerie sperimentali e virtuali e applicare il filtro per visualizzare blocchi predefiniti virtuali con determinati criteri. Elementi costitutivi sperimentali e virtuali possono lavorare insieme per migliorare la capacità di ricerca di Auto-CHO.
Attualmente, Auto-CHO fornisce più di 50.000 blocchi predefiniti virtuali, conrrv previsti nella libreria. Controllare uno o più blocchi predefiniti virtuali desiderati che l'utente desidera utilizzare per la ricerca. Fare clic sul pulsante mostra blocchi predefiniti virtuali selezionati per visualizzare solo i blocchi predefiniti virtuali selezionati.
Fare clic sul pulsante Mostra blocchi predefiniti virtuali filtrati per visualizzare solo i blocchi predefiniti virtuali con determinati criteri definiti dall'utente. Fare clic sul pulsante mostra tutti i blocchi predefiniti virtuali per visualizzare tutti i blocchi predefiniti virtuali disponibili e reimpostare il filtro. Selezionare la scheda struttura query e fare clic sul pulsante della raccolta blocchi predefinito di ricerca per trovare le soluzioni sintetiche one-pot per la struttura di query.
Confermare quindi le impostazioni dei parametri. Eseguire una ricerca nel visualizzatore dei risultati. Il risultato della ricerca viene visualizzato nella scheda visualizzazione dei risultati.
Gli accettori finali riducenti di diversi numeri di residui vengono visualizzati nella colonna dell'accettore finale riducente. Selezionare quindi un accettore finale riducente. Le soluzioni vengono visualizzate nell'elenco delle soluzioni sintetiche.
I frammenti sono mostrati nell'elenco dei frammenti per suggerire quanti frammenti dovrebbero essere usati nella sintesi. Il sistema fornisce informazioni dettagliate su ogni frammento, incluso l'RRV del frammento, la resa computazionale, così come quale gruppo protettivo dovrebbe essere deprotetto per l'uso del frammento nella reazione di un vaso. Vengono visualizzati anche i blocchi predefiniti utilizzati per assemblare il frammento selezionato e le informazioni sulla connessione del frammento.
Per gli elementi costitutivi sperimentali, visualizzare e controllare le strutture chimiche degli elementi costitutivi selezionati nella struttura chimica della regione del blocco predefinito e vedere il browser dettagliato dei blocchi predefiniti delle informazioni. In un pallone inferiore rotondo da 10 millilitri, unire i due donatori di tioglicoside, metanolo assoluto e drierite in DCM. Quindi mescolare a temperatura ambiente per un'ora.
Prendere un'aliquota di 30 microliter di questa miscela e iniettare la miscela in cromatografia liquida ad alte prestazioni in tre iniezioni separate. Misurare il coefficiente tra l'assorbimento e la concentrazione della molecola donatrice nelle condizioni di separazione di base. Aggiungere una soluzione di N-Iodosuccinimide molare 0,5 nell'acetonitrile nella miscela di reazione, seguita dall'aggiunta di una soluzione di acido trifluorometanolfonico molare 0,1.
Mescolare la miscela a temperatura ambiente per due ore. Successivamente, diluire la miscela di reazione con quattro millilitri di DCM. Filtrare e lavare la reazione con tiosolfato di sodio acquoso saturo, contenente carbonato di idrogeno al 10%.
Ora estrarre lo strato acquoso tre volte con cinque millilitri di DCM. Unire tutti gli strati organici e lavare con cinque millilitri di salamoia. Quindi asciugare gli strati combinati con circa 200 milligrammi di solfato di magnesio anidro.
Agitare leggermente la miscela per 30 secondi e filtrarla attraverso un imbuto con una carta filtrante scanalata per rimuovere il solfato di magnesio. Quindi raccogliere il filtrato in un pallone inferiore rotondo da 25 millilitri. Rimuovere il solvente, utilizzando un evaporatore rotante.
Sciogliere il residuo in un millilitro di DCM. Prendere un'aliquota di 30 microliter di questa miscela e iniettarla nella cromatografia liquida ad alte prestazioni in tre iniezioni separate. Misurare le concentrazioni dei donatori rimanenti da parte dell'HPLC, nelle stesse condizioni di separazione.
Misurare la reattività relativa. In base al valore relativo di reattività di DR4, il valore relativo di reattività di DX1 è tre. Il risultato della ricerca Auto-CHO basato sulle impostazioni predefinite dei parametri indica che SSEA-4 può essere sintetizzato da una reazione di due più uno più tre un-pot.
Quando è selezionato un accettore finale che riduce il trisaccharide, vengono mostrate quattro potenziali soluzioni per la query. La prima soluzione ha un frammento e la sua resa calcolata è di circa il 94%Il frammento può essere sintetizzato da due blocchi predefiniti. L'RRV del primo blocco predefinito disaccaride è 1462, e l'RRV del secondo monosaccaride è 32.0.
Viene mostrata anche la struttura chimica del primo blocco predefinito suggerito utilizzato nella reazione a un vaso. L'esperimento one-pot mostra che SSEA-4 può essere sintetizzato correttamente con una resa del 43% da questo suggerimento. SSEA-4 può essere sintetizzato da tre unità suggerite da Auto-CHO.
Queste unità includono il blocco predefinito disaccaride silele uno, il blocco predefinito monosaccaride due e la riduzione dell'accettore finale tre. Per le impostazioni dei parametri, si consiglia di impostare parametri con criteri più rigorosi all'inizio. Per la selezione della libreria dei blocchi di costruzione, si consiglia di cercare la libreria sperimentale solo all'inizio.
Attraverso questa dimostrazione, speriamo che i glicani più importanti, come gli antigeni di carboidrati associati al tumore, possano essere sintetizzati dall'approccio one-pot per ulteriori studi. Seguendo questa procedura, la sintesi di tutti questi antigeni può essere eseguita al fine di progettare vaccini contro il cancro a base di carboidrati. Speriamo anche che l'intelligenza artificiale e gli algoritmi informatici possano facilitare la sintesi glica automatizzata a beneficio del trattamento e della prevenzione delle malattie.
