Il comportamento di nidificazione è un modo utile per valutare le attività della vita quotidiana in topi selvatici e transgenici. È particolarmente utile nel documentare il declino cognitivo della neurodegenerazione per tutta la durata della vita. Questa tecnica è una valutazione economica semplice ed elegante delle attività quotidiane di vita nei topi.
Può anche essere eseguito in un breve periodo di tempo con un allenamento minimo. Nel nostro laboratorio consigliamo la carta triturata, poiché la carta produce risultati più coerenti. Tuttavia, gli studi pilota possono essere condotti per determinare quale materiale meglio suite i tuoi obiettivi e il tuo budget.
In una sala prove separata, impostare le condizioni ambientali in modo che siano coerenti tra le prove e siano identiche alla stanza di alloggiamento e forniscano cibo e acqua alle gabbie addlibitum. Assegnare a ciascun mouse un numero di identificazione o una lettera casuale. E registra l'id animale originale e altre identificazioni necessarie in un registro della colonia per garantire che gli assistenti e il personale zootecnico rimangano ciechi alle condizioni.
Ordinare casualmente il posizionamento della gabbia nella sala prove, in modo che il tipo selvatico e i topi transgenici non siano separati in modo inappropriato. E coprire il fondo di ogni gabbia con 100 grammi di peso secco di biancheria da letto in pannocchie di mais per le prove di carta quadrata, torsione e triturata. E 100 grammi di biancheria da letto morbida per le prove di pannoccino morbido.
Quindi, poco prima di introdurre un mouse in una gabbia, posizionare un singolo quadrato di cotone pressato, un singolo torsione di carta, nessun materiale aggiuntivo aggiunto alla biancheria da letto morbida della panno a pannoie o 2,5 grammi di carta bianca pulita triturata tagliata in strisce da cinque a sette centimetri. Allo stesso tempo della giornata, all'inizio del ciclo della luce, portare la gabbia domestica contenente i topi nella sala prove. E trasferire ogni topo nella sua gabbia di nidificazione assegnata con il materiale già nella gabbia.
Quando tutti i topi sono stati posizionati, riportare le gabbie di casa nella stanza di alloggio e consentire ai topi di completare lo studio per 24 ore, indisturbati. Alla fine della prova, rimuovere con cura il coperchio di ogni gabbia. E quando ogni mouse si è allontanato dal nido, fotografa ogni nido catturando l'ID assegnato nella fotografia e riducendo al minimo l'aspetto di qualsiasi materiale al di fuori della gabbia.
Quando ogni nido è stato fotografato, trasferire delicatamente ogni topo in singole gabbie di detenzione temporanee. E scorta la biancheria da letto e qualsiasi materiale di nidificazione da ogni gabbia. Quindi, sostituire la biancheria da letto, fornire il materiale di nidificazione successivo nella sequenza.
E riportare il topo nella gabbia di nidificazione. Una volta completati tutti gli studi, riportare i topi nelle loro gabbie di casa e osservare i topi per qualsiasi potenziale comportamento aggressivo. Per mantenere l'affidabilità inter-relater fornire immagini di base per ogni materiale di nidificazione ad almeno due individui ciechi allo studio.
E fornire una serie di nidi campione per familiarizzare i marcatori con ogni tipo di materiale. Quando si segnano i nidi, un punteggio di uno dovrebbe essere assegnato quando la carta triturata o piccoli quadrati rimangono sparsi in tutta la gabbia, o il quadrato di cotone o la torsione rimangono intatti. Un punteggio di due viene assegnato quando parte del materiale viene costruito in un nido, ma oltre il 50% del materiale non è stato utilizzato per la costruzione del nido.
Un punteggio di tre viene assegnato quando viene costruito un nido evidente, ma diversi pezzi sono ancora sparsi. Un punteggio di quattro viene assegnato quando quasi tutto il materiale viene utilizzato per il nido, ma alcuni pezzi di materiale rimangono sparsi o sono vicino al nido. Un punteggio di cinque viene assegnato quando quasi tutto il materiale viene utilizzato per creare un nido non identificabile.
Fai fare una pausa al marcatore e rivisita le foto di base per evitare affaticamento e pregiudizi durante la procedura di punteggio, se necessario. Una volta che tutte le gabbie sono state valutate, inserire i punteggi e formattare il file di dati in formato lungo, in modo che i punteggi degli animali siano in colonne separate. In questa analisi rappresentativa su tutti e quattro i materiali forniti, i topi di tipo selvatico hanno ottenuto una maggiore qualità del nido rispetto ai topi APOE e4.
Con carta triturata valutata in modo significativamente più alto in termini di qualità, quindi i materiali quadrati, di lettiera o di torsione. Senza differenze osservate tra il quadrato, la biancheria da letto e i materiali di torsione. Inoltre, in questo esperimento con i topi htau, gli animali mutanti di 5,5 mesi costruiscono un nido di carta triturata che era significativamente peggiore di quelli costruiti dalle loro controparti di tipo selvatico abbinate alla loro età.
I punteggi dovrebbero rimanere ciechi di fronte alle condizioni sperimentali e rivedere i criteri di punteggio. In base alle conclusioni che devono essere valide e valide, si dovrebbero valutare anche le responsabilità inter-rater. La corsa delle ruote scavatrici e circadiane sono altri due modi comuni per valutare le attività della vita quotidiana.
E possono servire a complimentarsi con il comportamento di nidificazione. La nidificazione può essere utilizzata come valutazione accessoria per prevedere il possibile declino della cognizione, allargando il respiro delle valutazioni comportamentali in combinazione con il labirinto d'acqua di Morris e la corsa delle ruote circadiane.
