Questo modello di insufficienza cardiaca suina, indotto dal blocco dell'arteria circonflesso sinistra e dal rapido ritmo, può essere utilizzato per valutare gli effetti dell'iniezione diretta di cellule staminali intramiocardiali sulla rigenerazione cardiaca. Il nostro modello di insufficienza cardiaca della colonia suina è abbastanza stabile. La nuova dimensione infarct di questo modello è di circa il 16% dell'infarto di iniezione del ventricolo sinistro e del ventricolo sinistro ridotto di almeno il 40% dal basale.
Con il maiale sperimentale fissato in posizione supina, individuare l'arteria carotidea destra e la vena giocoliera nel triangolo carotideo, e utilizzare forcep emostatiche e tecnica aseptica per isolare l'arteria carotidea destra e la vena giugulare. Ligate l'estremità distale dell'arteria carotidea destra e della vena giocoliere e usa un'angiocath per cannucolare la vena del giocoliere destro. Dopo aver inserito un pacemaker piombo nel ventricolo destro sotto guida a raggi X utilizzare le forcep per isolare i muscoli sternocleidomastoidi e scaleni anteriori e collegare il pacemaker al piombo.
Quindi impiantare un pacemaker tra i due muscoli. Quindi chiudere i due muscoli con seta 2-0. Per valutare i cambiamenti nella funzione ventricolare sinistra, isolare l'arteria femorale destra e la vena femorale nel triangolo femorale e calcolare l'arteria femorale destra con un'angiocath.
Posizionare un filo guida nella vena femorale attraverso l'angiocath e rimuovere l'angiocath. Cannulate una torcia francese 12 nella vena femorale sotto la guida del filo guida e rimuovere il filo guida. Cannulate l'arteria femorale destra con una trave francese nove come appena dimostrato.
E inserire un catetere a palloncino attraverso la 12 sheath francese nella vena cava interna sotto la guida a raggi X. Calibrare un catetere a sette volumi di pressione francese in salina isotonica con un processore di segnale del volume di pressione e inserire il catetere nell'apice del ventricolo sinistro attraverso i nove sheath francesi sotto guida a raggi X. Sospendere la ventilazione e utilizzare il processore del segnale del volume di pressione per misurare la derivata massima del ventricolo sinistro e della pressione negativa, non e la pressione sistolica e le pressioni diastoliche finali.
Quindi riavviare la ventilazione. Per l'induzione dell'infarto del miocardio, somministrare cinque milligrammi per chilogrammo di amiodarone e 1,5 milligrammi per chilogrammo di lidocaina bolo per via endovenosa per evitare aritmie ventricolari prima di calcolare l'arteria carotidea destra con un'anta di otto francesi come dimostrato. Eseguire l'angiografia coronarica attraverso un catetere guida a sei dentiere francese attraverso la torcia posizionata guidata dalla fluoroscopia del braccio C standard.
Occlusione all'arteria coronarica circonflessa sinistra distale al primo ramo marginale ottuso con gonfiaggio del catetere del palloncino di dilatazione coronarica transluminale percutanea sotto guida a raggi X. Caricare un millilitro di microsfere di spugna da 700 micrometri mescolate con sette millilitri di ioesolo in una siringa da 10 millilitri e iniettare la miscela attraverso il catetere a palloncino per bloccare l'arteria coronarica circonflessa sinistra. Quindi sgonfiare il palloncino ed eseguire un angiogramma per confermare l'occlusione.
Otto settimane dopo il carico di induzione dell'infarto due volte 10 all'ottava cellula staminale mesenchimale derivata da cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo in due millilitri di soluzione salina normale in una siringa da cinque millilitri e sterilizzare 10 centimetri intorno all'area di battito dell'apice dell'animale sperimentale anestetizzato. Usa un riavvolgitore per eseguire una toracotomia sinistra nello spazio intercostale quattro o cinque ed eseguire una pericardiotomia per esporre la parete laterale infarittata. Quando le aree infartuate sono visibili, eseguire da cinque a otto iniezioni intra miocardici di circa 300 microlitri di cellule per iniezione prima di chiudere lo spazio intercostale con filo di ferro e chiudere lo strato muscolare con 2-0 suture di seta e i tessuti sottocutanei e gli strati della pelle con 2-0 suture vicriliche.
Per valutare l'induttibilità della tachiaritmia ventricolare dopo la terapia cellulare, inserire un sei catetere elettrofisiologico francese nell'apice ventricolare destro attraverso la vena femorale e visualizzare le registrazioni intracardiache con l'elettrocardiogramma superficiale leas I, II e III sul sistema di registrazione elettrofisiologia ad una velocità di 200 millimetri al secondo. Usa uno stimolatore per fornire una larghezza dell'impulso di due millisecondi a due volte la soglia diastolica e fornire un treno di stimolazione di otto stimoli a uno 200 millisecondi e una lunghezza del ciclo di guida di 300 millisecondi seguita da uno o due stimoli extra prematuri. Quindi accorciare sequenzialmente gli intervalli di accoppiamento fino a quando non viene indotto il periodo refrattario efficace ventricolare di aritmia, notando la presenza di una tachiaritmia ventricolare sostenuta induttibile.
In questo esperimento rappresentativo, l'esame ecocardiografico seriale ha mostrato che la frazione di espulsione ventricolare sinistra è diminuita significativamente dalla linea di base mentre la dimensione diastolica finale del ventricolo sinistro e la dimensione sistolica finale sono aumentate significativamente a otto settimane dopo l'induzione dell'infarto del miocardio. Al contrario, la frazione di espulsione del ventricolo sinistro è aumentata significativamente e la dimensione sistolica finale è notevolmente diminuita nel gruppo di trapianto cellulare otto settimane dopo la somministrazione. La derivata della pressione negativa e la relazione fine del volume di pressione sistolica significativamente diminuita dal basale a otto settimane dall'induzione dell'infarto del miocardio, mentre la somministrazione intramiocardica di cellule staminali mesenchimali ha portato ad un aumento di queste funzioni.
La misurazione dello spessore della parete infarto del ventricolo sinistro in sezioni spesse da cinque a sette centimetri di spessore seriale di un centimetro da ciascun animale ha rivelato una percentuale di infarto del ventricolo sinistro di circa il 16%Non c'era sopravvivenza cellulare intorno al sito di iniezione nell'area infarct otto settimane dopo il trapianto. Ma un piccolo numero di cellule staminali iniettate sopravvissute erano visibili nell'area periinfarct. Gli incidenti di tachiaritmie ventricolari indutbili e sostenute potrebbero essere facilmente aumentati negli animali con insufficienza cardiaca.
Da notare che il trapianto di cellule staminali non ha modificato significativamente il substrato miocardico sottostante per ridurre la suscettibilità alla tachiaritmia ventricolare. Poiché il blocco dell'arteria coronarica circonflessa sinistra può indurre aritmia. Assicurarsi di monitorare l'ECG e di utilizzare immediatamente il defibrillatore bifasico esterno per ristabilire i seni se necessario.
Questo metodo fornisce un modello animale di grandi dimensioni stabile e riproducibile, clinicamente rilevante, di insufficienza cardiaca per testare l'efficacia delle terapie a base di cellule staminali.
