Il documento ha riportato l'identificazione del chemioattrattante dei rizobatteri negli essudati radicali utilizzando un test di chemiotassi migliorato. Gli attuati radicali della radice dell'impianto di chemiotassi sono significativi per la colonizzazione delle radici per la crescita delle piante, promuovendo i batteri rizobi e fornendo le fazioni utili delle interazioni pianta-microbo. Molti metodi sono stati utilizzati per analizzare la chemiotassi batterica.
Ad esempio, metodo della piastra di nuoto, metodo di tipo cappinario, dispositivo di slipchip microfluidico. Il ciclo sperimentale del metodo della piastra di nuoto è stato lungo. L'errore sperimentale del metodo Cappilary like è stato lanciato, il dispositivo slipchip microfluidico è costoso da sperimentare.
Abbiamo stabilito un metodo semplice per identificare rapidamente il chemioattrattante che potrebbe indurre il movimento chemiotattico dei batteri che promuovono la crescita della rizosfera utilizzando vetrini di vetro sterili senza passaggi complicati. Il metodo ha ridotto l'errore del conteggio delle piastre e abbreviato il ciclo dell'esperimento. Per quanto riguarda l'identificazione di una sostanza chemioattrattante, il nuovo metodo potrebbe far risparmiare 2-3 giorni e ridurre anche il costo dei materiali sperimentali.
Distribuire casualmente i semi di riso nella coltura della camera di coltivazione si presenta per una settimana e aggiungere acqua sterile due volte. Selezionare le piantine di riso di dimensioni simili e piantare in un mezzo liquido da 50 millilitri di Ms. Incubare per 48 ore a 22 gradi Celsius e condizioni settiche.
Gli essudati di radice di riso saranno rilasciati nel mezzo Ms. L'analisi della spettrometria di massa per cromatografia liquida è stata eseguita utilizzando il sistema UHPLC. Preparare la soluzione acquosa chemioattrattante assicurarsi che sia sterile.
Filtrare la soluzione chemioattrattante con un filtro batterico da 0,22 micrometri. La soluzione acquosa chemioattrattante era la singola sostanza ottenuta dagli studi LCMS disciolta in acqua. La soluzione di acido Citrix è stata usata come esempio.
Tutte le azioni devono essere eseguite dal lato della lampada. Contrassegnare la posizione centrale della diapositiva di vetro ad un intervallo di 1 centimetro. Assicurarsi che il vetrino sia sterilizzato più volte sulla fiamma.
Alla soluzione chemioattrattante a 30 microlitri a sinistra del vetrino assicurarsi che i batteri siano stati coltivati allo stadio logaritmico. Aggiungere la soluzione batterica da 30 microlitri a destra del vetrino. Sterilizzare il ciclo di inoculazione più volte sulla fiamma utilizzando il circuito di inoculazione per collegare la soluzione acquosa chemioattrattante alla soluzione batterica e mantenerla a temperatura ambiente per 20 minuti su un banco pulito.
Dopo 20 minuti scollegare la linea di collegamento con carta da filtro. Assicurarsi che il tubo centrifugato da 1,5 millilitri sia sterile. Raccogliere la soluzione acquosa chemioattrattante a sinistra del vetrino.
Trasferire la soluzione nel tubo centrifugato sterile da 1,5 millilitri. Aggiungere il volume appropriato del colorante frontale cellulare al tubo centrifugato. Dopo 2 minuti, raccogliere i liquidi mancanti per il conteggio dei batteri e l'osservazione microscopica con una camera di conteggio del sangue.
Determinare il numero di microrganismi vitali attratti utilizzando una seguente equazione. Un RCI più alto indica una forte reazione al chemioattrattante. I risultati hanno indicato che l'acido citrico e l'acido caffeico hanno i più alti indici di chemiotassi.
I nuovi risultati del metodo di test di chemiotassi hanno scritto che la concentrazione batterica di acido citrico, acido caffeico e galattosio era significativamente superiore a quella del gruppo di controllo e del controllo positivo. L'acido citrico ha scritto la chemiotassi più forte. I risultati sperimentali erano in accordo con i risultati dei metodi tradizionali.
Questo protocollo video può essere presentato come una risorsa preziosa per chiarire le interazioni pianta-microbo.
