Questo metodo utilizza frutta di caffè verde per testare la tossicità degli insetticidi contro la piralide delle bacche di caffè. L'applicazione dell'insetticida viene eseguita prima o dopo l'infestazione da insetti per studiare la repellenza della mortalità degli insetti e altri effetti. L'utilizzo di vero caffè verde con nutrienti adeguati per la crescita degli insetti è il modo più appropriato per valutare la tossicità dei composti per gli insetti in condizioni naturali simulate.
Il protocollo consente la valutazione degli effetti tossici degli insetticidi chimici e verso agenti patogeni come funghi o sostanze repellenti. Questa infezione dei frutti e degli insetti è il passo critico in quanto una disinfezione impropria può causare la morte degli insetti a causa della contaminazione. Anche la qualità degli insetti è importante in quanto gli insetti deboli sovrastimano i risultati di un prodotto tossico.
La dimostrazione visiva consente di identificare lo stadio appropriato dei frutti il processo di infestazione da insetti, il momento appropriato per diffondere la sostanza tossica. E il modo per sezionare i frutti. A dimostrare la procedura sarà Claudia Martinez, assistente di ricerca del laboratorio.
Per iniziare, raccogli i frutti del caffè verde al mattino presto con l'età di sviluppo approssimativa da 120 a 150 giorni dopo la fioritura dalle piantagioni di caffè. Seleziona circa 300 frutti sani e di dimensioni uniformi e ritira i peduncoli. Immergere i frutti di caffè verde in una soluzione di sapone al 2% e pulire accuratamente strofinandoli.
Quindi risciacquare i frutti tre volte con acqua pulita. Immergerli in una soluzione di ipoclorito di sodio allo 0,5% e metterli sullo shaker per 10 minuti a 110 giri al minuto. Risciacquare i frutti con acqua pulita tre volte e asciugarli con asciugamani di carta sterili.
Irradiare i frutti posizionandoli a 55 centimetri dalla sorgente UV per 15 minuti, all'interno di una stazione di flusso laminare orizzontale abilitata ai raggi UV. Spostare i frutti dopo ogni cinque minuti per garantire la corretta irradiazione dell'intero frutto. Per impostare i biosaggi, immergere le trivellatrici di bacche di caffè emerse lo stesso giorno in una soluzione di ipoclorito di sodio allo 0,5% e agitarle lentamente con un pennello per 10 minuti.
Filtrare questi insetti attraverso un panno di mussola e lavarli tre volte con acqua distillata sterile. Rimuovere l'acqua in eccesso con asciugamani di carta sterili. Preparare un gruppo di 30 frutti di caffè verde per unità sperimentale e metterli in una scatola di plastica.
Applicare diverse concentrazioni di un prodotto di prova per la valutazione utilizzando un'unità spruzzatrice portatile, qui sono state utilizzate emulsioni alcaloidi al 5% e 6%. Come controllo, spruzzare un gruppo di frutti di caffè verde con acqua. Utilizzare almeno tre unità sperimentali per trattamento, spruzzando una dopo l'altra.
In un cappuccio sterile, rilasciare due adulti di piralide di bacche di caffè per frutta di caffè verde e coprire le scatole dopo 30 minuti. Lasciare le scatole di plastica con i frutti di caffè verde infestati al buio all'interno di una stanza o di un'incubatrice, avendo condizioni controllate. Dopo 1, 7, 15 e 21 giorni, conta il numero di frutti di trivellazione e insetti vivi e morti al di fuori dei frutti in ogni scatola.
A 20 giorni dopo l'infestazione, seziona ogni frutto del caffè verde sotto uno stereomicroscopio con ingrandimento 10x e conta il numero di semi sani o semi danneggiati dagli insetti in ogni frutto. Conta le diverse fasi biologiche della piralide delle bacche di caffè. Osservare il numero di insetti morti in ogni seme per determinare la mortalità degli insetti per unità sperimentale.
In un cappuccio sterile, rilasciare gli adulti di piralide delle bacche di caffè ai frutti di caffè verde precedentemente disinfettati in un rapporto di due a uno e consentire all'infestazione di procedere per tre ore a 21 gradi Celsius. La maggior parte dei frutti di caffè verde dovrebbe essere infestata dopo tre ore con l'addome della piralide della bacca di caffè ancora esposta. Seleziona 46 frutti infestati e mettili in un rack di plastica a 96 pozzetti in modo che il trattamento possa essere spruzzato direttamente sulla piralide delle bacche di caffè perforando il frutto.
Spruzzare tre rack almeno tre volte per il trattamento, uno dopo l'altro e coprire i rack dopo 30 minuti. Dopo 20 giorni, seziona i frutti del caffè verde sotto uno stereomicroscopio con ingrandimento 10 x e conta il numero di semi sani o semi danneggiati dagli insetti in ciascun frutto. Contare i diversi stadi biologici della piralide delle bacche di caffè e il numero di insetti morti in ciascun seme per determinare la mortalità degli insetti per unità sperimentale.
Seguire i passaggi iniziali per valutare un prodotto con un effetto protettivo sui frutti e rilasciare i frutti di caffè verde adulti nelle scatole di plastica. Quindi conta il numero di borers di bacche di caffè che volano via dalle scatole e il numero che infestano i frutti del caffè verde. Dopo l'incubazione, in condizioni controllate, seguita dalla dissezione a 20 giorni dall'infestazione e dal conteggio dei semi e degli insetti morti, seguire i passaggi delineati per la valutazione del prodotto, dopo l'infestazione da borer di bacche di caffè.
Conta il numero di fori di bacche di caffè che si sono spostati dai frutti del caffè verde o sono volati via dai frutti. Dopo aver spruzzato ogni trattamento, seguire le fasi dell'incubazione in condizioni controllate per determinare la mortalità degli insetti per unità sperimentale. L'insetticida del 5% e del 6% applicato alla piralide delle bacche di caffè, ha causato un'elevata mortalità degli insetti il giorno 20 e ha mostrato differenze significative rispetto al controllo.
Si è visto che l'applicazione di insetticida due ha portato al 94% di semi sani, e l'insetticida uno ha portato all'89% di semi sani. Il 37% dei semi non era infestato nel gruppo di controllo. In caso di post-infestazione, i prodotti sono penetrati nella cuticola degli insetti causando mortalità degli insetti.
La più alta mortalità si è verificata con insetticida due. Gli effetti degli insetticidi si sono riflessi nella percentuale di semi sani non infetti, il giorno 20 della valutazione. Una ridotta popolazione di insetti è stata trovata all'interno dei semi di caffè rispetto alla popolazione di insetti trovata nel gruppo di controllo, spruzzata con acqua.
L'azione combinata entomopatogeno e repellente ha provocato il minimo danno da seme e la massima mortalità degli insetti. Questa infezione dei frutti e la disinfezione degli insetti assicurano il successo del protocollo. Questa metodologia può anche essere utilizzata per valutare la tolleranza o la resistenza dei frutti di caffè alla piralide delle bacche di caffè.
Un effetto negativo può essere osservato anche contro la popolazione di insetti nel caso di semi di caffè resistenti agli insetti. Questa metodologia può essere utilizzata non solo in entomologia per la valutazione di insetticidi con diverse modalità di azione, ma anche nella selezione vegetale per la valutazione di varietà tolleranti e patologia vegetale per studiare l'interazione frutto/patogeno.
