In precedenza, il metodo principale per esaminare l'effetto delle sostanze chimiche sulla contrattilità arteriosa era la miografia a filo ex vivo nei bagni d'organo. L'importanza di questa tecnica è che è possibile esaminare gli effetti delle sostanze chimiche e della manipolazione genetica sul segmento di un vaso in vivo. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è possibile condurre l'esposizione cronica e la valutazione a lungo termine dell'effetto dei farmaci sulla contrattilità arteriosa e sul flusso sanguigno.
Questo non è possibile nei vasi isolati nei bagni d'organo. Per iniziare l'esteriorizzazione del feto, assicurarsi un'adeguata profondità di anestesia nella pecora. Eseguire un'incisione laparotomica standard di 10 centimetri utilizzando una lama di bisturi numero 20 sull'alba lineare dall'ombelico alla porzione cranica della mammella.
Quindi praticare una piccola incisione attraverso la linea mediana della parete del corpo sotto l'incisione cutanea e aprire la cavità addominale utilizzando le forbici Metzenbaum. Esternalizzare l'utero contenente il feto attraverso la parete addominale, posizionando asciugamani chirurgici sterili sotto tra l'addome materno e l'utero. Quindi palpare l'utero per determinare la posizione fetale e gli attacchi caudali.
Usando un cauterizzatore, praticare un'incisione di 10 centimetri attraverso la parete uterina con un'ampia curvatura sopra il dorso della testa, evitando vasi sanguigni e placentomi visibili. Successivamente, con quattro pinze di Babcock, fissare l'utero e le membrane placentari e tirare le pinze di Babcock ai quattro angoli opposti per rendere visibile la testa del feto. Esternalizzare la metà cranica del feto attraverso questa incisione e coprire la testa con un guanto sterile non in lattice riempito con soluzione salina calda sterile a una temperatura di 37 gradi Celsius per prevenire l'inizio della respirazione.
Per eseguire la strumentazione del catetere perivascolare dell'arteria carotide, con il collo del feto esposto, praticare un'incisione cutanea obliqua da tre a 3,5 centimetri lungo il bordo anteriore del muscolo sternocleidomastoideo o SCM su un lato del collo nella regione centrale. Quindi separare la fascia con una pinza per zanzare. Dividere il platisma e sezionare lungo il bordo mediale del muscolo SCM dal suo tendine superiormente e al livello del muscolo omoioideo inferiormente.
Ritrarre la pelle con le pinze Babcock. Eseguire una dissezione smussata per liberare l'arteria carotide dal tessuto circostante e dal foglio carotideo. Quindi, prendere una sonda di flusso di tre millimetri dalla confezione sterile, svitare la piastra di supporto e aprirla per esporre la staffa a L.
Utilizzando una pinza, chiudere la staffa della sonda di flusso facendo scorrere delicatamente la piastra di supporto in posizione chiusa. Quindi fissare la staffa della sonda di flusso serrando la vite di supporto della sonda di flusso. Posizionare un catetere perivascolare prelavato vicino all'arteria carotide prossimale alla sonda di flusso con una sutura in seta non assorbibile 3.0.
Fissare le lunghezze prossimali e distali del sistema perivascolare e la sonda di flusso al tessuto interstiziale vicino. Utilizzando un punto continuo, chiudere il sito di incisione e la pelle fetale con una sutura 3.0 non assorbibile. Fissare i cateteri alla pelle avvolgendo la sutura attorno al catetere per tre volte.
Dopo aver rimosso il guanto, riposizionare la testa fetale nell'utero. Per eseguire il cateterismo dell'arto fetale, esternalizzare la zampa posteriore del feto, tenere la gamba e ruotarla lateralmente per visualizzare l'area interna della coscia. Dopo aver pulito l'area con una garza sterile, eseguire un'incisione di due centimetri ed esporre l'arteria femorale.
Posizionare e fissare la sonda di flusso come dimostrato in precedenza per la carotide e chiudere l'incisione. Successivamente, praticare un'incisione di due centimetri lungo l'aspetto mediale della tibia, a circa 0,5 centimetri distale dal ginocchio. Esporre l'arteria tibiale posteriore a parete spessa e la vena safena a parete sottile.
Per inserire cateteri in polivinile, utilizzando una tecnica di taglio standard, liberare il vaso di interesse con una dissezione smussata. Quindi legare la porzione distale del vaso con una sutura di seta 3.0 e senza ago, utilizzando un nodo quadrato con tre lanci. Posizionare una seconda cravatta priva di seta sulla faccia prossimale del vaso, ma lasciare la legatura slacciata.
Usando le forbici di Castroviejo, fai un piccolo taglio trasversale nel vaso due millimetri prossimale alla legatura distale. Limitare il flusso sanguigno dei vasi tirando delicatamente verso l'alto la sutura prossimale slegata. Quindi riempire il catetere con soluzione fisiologica eparinizzata sterile.
Inserire l'estremità smussata del catetere e far avanzare la punta di 20 centimetri nel vaso fetale. Tenere il catetere in posizione con una pinza mentre un assistente lega la sutura prossimale senza seta per fissare il vaso al catetere. Legare completamente il vaso attorno al catetere inserito utilizzando nodi quadrati a due millimetri dal sito di inserimento con tre lanci.
Quindi legare la legatura distale prossimale alla legatura prossimale, fissando il vaso al catetere. Chiudere l'incisione cutanea utilizzando una sutura 3.0 non assorbibile, utilizzando uno schema continuo. Assicurarsi che i punti di sutura siano legati attorno ai cateteri per evitare di limitare il flusso sanguigno se tirati.
Posizionare un catetere prelavato nell'utero e fissarlo al feto con una sutura utilizzando una sutura non assorbibile 3.0. Rimetti il feto nell'utero. Suturare le membrane fetali utilizzando suture non assorbibili 3.0 con uno schema di bloccaggio continuo, quindi chiudere lo strato muscolare uterino utilizzando una sutura non assorbibile 3.0.
Inserire un'asta chirurgica in acciaio inossidabile da 18 pollici per via sottocutanea lungo la parete addominale fino alla regione paracostale. Collegare i cateteri all'estremità distale dell'asta chirurgica, chiedendo a un assistente di alimentare i cateteri e il cavo della sonda di flusso attraverso il sito di uscita paracostale spingendo completamente l'asta attraverso l'apertura paracostale. Successivamente, fissare tutti i cateteri e i cavi della sonda di flusso nel sito di incisione paracostale.
Dopo aver posizionato il nastro impermeabile, suturare i cateteri sulla pelle della pecora. Suturare una sacca di plastica a rete all'esterno della pecora sopra i cateteri e sondare per conservare i cateteri. Utilizzando un materiale di sutura riassorbibile sintetico monofilamento 1.0, fissare la linea alba con un motivo continuo e fissare lo strato cutaneo con graffette chirurgiche.
Per misurare il flusso sanguigno, collegare le sonde di flusso inserite nel feto con il modulo di flusso perivascolare a PowerLab e a un computer collegato. Collegare i cateteri arteriosi e amniotici all'amplificatore a ponte collegato a un convertitore analogico-digitale. Somministrare un bolo da un millilitro di fenilefrina da 10 micromolari al feto per via endovenosa e misurare il flusso carotideo e femorale per 15 minuti.
Quindi attendere 30 minuti o fino a quando il flusso sanguigno non torna al basale. Successivamente, infondere un millilitro di fenilefrina a 10 micromolari nel catetere perivascolare e misurare il flusso sanguigno per 15 minuti. Lavare via la fenilefrina somministrando cinque millilitri di soluzione salina calda attraverso il catetere perivascolare.
Quindi attendere 30 minuti o fino a quando il flusso sanguigno non torna al basale. Questo studio ha esaminato gli effetti localizzati della manipolazione del flusso sanguigno nei feti e nelle pecore a breve termine e pretermine. Dopo la somministrazione di un millilitro di fenilefrina micromolare 10, un agonista AR alfa-1, nello spazio perivascolare dell'arteria carotide, è stata osservata una significativa riduzione del flusso sanguigno carotideo sia nelle pecore fetali a breve termine che nel feto pretermine senza alcun effetto sulla pressione sanguigna sistemica.
Al contrario, la somministrazione di fenilefrina per via endovenosa ha causato un aumento significativo del flusso sanguigno sistemico sia nelle pecore fetali a breve termine che nel feto pretermine senza influenzare il flusso sanguigno carotideo. I risultati hanno rivelato che i feti pretermine non rispondono alla regolazione del flusso sanguigno carotideo mediata dalla fenilefrina, tuttavia, la risposta è matura nei feti a breve termine. In particolare, la somministrazione endovenosa di fenilefrina ha aumentato il flusso sanguigno carotideo solo nei feti pretermine, senza alcun effetto significativo nei feti a termine.
Tuttavia, la somministrazione endovenosa di fenilefrina ha aumentato la pressione sanguigna sistemica sia nei feti pretermine che in quelli a breve termine. I risultati dimostrano anche che l'installazione perivascolare della fenilefrina non ha influenzato la pressione sanguigna sistemica. È necessario prestare la massima attenzione durante l'esecuzione di una dissezione smussata per identificare i vasi sanguigni e intaccarli per inserire l'estremità smussata del catetere.
L'intaccatura dovrebbe essere piccola ed evitare di tagliare l'intero recipiente. Questo metodo può misurare la contrattilità dei vasi e il flusso sanguigno di qualsiasi vaso. Inoltre, può essere utilizzato per fornire sostanze chimiche e vettori vicino alle vicinanze dell'organo o del tessuto da colpire.
Questa tecnica può essere utilizzata per determinare i cambiamenti nell'autoregolazione del flusso sanguigno cerebrale in utero in un feto in via di sviluppo e mirare a qualsiasi gene per sovraregolare o silenziare la trascrizione.
