In vivo Imaging dell'intero cervello delle larve di zebrafish mediante microscopia a fluorescenza tridimensionale

Stiamo sviluppando sistemi immunitari ottici e algoritmi computazionali per registrare e analizzare la neuroattività dell'intero cervello con un'elevata risoluzione spaziale e temporale. Il pesce da laboratorio è un animale modello ideale per la ricerca. Grazie ad ogni trasparenza ottica e alla disponibilità di diversi strumenti genetici, la qualità dell'immagine ottica può essere degradata a causa dell'aberrazione introdotta dal gel di agarosio utilizzato per il montaggio del campione e il pesce può muoversi durante la registrazione causando artefatti di movimento nelle immagini o impedendo l'estrazione del segnale di precisione dalle immagini.

I protocolli disponibili al pubblico forniscono solo una breve panoramica della procedura sperimentale, vivendo parti sostanziali dei dettagli, come le tecniche di montaggio precise di solidificazione dell'agarosio e il semplice posizionamento. Pertanto, è necessario un protocollo efficace e riproducibile per acquisire dati di immagine di alta qualità. Con rumore e movimento minimi.

Il nostro protocollo prevede una procedura sperimentale ottimizzata e riproducibile. Questo protocollo consente l'imaging in vivo dell'intero cervello per un periodo prolungato e la visualizzazione dei dati di imaging acquisiti. Il flusso di lavoro si è concentrato sull'imaging dell'intero cervello, ma può essere facilmente applicato all'imaging di altri organi di molti dei nostri pesci zebra.

Il nostro obiettivo è quello di svelare i principi alla base del calcolo neurale. Per questo continueremo a lavorare su una pipeline che coinvolge l'imaging su larga scala dell'attività neurale e della struttura e l'analisi computazionale di tali per la mappatura sistematica del cervello.