Preparazione e colorazione in immunofluorescenza di fasci e cellule a fibra singola dalla corteccia e dal nucleo del cristallino dell'occhio

Il cristallino è un organo ellissoide trasparente nella camera anteriore dell'occhio ed è responsabile della messa a fuoco fine della luce sulla retina per creare un'immagine chiara. La funzione della lente si basa sulle sue proprietà biomeccaniche, le complesse interdigitazioni tra le cellule della fibra della lente hanno recentemente dimostrato di essere importanti per la rigidità della lente. Mentre la morfologia specializzata delle cellule delle fibre del cristallino è stata precedentemente descritta dalla microscopia elettronica, poco si sa sulle proteine necessarie per queste membrane ad incastro.

Studi precedenti si sono basati su sezioni di tessuto del cristallino, che non consentono una chiara visualizzazione della complessa architettura cellulare. Abbiamo creato e perfezionato una nuova tecnica per preservare fedelmente le complesse interdigitazioni di membrana tra le cellule delle fibre del cristallino per la colorazione e l'imaging al microscopio confocale di proteine specifiche. In questo protocollo, c'è anche un nuovo metodo per colorare le cellule della fibra dal centro della lente, noto anche come nucleo della lente.

Questo metodo apre le porte alla comprensione della differenziazione e della maturazione delle cellule delle fibre, studiando i meccanismi di formazione e i cambiamenti nelle interdigitazioni di membrana.