La nostra ricerca si concentra sulla comprensione di come l'occhio previene naturalmente l'infiammazione. La nostra ricerca ha dimostrato che la via del micorne è essenziale per sopprimere l'infiammazione nell'occhio e promuovere la sopravvivenza delle cellule nella retina stressata. Ciò suggerisce che l'inattivazione della via del micorne potrebbe essere utile per il trattamento delle malattie generative della retina.
Questo protocollo normalizza la pressione intraoculare prima del prelievo dell'ago, riducendo il trauma alle strutture oculari e limitando le lesioni alla componente ischemia-riperfusione. Questo perfezionamento riduce al minimo la variabilità sperimentale causata dalla manipolazione fisica, migliorando l'accuratezza di questo modello. La nostra ricerca promuove il concetto unico di terapia invece di neutralizzare le molecole per ridurre i sintomi nella speranza che le cellule possano sopravvivere e tornare alla normalità.
Ci siamo concentrati sul cambiamento del comportamento delle cellule coinvolte nella malattia. Questo approccio ha un forte potenziale per fornire benefici a lungo termine e resistenza alla recidiva di malattie croniche, poiché viene indotta una normale attività cellulare. Il nostro modello ha offerto una tecnica raffinata per studiare la lesione da ischemia-riperfusione nell'occhio del topo.
E questo può offrire una rappresentazione più accurata di come le strutture intraoculari risponderebbero a una lesione da pressione intraoculare prolungata o da una lesione da riperfusione. Per iniziare, preparare siringhe di soluzione salina sterile di cloruro di sodio allo 0,9% collegate a una linea di infusione e a un rubinetto con un ago calibro 30 attaccato all'estremità della linea, uno per ogni topo, e posizionarle a 120 centimetri sopra la superficie del banco. Quindi, sciacquare tutte le bolle d'aria dalla linea.
Quindi, crea un letto per stabilizzare il topo tagliando una depressione di circa sei per tre centimetri in una spugna e posizionandola saldamente in un pozzetto di polistirolo o in un altro contenitore piatto. Dopo aver anestetizzato il topo, dilatare l'iride con una goccia di tropicamide all'1% e attendere cinque minuti per la dilatazione. Quindi, posizionare saldamente il mouse nel letto di spugna sotto il microscopio.
Applicare una soluzione salina sugli occhi per sciacquare via eventuali detriti o pelo dalla superficie dell'occhio. Usando una pinza non dentata, tieni delicatamente uno degli occhi. Quindi, con la linea di infusione chiusa, incannulare la camera anteriore con l'ago a circa due millimetri dal limbus.
Assicurarsi che l'ago fori la cornea perpendicolarmente alla superficie periferica curva della cornea, quindi leggermente appiattita parallelamente al piano dell'iride. Ruotare il rubinetto per far funzionare la linea di infusione e verificare che non vi siano perdite attraverso la ferita corneale. Garantire una distensione graduale della cornea all'aumentare della pressione intraoculare.
Utilizzando un tonometro, verificare che la pressione intraoculare sia salita a 90-100 millimetri di mercurio. Fissare la linea di infusione con del nastro adesivo, assicurandosi che l'ago non cambi posizione e inizi a perdere. Ora, applica un unguento oftalmico come la bacitracina sull'occhio per prevenire la secchezza.
Posizionare il mouse lontano dal microscopio sotto una lampada riscaldante per mantenere la normale temperatura corporea per 60 minuti. Dopo 60 minuti, rimettere il mouse al microscopio. Abbassare la siringa di soluzione salina al livello del topo per normalizzare la pressione intraoculare.
Misurare la pressione intraoculare con il tonometro per verificare che sia vicina alla normalità, circa 20 millimetri di mercurio. Una volta normalizzato, rimuovere con cura l'ago, evitando di danneggiare la lente o l'iride. Rivestire gli occhi del topo con un unguento antibatterico oftalmico, come l'unguento oftalmico veterinario alla bacitracina.
Monitorare il mouse su una superficie riscaldata per una o due ore fino a quando non si riprende completamente dall'anestesia. Una volta completamente recuperato, rimetti il topo nella sua gabbia. Le retine del settimo giorno hanno mostrato un danno e una perdita cellulare maggiori rispetto al secondo giorno, indicando una degenerazione retinica più grave nel tempo dopo l'ischemia e la riperfusione.
I punteggi istopatologici individuali erano più alti nella maggior parte degli strati della retina il settimo giorno rispetto al secondo giorno, mostrando un aumento dei cambiamenti patologici nel tempo. I punteggi istologici totali erano significativamente più alti il settimo giorno rispetto al secondo, indicando una marcata progressione del danno retinico.
