私たちの研究は、目がどのように自然に炎症を予防するかを理解することに焦点を当てています。私たちの研究は、ミエコーン経路が眼の炎症を抑制し、ストレスを受けた網膜の細胞生存を促進するために不可欠であることを示しています。このことは、ミエコーン経路を不活性化することが網膜再生性疾患の治療に有益である可能性を示唆しています。
このプロトコルは、針を抜く前に眼圧を正常化し、眼の構造への外傷を軽減し、虚血再灌流成分の損傷を制限します。この改良により、物理的な操作による実験のばらつきが最小限に抑えられ、このモデルの精度が向上します。私たちの研究は、細胞が生き残って正常な状態に戻ることを期待して、分子を中和して症状を軽減するのではなく、治療というユニークな概念を推進しています。
私たちは、病気に関与する細胞の振る舞いを変えることに着目しました。このアプローチは、正常な細胞活動が誘導されるため、慢性疾患の再発に対する長期的な利益と抵抗性を提供する強力な可能性を秘めています。私たちのモデルは、マウスの眼の虚血再灌流障害を研究するための洗練された技術を提供しました。
そして、これは、眼内構造が長期の眼圧または再灌流損傷による損傷にどのように反応するかをより正確に表現できる可能性があります。まず、輸液ラインに接続された滅菌0.9%塩化ナトリウム生理食塩水の注射器と、ラインの端に30ゲージの針が取り付けられたストップコック(マウスごとに1つずつ)を準備し、ベンチの表面から120センチメートル上に置きます。次に、ラインからすべての気泡を洗い流します。
次に、スポンジで約6×3センチのくぼみを切り取り、発泡スチロールの井戸または別の平らな容器にしっかりと置いて、マウスを安定させるためのベッドを作成します。マウスに麻酔をかけた後、1%トロピカミドを1滴垂らして虹彩を拡張し、5分間拡張します。次に、マウスを顕微鏡下のスポンジベッドにしっかりと置きます。
生理食塩水を目に塗布して、目の表面から破片や毛皮を洗い流します。歯のない鉗子を使用して、片方の目をそっと持ちます。次に、輸液ラインを閉じた状態で、リンバスから約2ミリメートルのところに針で前房をカニューレします。
針が角膜を周辺の湾曲した角膜表面に対して垂直に突き刺し、次に虹彩の平面と平行にわずかに平らになるようにします。ストップコックを回して輸液ラインを動かし、角膜の傷口から漏れがないことを確認します。眼圧が上昇するにつれて、角膜が徐々に膨張するようにします。.
眼圧計を使用して、眼圧が90〜100ミリメートルの水銀柱に上昇したことを確認します。.輸液ラインをテープで固定し、針の位置が変わって漏れ始めないようにします。次に、バシトラシンなどの眼科用軟膏を目に塗布して、乾燥を防ぎます。
マウスを顕微鏡から離して加熱ランプの下に置き、体温を60分間正常に保ちます。60分後、マウスを顕微鏡に戻します。生理食塩水シリンジをマウスのレベルまで下げて、眼圧を正常化します。
眼圧計で眼圧を測定し、正常に近い、約20ミリメートルの水銀柱であることを確認します。正常化したら、レンズや虹彩の損傷を避けて、針を慎重に取り外します。バシトラシン獣医用眼科用軟膏などの眼科用抗菌軟膏でマウスの目をコーティングします。
マウスが麻酔から完全に回復するまで、加熱された表面でマウスを1〜2時間監視します。完全に回復したら、マウスをケージに戻します。7日目の網膜は、2日目と比較してより大きな細胞損傷と損失を示し、虚血と再灌流後の経時的な網膜変性がより深刻であることを示しました。
個々の病理組織学的スコアは、2日目と比較して7日目の網膜のほとんどの層で高く、時間の経過とともに病理学的変化が増加したことを示しました。総組織学的スコアは2日目よりも7日目に有意に高く、網膜損傷の顕著な進行を示しました。