Visualizzazione in tempo reale a singola molecola dello svolgimento del DNA mediante elicasi CMG

Nel nostro laboratorio, stiamo studiando i meccanismi molecolari della replicazione del DNA eucariotico. Vogliamo capire le dinamiche della duplicazione del genoma a livello di singola molecola. Visualizziamo la replicazione del DNA utilizzando più sistemi, tra cui proteine purificate ed estratto derivato da uova di Xenopus.

Gran parte di ciò che sappiamo sulla replicazione del DNA proviene da esperimenti di massa, imaging cellulare e biologia strutturale. Questi metodi sono davvero potenti, ma spesso sono limitati in ciò che possono dirci sulle dinamiche o sui comportamenti transitori delle singole proteine. Questo è ciò che le tecniche a singola molecola sono davvero adatte allo studio, ed è per questo che il loro uso sta crescendo sul campo.

Il nostro protocollo per la visualizzazione dal vivo dello svolgimento del DNA delinea una piattaforma che può essere costruita e modificata per studiare diversi aspetti della replicazione del DNA. Può fornire una migliore comprensione del meccanismo molecolare dell'attività del CMG in presenza di componenti ribosomici scelti e stress replicativo. Per comprendere i sistemi complessi in gioco durante la replicazione del DNA, isoliamo le proteine chiave e visualizziamo il loro comportamento in tempo reale in vitro.

Le intuizioni che otteniamo contribuiscono a un quadro più completo della replicazione del DNA.