Visualisation en temps réel d’une molécule unique du déroulement de l’ADN par CMG Helicase

Dans notre laboratoire, nous étudions les mécanismes moléculaires de la réplication de l’ADN eucaryote. Nous voulons comprendre la dynamique de la duplication du génome au niveau de la molécule unique. Nous visualisons la réplication de l’ADN à l’aide de plusieurs systèmes, y compris des protéines purifiées et des extraits dérivés d’œufs de xénope.

Une grande partie de ce que nous savons sur la réplication de l’ADN provient d’expériences en vrac, d’imagerie cellulaire et de biologie structurale. Ces méthodes sont vraiment puissantes, mais elles sont souvent limitées dans ce qu’elles peuvent nous dire sur la dynamique ou les comportements transitoires des protéines individuelles. C’est ce que les techniques monomoléculaires sont vraiment bien adaptées à l’étude, et c’est pourquoi leur utilisation se développe dans le domaine.

Notre protocole de visualisation en direct du déroulement de l’ADN décrit une plate-forme qui peut être construite et modifiée pour étudier différents aspects de la réplication de l’ADN. Il peut fournir une meilleure compréhension du mécanisme moléculaire de l’activité de la CMG en présence de composants ribosomiques choisis et d’un stress réplicatif. Pour comprendre les systèmes complexes en jeu lors de la réplication de l’ADN, nous isolons des protéines clés et visualisons leur comportement en temps réel in vitro.

Les connaissances que nous obtenons contribuent à une image plus complète de la réplication de l’ADN.