CMG Helikaz ile DNA Çözmenin Tek Moleküllü Gerçek Zamanlı Görselleştirilmesi

Laboratuvarımızda, ökaryotik DNA replikasyonunun moleküler mekanizmalarını inceliyoruz. Tek molekül düzeyinde genom duplikasyonunun dinamiklerini anlamak istiyoruz. Saflaştırılmış proteinler ve Xenopus yumurtalarından elde edilen ekstrakt dahil olmak üzere birden fazla sistem kullanarak DNA replikasyonunu görselleştiriyoruz.

DNA replikasyonu hakkında bildiklerimizin çoğu toplu deneylerden, hücre görüntülemeden ve yapısal biyolojiden geldi. Bu yöntemler gerçekten güçlüdür, ancak genellikle bireysel proteinlerin dinamikleri veya geçici davranışları hakkında bize söyleyebilecekleri şeylerle sınırlıdırlar. Bu, tek moleküllü tekniklerin çalışmak için gerçekten çok uygun olduğu şeydir ve bu yüzden kullanımları bu alanda artmaktadır.

DNA çözülmesinin canlı görselleştirme protokolümüz, DNA replikasyonunun farklı yönlerini araştırmak için üzerine inşa edilebilecek ve değiştirilebilecek bir platformun ana hatlarını çizmektedir. Seçilen ribozom bileşenlerinin ve replikatif stresin varlığında CMG aktivitesinin moleküler mekanizmasının daha iyi anlaşılmasını sağlayabilir. DNA replikasyonu sırasında rol oynayan karmaşık sistemleri anlamak için, anahtar proteinleri izole ediyor ve gerçek zamanlı davranışlarını in vitro olarak görselleştiriyoruz.

Elde ettiğimiz içgörüler, DNA replikasyonunun daha eksiksiz bir resmine katkıda bulunur.