Visualización en tiempo real de una sola molécula del desenrollado del ADN mediante CMG Helicase

En nuestro laboratorio, estamos estudiando los mecanismos moleculares de la replicación del ADN eucariota. Queremos entender la dinámica de la duplicación del genoma a nivel de una sola molécula. Visualizamos la replicación del ADN utilizando múltiples sistemas, incluidas proteínas purificadas y extracto derivado de huevos de Xenopus.

Gran parte de lo que sabemos sobre la replicación del ADN proviene de experimentos masivos, imágenes celulares y biología estructural. Estos métodos son realmente poderosos, pero a menudo están limitados en lo que pueden decirnos sobre la dinámica o los comportamientos transitorios de las proteínas individuales. Esto es para lo que las técnicas de una sola molécula son realmente adecuadas para estudiar, y es por eso que su uso está creciendo en el campo.

Nuestro protocolo para la visualización en vivo del desenrollado del ADN describe una plataforma que se puede construir y modificar para investigar diferentes aspectos de la replicación del ADN. Puede proporcionar una mejor comprensión del mecanismo molecular de la actividad de CMG en presencia de componentes ribosomales elegidos y estrés replicativo. Para comprender los complejos sistemas que entran en juego durante la replicación del ADN, aislamos proteínas clave y visualizamos su comportamiento en tiempo real in vitro.

Los conocimientos que obtenemos contribuyen a una imagen más completa de la replicación del ADN.