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Method Article
視運動性応答は、広く幼虫ゼブラフィッシュの視覚機能を評価するために使用されています。それにもかかわらず、仔魚のための標準プロトコルは、まだ大人に容易に適用されていません 1月5日。ここで、我々の研究室で確立される新しいプロトコルを使用して、成人ゼブラフィッシュのOKRを測定する方法を紹介します。
視運動反応(OKR)は、動物がその周りに回転する格子に従うことに目を振動する動作です。それは広く幼虫ゼブラフィッシュ1-5の視覚機能を評価するために使用されています。それにもかかわらず、仔魚のための標準プロトコルは、まだ成人zabrafishに容易に適用されません。ここで、我々の研究室で確立される新しいプロトコルを使用して簡単な特注の装置を成人ゼブラフィッシュのOKRを測定する方法を紹介します。私たちの装置と成人のゼブラフィッシュのOKRのステップバイステップの手順の両方がこのビデオに示されています。さらに、幼虫のOKRの測定だけでなく、大人のゼブラフィッシュの微細運動応答(OMR)試験は、またこのビデオでは実証されています。我々の実験における成人のゼブラフィッシュのこのOKRアッセイは、最大4時間まで続くことがある。成魚のビジョンシステムが操作されると、成魚に適用されるようなOKRのテストは、より効率的に視覚機能を調査するために利益になる。
蘇チーゾウと呉陰はこの論文にも同様に貢献した。
パートI:OKRの装置を構築
詳細は、ビデオのデモで示されています。
パートII:大人ゼブラフィッシュのOKR
ラボがOKR装置を構築している場合は、成人ゼブラフィッシュOKRの鍵は、魚を保持することです。このパートでは、私たちは、あなたがステップバイステップで紹介します。
私たちの装置は、前述の他の人と同様の以下の部分を構成している。円形の魚槽が外径7.0センチ、内径は6.5センチ、高7.0 cmです。魚槽の周りドラムは外直径は8.5センチ、内径は7.5センチ、高7.0 cmです。それは時計回りに20〜スピード〜分当たり70回転(rpm)と反時計回りに回転させることができます。黒と白のストライプの11サイクルは、ドラムの外側に付着したトレーシングペーパーに描かれています。光システムは、21 cmの直径の2つの円形の光のチューブで構成されています。
図1。スポンジのモデルは、この真ん中に作られた崖は、視野が守られていなかったことを確認することです。
図2。眼軸と体軸との間の角度。
a)は格子の方向は、鼻から頭の場合は、我々は、魚の体の前方に角度を定義し、負の角度であり、魚の体の角度は、正の角度、その逆(簡単なレビューのためにも文献を参照してくださいです。 6)。この図中の数字はピンのシーケンスを表します。
通常のグループ内の1つの魚からb)のOKRの解析例。一第2作は、シリーズのフレームに移し、各フレームの目の角度はイメージ- PRO Plusソフトウェアを用いて測定した。この図の各点は、我々が測定した各フレームを表します。
注意事項:
パートIII。幼生ゼブラフィッシュのOKR
1。メチルセルロース
長い間生き続ける間、幼虫のゼブラフィッシュは6%メチルセルロース溶液で固定化することができる。次のようにメチルセルロース溶液を準備します。
3。 OKRの手順
パートIV。アダルトゼブラフィッシュのOMR
成人ゼブラフィッシュOMRもこの装置で実施することが、ちょうど(回転速度は黒 - 白のサイクルが11の36回転、つまり、Fig.3aに示した)センター全体で泳ぐ魚を防止するために魚のチャンバー内に列を配置します。
図3。アダルトゼブラフィッシュのOMR。 (a)の白のプラスチックの列は、それ全体で泳ぐ魚を防止するための魚室の中央に置かれた。 (b)の成人ゼブラフィッシュの一致率は格子に続く。偶然の一致率は、総録音時間は以下の格子の時間の割合と定義した。 50%の値は100%が非常に良く魚の以下の格子を示しながら、魚がランダムに泳いでいることを示しています。両方の視神経が約10秒の宝石鉗子で粉砕された。 OMRの動作は、クラッシュ後にランダム水泳として登場。
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OKRの定義によれば、それは動物が自発的に回転する格子を追求する彼らの目を移動する現象である。この動作は長い時間(6時間上記の例)のために実施されている場合は、目の筋肉が疲れてかもしれないとOKRは減衰されます。
成人のゼブラフィッシュOMRは他人7によって完全に記述されている。このビデオでは、私達はちょうど私達の装置を使用して、この動作...
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我々は、ゼブラフィッシュの飼育に彼女のサポートのためのさんファンシェンに感謝。これは、博士ビング胡(中国の科学アカデミー、"白仁智華"、NSFC 30870833と中国の国家基礎科学プログラム、2009CB941302)へのファンディングでサポートされています。
全ての動物実験は、科学と中国(USTC)動物資源センターと大学動物実験委員会の技術の大学が定めるガイドラインおよび規制に準拠して実施された。
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Name | Company | Catalog Number | Comments |
Methylcellulose | Sigma-Aldrich | M6385 | Viscosity 25 cP |
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