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Method Article
Risposta optocinetico è stato ampiamente utilizzato per valutare le funzioni visive di zebrafish larvale. Tuttavia, il protocollo standard per il pesce larvale non è ancora facile applicazione negli adulti 1-5. Qui, vi presentiamo come misurare l'okr di zebrafish adulti utilizzando un nuovo protocollo di cui è stabilito nel nostro laboratorio.
Risposta optocinetico (okr) è un comportamento che un animale vibra i suoi occhi per seguire un reticolo di rotazione intorno ad esso. E 'stato ampiamente utilizzato per valutare la funzionalità visiva del larvale zebrafish 1-5. Tuttavia, il protocollo standard per il pesce larvale non è ancora facilmente applicabile nel zabrafish adulti. Qui, vi presentiamo come misurare l'okr di zebrafish adulti con la nostra semplice custom-built apparecchi che utilizzano un nuovo protocollo che è stabilito nel nostro laboratorio. Entrambi i nostri apparecchi e passo-passo procedura di okr in zebrafish adulti sono illustrate in questo video. Inoltre, le misure del okr larvale, così come la risposta optomotor (OMR) prova di zebrafish adulti, sono anche dimostrato in questo video. Questo test okr di zebrafish adulti nel nostro esperimento può durare fino a 4 ore. Prova ad okr applicata nei pesci adulti potranno beneficiare di indagine funzione visiva in modo più efficiente quando il pesce sistema adulti visione è manipolata.
Su-Qi Zou e Wu Yin contribuito in maniera uguale a questo articolo.
Parte I: Costruire l'apparato okr
I dettagli sono mostrati in video dimostrativo.
Parte II: okr di adulti Zebrafish
Se il vostro laboratorio ha costruito un apparato okr, la chiave di adulti zebrafish okr è quello di tenere il pesce. In questa parte, noi vi mostrerà passo dopo passo.
Il nostro apparato compone seguenti parti simili ad altri menzionati. La camera di pesce circolare è 7,0 cm di diametro esterno, 6,5 cm di diametro interno e 7,0 cm in alto. Il tamburo intorno camera di pesce è di 8,5 cm di diametro fuori, 7,5 cm di diametro interno e 7,0 cm in alto. Si potrebbe ruotare in senso orario e antiorario con la velocità da 20 ~ 70 rotazioni al minuto (rpm). Undici cicli di strisce bianche e nere sono disegnate su una carta da lucido che hanno aderito sulla parte esterna del tamburo. Il sistema di illuminazione è costituito da due tubi cerchio di luce in 21 cm di diametro.
Figura 1. Il modello di spugna. La scogliera fatti in questo centro è quello di assicurarsi che il campo visivo non era stato riparato.
Figura 2. L'angolo tra asse dell'occhio e l'asse del corpo.
a) Quando la direzione del reticolo è nasale-to-temporali, abbiamo definito l'angolo al davanti del corpo di pesce è un angolo negativo e l'angolo al corpo di pesce è un angolo positivo, viceversa (per breve rassegna anche vedere rif. 6). I numeri in questa figura rappresenta la sequenza di pin.
b) analisi okr esempio da un pesce in gruppo normale. Una di un secondo film è stato trasferito in una serie di cornici e gli angoli degli occhi di ogni frame è stata misurata con Image-Pro Plus software. Ogni punto in questa figura rappresenta ogni fotogramma abbiamo misurato.
Note:
Parte III. Okr larvali di Zebrafish
1. Metilcellulosa
Zebrafish larvale può essere immobilizzato in una soluzione di metilcellulosa al 6%, mentre tenere in vita per molto tempo. Preparare la soluzione di metilcellulosa come segue.
3. Procedura di okr
Parte IV. OMR di adulti Zebrafish
Adulto zebrafish OMR potrebbe anche essere condotta con questo apparecchio, è sufficiente posizionare una colonna nella camera di pesce per prevenire pesci che nuotano sul centro (mostrato in Fig.3a, la velocità di rotazione è di 36 giri al minuto, in bianco e nero cicli sono 11).
Figura 3. OMR di Zebrafish adulti. (A) Una colonna bianca di plastica è stato posto al centro della camera di pesce per prevenire pesci che nuotano attraverso di esso. (B) Il tasso di coincidenza di zebrafish adulti dopo la grata. Il tasso di coincidenza è stata definita come la percentuale di tempo reticolo di seguito per il tempo di registrazione totale. Il valore del 50% indica che il pesce nuota in modo casuale, mentre al 100% indica la griglia seguente pesce molto bene. Entrambi i nervi ottici sono stati schiacciati con una pinza gioielli circa 10 secondi. Il comportamento di OMR è apparso come una piscina casuale dopo cotta.
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Secondo la definizione di okr, è un fenomeno che gli animali muovere gli occhi di perseguire un reticolo rotante spontaneamente. Se questo comportamento è stato condotto per lungo tempo (per esempio oltre 6 ore), i muscoli oculari possono essere stanchi e la okr sarà attenuato.
Adulti zebrafish OMR è stato descritto completamente da altri 7. In questo video, che abbiamo appena ti mostrano questo comportamento con il nostro apparato. Una volta che i nervi ottici sono schiacciat...
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Ringraziamo la signora Fan Shen per il suo sostegno per l'allevamento zebrafish. Ciò è supportato da finanziamenti al Dr. Hu Bing (Accademia Cinese delle Scienze, "Bai Ren Ji Hua", NSFC 30870833 e la National Science Program di base della Cina, 2009CB941302).
Tutti gli esperimenti sugli animali sono state condotte secondo le linee guida e regolamenti stabiliti dall'Università di Scienza e Tecnologia della Cina (USTC) Animal Resources Center e l'Università cura degli animali e del Comitato Usa.
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Name | Company | Catalog Number | Comments |
Methylcellulose | Sigma-Aldrich | M6385 | Viscosity 25 cP |
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