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Method Article
Optokinetischen Reaktionen waren weit verbreitet, um die visuellen Funktionen von Larven Zebrafisch zu beurteilen. Dennoch ist das Standardprotokoll für die Fischlarven noch nicht ohne weiteres anwendbar bei Erwachsenen 1-5. Hier stellen wir Ihnen, wie Sie die OKR der erwachsenen Zebrafisch mit einem neuen Protokoll, das in unserem Labor etabliert ist, zu messen.
Optokinetischen Antwort (OKR) ist ein Verhalten, dass ein Tier schwingt seine Augen auf eine rotierende Gitter um ihm zu folgen. Es wurde weithin verwendet, um die visuellen Funktionen von Larven Zebrafisch 1-5 zu bewerten. Dennoch ist das Standardprotokoll für die Fischlarven noch nicht ohne weiteres anwendbar bei erwachsenen zabrafish. Hier stellen wir Ihnen, wie Sie die OKR der erwachsenen Zebrafisch mit unserem einfachen custom-built Gerät mit einem neuen Protokoll, das in unserem Labor etabliert ist, zu messen. Sowohl unsere Apparate-und Schritt-für-Schritt-Verfahren der OKR bei erwachsenen Zebrafisch sind in diesem Video dargestellt. Darüber hinaus sind die Messungen der Larven OKR, sowie die optomotorischen Ansprechen (OMR) Test der erwachsenen Zebrafisch, auch in diesem Video demonstriert. Diese OKR-Assay von erwachsenen Zebrafisch in unserem Experiment kann für bis zu 4 Stunden dauern. Solche OKR-Test bei erwachsenen Fischen angewendet werden, um die Sehfunktion Untersuchung effizienter nutzen, wenn die erwachsenen Fische Vision-System manipuliert wird.
Su-Qi Zou und Wu Yin trugen gleichermaßen zu dieser Veröffentlichung.
Teil I: Konstruieren Sie die OKR Apparat
Details sind in Video-Demonstration gezeigt.
Teil II: OKR of Adult Zebrafisch
Wenn Ihr Lab einen OKR Apparat konstruiert hat, ist der Schlüssel der erwachsenen Zebrafisch OKR, um die Fische zu halten. In diesem Teil zeigen wir Ihnen Schritt für Schritt.
Unsere Geräte komponiert folgenden Teilen ähnlich zu anderen erwähnt. Die runde Fisch Kammer ist 7,0 cm Außendurchmesser, 6,5 cm Innendurchmesser und 7,0 cm in der Höhe. Die Trommel um Fisch Kammer ist 8,5 cm in Durchmesser, 7,5 cm Innendurchmesser und 7,0 cm in der Höhe. Es könnte im Uhrzeigersinn drehen und gegen den Uhrzeigersinn mit der Geschwindigkeit von 20 ~ 70 Umdrehungen pro Minute (rpm). Elf Zyklen von schwarzen und weißen Streifen auf einem Transparentpapier, die auf der Außenseite der Trommel eingehalten gezogen. Das Lichtsystem besteht aus zwei Kreis Leuchtstoffröhren in 21 cm Durchmesser bestehen.
Abbildung 1. Das Modell der Schwamm. Die Klippe in dieser Mitte aus ist, um sicherzustellen, dass das Gesichtsfeld nicht Geborgenheit.
Abbildung 2. Der Winkel zwischen Auge Achse und Körper-Achse.
a) Wenn die Richtung der Gitter nasal-to-zeitlich ist, definiert man den Winkel, in dem vor der Fische Körper ist ein negativer Winkel und der Winkel, in dem Fische Körper ist ein positiver Winkel, umgekehrt (für kurze Übersicht siehe auch Lit.. 6). Die Zahlen in dieser Abbildung stellen die Reihenfolge der Pins.
b) OKR Analyse beispielsweise von einem Fisch in normalen Gruppe. Eine Ein-Sekunden-Film wurde zu einer Reihe Frames übertragen und den Augenwinkeln jedes Rahmens wurde mit Image-Pro Plus-Software gemessen. Jeder Punkt in dieser Abbildung repräsentiert jedes Bild haben wir gemessen.
Notes:
Teil III. OKR der Larven Zebrafisch
1. Methylcellulose
Larven Zebrafisch kann in 6% Methylcellulose-Lösung immobilisiert werden, während für eine lange Zeit lebendig. Bereiten Methylcellulose-Lösung wie folgt.
3. Vorgehensweise des OKR
Teil IV. OMR of Adult Zebrafisch
Adult Zebrafisch OMR konnte auch mit diesem Gerät durchgeführt werden, sondern wird einfach eine Spalte in der Fisch-Kammer zur Vermeidung Fische schwimmen über Mitte (gezeigt in Abb. 3a, Drehgeschwindigkeit beträgt 36 min, schwarz-weiß-Zyklen sind 11).
Abbildung 3. OMR of Adult Zebrafisch. (A) Eine weiße Kunststoff-Säule wurde in der Mitte des Fisches Kammer zur Vermeidung Fische schwimmen über sie gelegt. (B) Das Zusammentreffen von erwachsenen Zebrafisch im Anschluss an die Gitter. Der Zufall lag der Anteil der folgenden Gitter Zeit, um die gesamte Aufnahmezeit definiert. Der Wert von 50% zeigt an, dass der Fisch nach dem Zufallsprinzip schwimmen, während 100% zeigt die Fische folgenden Gitter sehr gut. Beide Sehnerven wurden mit einem Schmuck Pinzette ca. 10 Sekunden zerkleinert. Das Verhalten der OMR erschien als eine zufällige Schwimmen nach zu vernichten.
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Nach der Definition des OKR, ist es ein Phänomen, dass die Tiere ihre Augen bewegen, um ein rotierendes Gitter spontan zu verfolgen. Wenn dieses Verhalten für eine lange Zeit (zB über 6 Stunden) durchgeführt, kann das Auge Muskeln müde werden und der OKR werden gedämpft.
Adult Zebrafisch OMR wurde komplett von anderen 7 beschrieben. In diesem Video zeigen wir Ihnen nur dieses Verhalten mit unserem Gerät. Sobald die Sehnerven zerkleinert sind, könnten sie sich nicht an dies...
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Wir danken Frau Fan Shen für ihre Unterstützung der Zebrafisch-Aufzucht. Dies wird durch Förderungen zu Dr. Bing Hu (Chinese Academy of Sciences "Bai Ren Ji Hua", NSFC 30870833 und National Basic Science Program of China, 2009CB941302) unterstützt.
Alle Tierexperimente wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften her von der University of Science and Technology of China (USTC) Animal Resources Center und der University Animal Care und Verwenden Ausschusses durchgeführt.
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Name | Company | Catalog Number | Comments |
Methylcellulose | Sigma-Aldrich | M6385 | Viscosity 25 cP |
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