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Method Article
この記事では、中大脳動脈の近位部分を表示するために時間的な頭蓋骨切除術を使用して頭蓋窓を通してラット大脳動脈を可視化するための方法を説明します(図1)。この汎用性の高い方法は、脳動脈の反応性を測定するために、薬物送達の様々な技術と組み合わせることができます。
頭蓋ウィンドウの作成 は1-3脳の皮質表面上の構造の直接可視化を可能にする方法です。このテクニックは、ラット大脳を覆う多くの場所で行うことができますが、最も簡単に容易にアクセス可能な正面または頭頂骨上クレイニエクトミを作成することにより行われる。最も頻繁に、私たちは近MCAに隣接する脳実質にエンドセリン-1の注入で発生する中大脳動脈血管径の変化を定量化する虚血性脳卒中のエンドセリン-1中大脳動脈閉塞モデルとの組み合わせでこのテクニックを使用している4、5。エンドセリン-1誘発MCAO中にMCAの近位部分を可視化するために、我々は、ラットの頭蓋骨の外側面( 図1)上の側頭骨を通して頭蓋窓を作成するための技法を使用しています。脳動脈硬無傷または硬膜切開とretraとのいずれかで可視化することができますCTED。最も一般的に、我々は、脳実質への血管収縮ペプチドの送達を伴うエンドセリン-1誘発MCAOので、可視化時に硬膜をそのままにしておく。これは、薬物送達のための可視化容器の真上に硬膜を切開する必要を回避します。このプロトコルは、同様にこの方法に関連する潜在的な落とし穴の多くを回避する方法として、段階的に脳動脈を可視化する頭蓋ウィンドウを作成する方法について説明します。
このプロトコルは、インスティテューショナルアニマルケアによって承認され、使用フロリダ大学の委員会(動物実験委員会)及び "実験動物の管理と使用に関する指針"(第8版、全米科学アカデミー、2011)に準拠していました。
材料
1。手術前のステップ
2。プリ頭蓋窓の準備
ontent ">前頭蓋ウィンドウを作成するには、ラットは、他の必要なハードウェアの注入によって、任意の実験のために準備されるべきであるし、必要な外科的処置を受ける必要があります。このプロトコルのために、我々が以前にエンドセリン-1(ET-用のガイドカニューレを移植しました1)誘起MCAO、表題の関連資料に示すように、 "ラットにおけるレーザードップラー血流計の指針と虚血性脳卒中のエンドセリン-1誘発性中大脳動脈閉塞モデル。"3。頭蓋窓の作成
ガイドカニューレや実験に必要な機器を配置した後、頭蓋窓は直接ストローク手順の間に、中大脳動脈の近位部分を可視化するために作成されます。
4。大脳動脈狭窄の記録
リアルタイム、ET-1誘発MCAOを受けているラットの画像をキャプチャする方法を示すために、10トン ">は、このプロトコルで使用されます。5。画像解析
血管径は可視MCAのどの部分を決定することができる。一例として、我々は、ET-1注射前と後の時点で血管径を測定するMCAの1分岐を使用します。 STIビデオからLLフレームはVLCメディアプレーヤー(VideoLANの)を使用して、1分間隔でキャプチャされます。
まだキャプチャされたビデオ·ショーから撮影した画像その後大脳動脈径の変化、ET-1注入が容易にこの頭蓋窓技術( 図2)を使用して理解することができる。 ET-1を注射後数分以内に、容器が収縮し始めます。最終的には血管が視覚化することが困難になり、脳組織は蒼白になるでしょう。約20分後、ET-1の効果が減少すると血管が徐々に約45分後にベースラインの直径に戻って、?...
それはマイナーな修正4,5で多くの実験のニーズを満たすように変更することができるように要約すると、この頭蓋窓調製技術は、非常に汎用性があります。例えば、我々は正常に頭蓋窓(メッカ、AP、2009年から2011年)を通じて可視化さ大脳動脈に直接焦点を当てるレーザードップラーフローメトリーを使用して、特定のMCAの分岐で脳血流を監視しています。また、硬膜切開と同様の?...
特別な利害関係は宣言されません。
この作品は、アメリカ心臓協会グレーター東南アジアアフィリエイト(09GRNT2060421)、米国医師会からとフロリダ臨床およびトランスレーショナル科学研究所の大学からの補助金によって支えられている。アダムメッカは、NIH / NINDS、NRSA博士号を取得する前の仲間(F30 NS-060335)です。ロバートRegenhardtは高血圧でフロリダ大学学際的なトレーニング·プログラム(T32 HL-083810)から博士号を取得する前のフェローシップの支援を受けた。
Name | Company | Catalog Number | Comments |
試薬の名称 | 会社 | カタログ番号 | コメント(オプション) |
吸入麻酔システム | VetEquip株式会社プレザントン、カリフォルニア州、米国 | 901806 | |
イソフルラン麻酔 | バクスター薬学、ディアフィールド、イリノイ州、アメリカ合衆国 | 1001936060 | |
小動物の定位システム | デビッド·インスツルメンツKopfは、タハンガ、CA、USA | 900 | |
非破裂耳バー、ラット | デビッド·インスツルメンツKopfは、タハンガ、CA、USA | 957 | |
ラットガス麻酔ヘッドホルダー | デビッド·インスツルメンツKopfは、タハンガ、CA、USA | 1929 | |
BAT-12マイクロプローブ温度計 | 世界プレシジョンインスツルメンツ社、サラソタ、フロリダ州、アメリカ合衆国 | BAT-12 | |
T /ポンプ、サーマルブランケット | Gaymarインダストリーズ、オーチャードパーク、ニューヨーク州、米国 | T /ポンプ、TP600 | |
Metzenbaumはさみ | 世界プレシジョンインスツルメンツ社、サラソタ、フロリダ州、アメリカ合衆国 | 501254 | |
アイリス鉗子 | 世界プレシジョンインスツルメンツ社、サラソタ、フロリダ州、アメリカ合衆国 | 15915 | |
ブルドッグクランプリトラクター | 世界プレシジョンインスツルメンツ社、サラソタ、フロリダ州、アメリカ合衆国 | 14119-G | |
10μLシリンジ26-gaugue | 世界プレシジョンインスツルメンツ社、サラソタ、フロリダ州、アメリカ合衆国 | SGE010RNS | |
ボビー、高温焼灼キット | 世界プレシジョンインスツルメンツ社、サラソタ、フロリダ州、アメリカ合衆国 | 500392 | |
ラット歯鉗子0.12 | Stotz | E1811 | |
マイクロモーターのドリル | Stoelting、ウッドデール、イリノイ、米国 | 51449 | |
0.8ミリメートルラウンドドリルいが | Roboz手術器具株式会社、ゲーサーズバーグ、メリーランド州、アメリカ合衆国 | RS-6280C-1 | |
ストルツボン縫合鉗子 | ボシュロム社、ロチェスター、NY、アメリカ | ||
ナイロン縫合糸、サイズ3.0 | オアシス、メタワ、イリノイ、米国 | MV-663 | |
綿棒 | フィッシャーサイエンティフィック、ピッツバーグ、PA、アメリカ合衆国 | 22-029-488 | |
Puralubeの眼軟膏 | フィッシャーサイエンティフィック、ピッツバーグ、PA、アメリカ合衆国 | NC0138063 | |
電動バリカン | オスター、米ロードアイランド州プロビデンス、 | 78005-301 | |
PBS中80μMの濃度に希釈し、ET-1 | アメリカンペプチド、サニーベール、カリフォルニア州、米国 | 88から1-10A | |
クロルヘキシジン、2% | Agrilabs、セントジョセフ、ミズーリ州、米国 | 1040年、牧師6月6日、NAC番号:10580322 | |
外科用顕微鏡 | ザイラー音源と製造、セントルイス、ミズーリ州、米国 | 進化xR6 | |
ソニーハンディカム | ソニー、港区、東京都 | HDR-SR11 | |
光ファイバー照明 | TechniQuip社、リヴァーモア、カリフォルニア州、アメリカ合衆国 | FO1-150 | |
VLCメディアプレイヤー | (パリ、フランス) | ||
画像Jソフトウェア | 健康、ベセスダの米国国立衛生研究所、米国マサチューセッツ州 |
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